脐血HLA-A位点PCR-SBT分型的研究

目的建立HLA—A位点等位基因的PCR-SBT高分辨分型方法，探讨DNA测序技术在脐血库样本HLA分型中的应用价值。方法利用PCR产物直接测序，对广州脐血库保存的547份脐血样本进行HLA—A位点2、3、4外显子的序列分析，由分型结果得出基因频率，与中华（上海）骨髓库北方人群、上海地区人群及德国白种人进行比较。结果采用PCR-SBT分型方法并结合分析软件确定了全部样本的HLA—A基因型，广州地区人群HLA-A等位基因以A＊110101（30．8％）最为常见，其后依次是A＊24020101／02L（16．18％）、A＊0207（11．88％）、A＊3303（9．42％）。A＊110101在广州汉族人群中出现的频率明显高于中华（上海）骨髓库北方人群，而A＊010101、A＊3001明显低于后者；在HLA-A2亚型人群中，A＊020101在广州、上海两地汉族人群中的频率明显低于德国白种人，而广州汉族人群中A＊020101与A＊0206均明显低于上海汉族人，但A＊0203明显高于后者。结论基于核酸序列测定的HLA分型技术能够直接、准确、快速地进行高分辨分型，将有助提高无亲缘关系供者脐血移植的临床效果。改进实验条件、升级分型软件，可以降低试剂成本和节约时间。     

丙泊酚用于人工流产术的效果观察

人工流产术的手术操作，宫颈扩张等机械性刺激易引起迷走神经的兴奋，释放大量乙酰胆碱，表现为心动过缓、心律紊乱、血压下降、面色苍白、大汗淋漓、呕吐、头晕、胸闷等症状，又称“人流综合征”，常使患者难以忍受。为消除受术者精神紧张的因素，故术前解除顾虑十分必要，应给予适当镇静、镇痛剂。     

HLA2个位点不合无关供者脐血移植治疗急性淋巴细胞白血病成功一例

患儿 ,男 ,4岁。因发热、进行性面色苍白、乏力、双下肢疼痛 18ｄ入院。确诊为急性Ｂ淋巴细胞白血病 (Ｂ ＡＬＬ ,高危 )Ｌ1型 ,血型为ＡＢ型。予ＣＯＤＰ Ｌ(Ｏ :长春新碱 ,Ｄ :柔红霉素 ,Ｃ :环磷酰胺 ,Ｐ :泼尼松 ,Ｌ :左旋门冬酰胺酶 )方案诱导缓解 ,ＣＯＡＰ(Ａ :阿糖胞苷 )、ＶＤＬＰ(Ｖ :长春新碱 )巩固治疗 ,ＭＴＸ 6 ＴＧ(甲氨蝶呤 硫鸟嘌呤 )维持治疗。 1995年 5月再次发热、双下肢疼痛 ,骨髓检查证实复发。再予ＶＩＬＰ(Ｉ:腺嘌呤核苷二醛 )方案诱导缓解、ＣＡＴ(Ｔ :硫鸟嘌呤 ) 大剂量ＭＴＸ ＶＩＬＰ方案巩固 ,ＭＴＸ 6 …     

脐血CD34+细胞表面粘附因子受体和趋化因子受体表达的检测

目的　检测脐血CD34 细胞表面粘附因子受体和趋化因子受体 (CXCR)表达情况。方法　取 15份新鲜和冻存脐血 ,采用流式细胞术检测脐血中CD34 细胞上CD6 2L、CD2 9及CXCR4等受体的表达情况。结果　 15份脐血CD34 细胞中CD6 2L表达率为 (74.0 7± 2 3.42 ) % ,CD2 9表达率为 (93.45± 10 .35 ) % ,CXCR4表达率为 (5 5 .73± 17.73) % ;三者平均表达强度分别为为 178.78±76 .5 9,15 6 .17± 6 4.6 1,5 6 .82± 2 6 .90。结论　与其它文献报道比较 ,脐血与骨髓、外周血CD34 细胞上述受体表达存在显著差异 ,这可能是导致脐血移植造血恢复慢的原因     

放疗物理师的职责、技术能力标准及质保工作

本文对放疗物理师的工作范围,从从业人员的职责、技术能力标准及质保工作等方面内容进行探讨。     

糖皮质激素或雄激素治疗自身免疫性卵巢早衰小鼠

目的：利用自身免疫性卵巢早衰（premature ovary failure, POF）小鼠模型,为临床采用糖皮质激素和雄激素治疗自身免疫性POF提供理论依据。方法：利用小鼠Pzp3诱发小鼠卵巢发生自身免疫反应,制作成自身免疫性卵巢早衰动物模型。选择60只模型小鼠,随机均分为3组：治疗组分别给以糖皮质激素、雄激素治疗,对照组给以注射三蒸水。以性周期的改变、血清抗透明带抗体浓度、病理学检查及免疫组织化学法检测卵巢组织中CD45阳性细胞的浸润程度作为疗效观察指标,判断分析其治疗效果。结果：性周期正常者两治疗组与对照组均存在显著差异（P＜0.01）。两治疗组小鼠血清抗透明带抗体平均浓度均明显低于对照组（P＜0.01）;糖皮质激素组明显高于雄激素组（P＜0.01）。两治疗组小鼠组织学检查生长卵泡比例均明显高于对照组（P＜0.01）。两治疗组小鼠CD45阳性细胞浸润的比例均明显低于对照组（P＜0.01）。结论：糖皮质激素和雄激素均能显著改善自身免疫性卵巢早衰小鼠的病情,二者的治疗效果相似。     

定量荧光PCR技术产前检测21三体嵌合体二例

目的报道采用多重定量荧光PCR（QF-PCR）方法在产前诊断中检测到2例21-三体嵌合体。方法采用QF-PCR方法检测21号染色体的数目同时采用传统的核型分型方法检测产前羊水标本,并将二者结果进行对比。结果 QF-PCR方法可以明显看出21三体嵌合体2例,核型分析这2个标本结果为：47,XX,＋21[5]/46,XX,[45];47,XX,＋21[34]/46,XX,[66]。结论 QF-PCR方法与核型分析方法一样可以用于产前三体嵌合体检测,为遗传咨询和产前诊断提供实验依据。     

高分辨熔解曲线检测苯丙氨酸羟化酶基因突变的临床价值

目的 研究用HRM分析技术检测经典型PKU患者PAH基因突变的临床应用价值。方法采用HRM分析技术对17例经典型PKU患者PAH基因的13个外显子及外显子-内含子交界区域进行检测,并采用DNA测序验证HRM检测结果。同时评价HRM诊断PKU的敏感度和特异度。另外,对其中2个家系的风险胎儿进行产前诊断。结果采用HRM分析技术从17例经典型PKU患者中检出有2个致病突变的患者16例,检出有3个致病突变患者l例。同时检出194V(c.280A＞G)、IVS4nt-1G＞A(c.442-1G＞A)、R158Q(c.473G＞ A)、Q160X(c.478C＞ T)、W187X(c.561G＞ A)、E6nt-96A＞ G(c.611A＞ G)、G239D(c.716G＞ A)、R241C(c.721C＞ T)、R243Q(c.728G＞ A)、G247R (c.739C-＞ C)、G247V(c.740G＞ T)、R261X(c.781C ＞T)、R261Q(c.782G＞ A)、H264R(c.791A ＞G)、F302 fsX39(c.904delT)、E305K(c.913G＞ A)、G312V(c.935G＞ T)、Y356X(c.1068C＞A)、V399V (c.1197A ＞T)、R408Q(c.1223G＞ A)、T418P(c.1252A ＞C)、A434D(c.1301C＞ A) 22种致病突变;Q232Q(c.696G＞A)、V245V(c.735G＞ A)、L385L(c.1155C＞G)3种沉默突变;1种单核苷酸多态点rs2280615(c.402A＞ C)。其中194V(c.280A＞ G)、Q160X(c.478C＞ T)、H264R(c.791A ＞G)、G312V (c.935G＞T)和E305K(c.913G＞ A)为PAH基因新发现的突变。2例风险胎儿经产前诊断,1例未发现致病突变,1例诊断为携带者。HRM突变筛查经典型PKU的敏感度和特异度均为100％,其检测结果与DNA测序结果完全一致。结论HRM分析技术是一种简单、准确、快速、高通量、低成本的遗传学分析方法,可用于经典型PKU的PAH基因突变筛查,并可用于已知父母突变的经典型PKU家系快速产前诊断。     

抗流感病毒性肺炎的有效中药复方筛选及机制研究

目的:将免疫学原理应用于流感病毒性肺炎的制备,从而筛选出有效防治流感病毒性肺炎的中药复方,并进一步探讨该复方的作用机制。方法:淤用浓度为75 mg/ (kg•d)的免疫抑制剂短暂抑制小鼠免疫功能再进行A 型流感病毒滴鼻感染,实验设多组中药复方组,同步设奥司他韦组、模型组以及正常组,灌胃给予相应的临床等效剂量药物7 d 后,处理动物,进行指标检测,筛选出有效中药复方。于建立流感病毒性肺炎模型,实验设麻杏石甘汤的低、中、高剂量组,奥司他韦组、模型组和正常组,灌胃给予相应临床等效剂量药物7 d 后,处理动物,进行指标检测。结果:淤麻杏石甘汤、小柴胡汤、葛根汤,银翘散等中药复方中对小鼠肺炎均有一定的疗效,其中以麻杏石甘汤最为突出,可显著减轻肺部炎症等。于麻杏石甘汤可以改善小鼠的一般状况、肺部炎症和调控细胞因子的表达,上调脾指数,其中麻杏石甘汤中、高剂量组总体治疗效果更为显著。结论:免疫抑制的流感病毒性肺炎小鼠模型在筛选抗流感病毒性肺炎的中药复方中具有较好的实验研究价值,筛选出来的麻杏石甘汤作为有效的抗流感病毒性肺炎的中药复方,其可能的作用机制是通过提高机体的免疫功能,调节细胞因子的表达和分泌,从而减轻肺部炎症,改善小鼠的一般状况。     

幽门螺杆菌临床分离株尿素酶基因B的原核表达、纯化及免疫活性

目的:在大肠杆菌中表达幽门螺杆菌临床分离株尿素酶B(UreB),纯化重组蛋白并分析其免疫活性.方法:将pGEX-4T-1-UreB重组菌BL21复舒,挑单菌落接种于含氨苄的LB培养基中.0.5 mmoL异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组融合蛋白的表达,使用纯化的重组蛋白免疫小鼠.ELISA检测血清抗体效价,并使用感染患者血清进行Western-blotting鉴定重组蛋白反应原性.结果:SDS-PAGE示在约87 kD相应分子量可见融合蛋白表达,产物主要在表达上清以可溶形式存在,纯化蛋白免疫小鼠能诱导产生特异性体液免疫应答,ELISA检测特异性IgG效价为1:51 200.Western blotting示重组蛋白能被幽门螺杆菌感染患者血清识别.结论:UreB在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物具有较好的免疫原性及反应原性.