三氯乙烯药疹样皮炎患者肿瘤坏死因子α-857C/T基因多态性研究

目的从肿瘤坏死因子α(TNFα)基因-857位点多态性角度探讨三氯乙烯药疹样皮炎易感的遗传背景。方法采用TaqManMGB探针,建立TNFα-857C/T位点实时定量聚合酶链反应分型方法。用该方法对三氯乙烯药疹样皮炎组(47例)及对照组(53例)进行-857nt(C/T)位点分型,比较病例组与对照组之间各基因型及等位基因频率是否有差异。结果TNFα-857C/T多态的基因型及等位基因频率在三氯乙烯药疹样皮炎组及对照组差异无显著性(P>0.05)。结论TNFα-857C/T位点多态可能不是中国人群三氯乙烯药疹样皮炎的风险因子。     

广东汉族群体Y染色体DYF155S1基因座3′端多态性研究

[目的]揭示广东汉族人群 Y染色体小卫星 DYF155S1基因座 3′端多态性.[方法]采用 Amp- FLP和荧光 MVR- PCR方法扩增, PCR产物用 ABI377电泳或中性聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染方法分析.[结果] 155例无关男性个体的 4型核心序列 MVR图谱第 1条 DNA片段大小均为 133 bp.155例共检出有 24种等位基因,有 7个等位基因仅出现 1次,频率最高的为 9号等位基因, DNA条带数为连续的 13个,频率为 0.135 5;基因多样性( h)为 0.922 6.155人中有 3人表现为连续 DNA谱带中有 1个 DNA条带的缺失 ( null repeat),序列分析证明缺失的 DNA条带位置对应于 3型核心序列.[结论]揭示了 DYF155S1位点 3′端多态性及其等位基因频率,为群体遗传学研究及法医学应用提供了基础资料.     

深圳市脑卒中发病与气温关系

目的探讨周平均温度与脑卒中发病的关系。方法采用时间序列的广义相加模型(GAM)建模原理,对2003年1月～2005年12月深圳市脑卒中发病与气象资料进行非参数拟合,在控制长期趋势、季节趋势和周平均湿度以后,分析周平均温度与脑卒中发病人数的关系。结果2003～2005年,深圳市脑卒中发病15434例,每周平均(99.00±29.56)例,男性周平均发病(59.52±17.93)例,女性周平均发病(39.42±13.86)例;<65岁周平均发病(54.18±18.00)例,≥65岁周平均发病(44.76±13.72)例。控制长期趋势、季节趋势和周平均湿度等因素影响后,低温是诱发深圳市脑卒中发病的主要气象因素,发病随温度降低而升高。分层分析发现,低温对女性或<65岁者脑卒中发病的影响更大,而男性脑卒中发病与气温降低未见明显影响。结论深圳市脑卒中发病与周平均气温存在线性关系,发病的相对危险度随温度降低而增加;在数据不满足参数拟合条件时,广义相加模型能有效地发现疾病与气象条件的内在关系。     

低剂量过氧化氢诱导机体适应性反应差异表达基因的研究

目的寻找低剂量过氧化氢(H2O2)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)适应性反应差异表达的基因。方法用溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率得到H2O2对MRC-5毒性的剂量反应关系,分别用低剂量、高剂量和低剂量预刺激后用高剂量攻击细胞,观察细胞生长的变化,得到低剂量H2O2诱导MRC-5的适应性反应模型。然后用荧光差异显示聚合酶链反应(FluoroDD-PCR)寻找不同方式刺激的差异表达基因。结果根据H2O2诱导MRC-5毒性的剂量反应关系,选择0.088、0.88、8.8、88μmol/L为低剂量,1100μmol/L为高剂量,用低剂量处理细胞24h,然后用高剂量刺激1h,可以观察到在0.88μmol/L预刺激细胞24h后,对继而1100μmol/L的刺激有明显的抵抗效应。对不同方式处理的细胞RNA进行FluoroDD-PCR,找到60个差异条带。对其中的15个差异条带进行克隆鉴定同源性比较,发现其中7个已知基因,8个新基因。结论H2O2可以诱导MRC-5的适应性反应过程,用FluoroDD-PCR方法找到差异表达的基因。     

嗜人按蚊rDNA—ITS2基因的克隆鉴定及SNP分析

目的克隆和分析嗜人按蚊核糖体DNA（rDNA）第2内转录间隔区（ITS2）序列，研究嗜人按蚊rDNA-ITS2序列的种属特异性及不同个体rDNA-ITS2序列的单核苷酸多态性（Single Nuclear Polymorphism，SNP）。方法用DNA提取试剂盒从嗜人按蚊中提取DNA摸板，利用蚊虫5．8s和28S序列的保守性设计特异引物进行聚合酶链反应以扩增嗜人按蚊rDNA-ITS2基因，扩增产物经回收纯化后连接到TA载体，经amp^＋LB固体平板筛选的阳性克隆。经amp^＋LB液体培养基培养后进行PCR鉴定、EcoRI酶切鉴定和序列分析。结果经PCR反应扩增出全长556bp的嗜人按蚊rDNA-ITS2基因。纯化后重组克隆经PCB鉴定可重现556bp的特异性条带，其酶切产物亦与目的基因PCR产物位置相同。嗜人按蚊6个克隆的同一性为99．6％，其rDNA-ITS2基因单核苷酸存在颠换和插入，在556的范围内有一个A→T，一个G→T的颠换；一个T的插入。结论嗜人按蚊rDNA-ITS2序列在种间高度保守，但不同个体间也存在一定的SNP多态性。     

深圳市楼村华支睾吸虫感染调查

目的了解深圳市居民华支睾吸虫感染状况、传播途径和流行特征。方法用血清免疫学筛查,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,对检出的阳性者进行粪便病原学检查;同时进行问卷调查与华支睾吸虫感染相关的生活和行为方式;现场调查华支睾吸虫病传播途径。结果共调查1473名6～65岁深圳市居民,男性710名,女性763名;有70名华支睾吸虫阳性(4．75％);男性的感染率为4．22％(30／710),女性感染率为5．24％(40／763),男女性间比较无差异;但每克粪便中的虫卵数男性高于女性,表明男性的感染强度高于女性;人群中不同年龄组表现了不同的感染率,最高感染率的年龄组主要分布在31～50岁,高于30岁以下和50岁以上年龄组;54％的被调查者不了解华支睾吸虫及其传播途径,27％的被调查者每月吃1～2次淡水生鱼片,5％的家庭使用同样的刀具处理淡水鱼和蔬菜,40％的养鱼者利用动物和人的粪便喂食鱼类。结论深圳市楼村是华支睾吸虫病流行村,居民传统嗜好生吃淡水鱼和生态养殖的生产方式是造成华支睾吸虫病流行的主要因素。     

嗜人按蚊rDNA-ITS2基因的克隆鉴定及SNP分析

目的克隆和分析嗜人按蚊核糖体DNA（rDNA）第2内转录间隔区（ITS2）序列,研究嗜人按蚊rDNA-ITS2序列的种属特异性及不同个体rDNA-ITS2序列的单核苷酸多态性（Single Nuclear Polymorphism,SNP）。方法用DNA提取试剂盒从嗜人按蚊中提取DNA摸板,利用蚊虫5．8s和28S序列的保守性设计特异引物进行聚合酶链反应以扩增嗜人按蚊rDNA-ITS2基因,扩增产物经回收纯化后连接到TA载体,经amp^＋LB固体平板筛选的阳性克隆。经amp^＋LB液体培养基培养后进行PCR鉴定、EcoRI酶切鉴定和序列分析。结果经PCR反应扩增出全长556bp的嗜人按蚊rDNA-ITS2基因。纯化后重组克隆经PCB鉴定可重现556bp的特异性条带,其酶切产物亦与目的基因PCR产物位置相同。嗜人按蚊6个克隆的同一性为99．6％,其rDNA-ITS2基因单核苷酸存在颠换和插入,在556的范围内有一个A→T,一个G→T的颠换;一个T的插入。结论嗜人按蚊rDNA-ITS2序列在种间高度保守,但不同个体间也存在一定的SNP多态性。     

缺血性脑卒中影响因素的条件Logistic回归分析

目的应用条件Logistic回归模型探讨深圳市缺血性脑卒中的危险因素,为制定相关政策和措施提供科学依据。方法采用1：1配比的病例对照研究设计,选择深圳市两家综合性医院的309例缺血性脑卒中患者为病例组,同时选择年龄、性别匹配309例健康者作为对照组,对研究因素进行单因素及多因素条件Logistic回归分析。结果高血压、吸烟、家庭压力和高血糖是缺血性脑卒中的危险因素。OR值分别为3．507、5．420、3．990和1．183;而饮茶、体育锻炼是缺血性脑卒中的保护因素,OR值分别为0．250、0．100。结论在脑卒中的社区防治中,应尽早、及时地控制高血压、吸烟和体重,同时培养健康的生活方式是预防缺血性脑卒中发生的重要措施。     

1,2-二氯乙烷对非洲绿猴肾细胞损伤机理的离体试验研究

目的　了解 1,2 二氯乙烷对非洲绿猴肾细胞的损伤及其机理。方法　采用 0 5、1 0、2 0mmol/L 3个剂量 1,2 二氯乙烷处理非洲绿猴肾细胞 (Vero细胞 ) 2 4h,并运用显微荧光术测定处理后的Vero细胞内活性氧 (ROS)含量及游离Ca2 + 浓度 ,用比色法测定Vero细胞培养上清液乳酸脱氢酶(LDH)活力。设立对照组。结果　接触 1 0、2 0mmol/L 1,2 二氯乙烷的Vero细胞内游离Ca2 + 浓度及其上清液LDH活力均高于对照组 (P <0 0 1) ,而 0 5mmol/L染毒组的Vero细胞内游离Ca2 + 浓度及其上清液LDH活力与对照组比较差异均无显著性 (P >0 0 5 )。各剂量组的Vero细胞内ROS含量与对照组比较差异均无显著性 (P >0 0 5 )。结论　较高浓度的 1,2 二氯乙烷能损伤Vero细胞 ,其损伤的可能途径是通过增加细胞内游离Ca2 + 浓度。     

中国汉族人群DYF155S1位点等位基因结构研究

[目的]为建立一种简便，实用的DYF155S1位点多态性分析技术提供依据。[方法]采用扩增片段长度多态性（Amp-FLP)方法，调查中国汉族人群155个无关男性个体DYF155S1位点长度的变异情况。PCR扩增产物用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染显示条带，用循环测序法对该位点的10个等位基因进行正向和反向序列分析。[结果]以基因组DNA为模板用一对引物可同时扩增出DYF155S1和DYF155S22个位点的等位基因。DYF155S1位点表现出有长度多态性，这些等痊基因约1500-2500bp。DYF155S2位点表现出有或缺失的二态现象，缺失率约为7.1%。发现有4种变异的核心序列。其中3种与献报道一致，被命名为1型，3型和4型，另一种为新发现的变异核心序列，斩命名为7型。10个等痊基因具有相同的模块结构。在5′端表现为3型-1型-3型排列，在3′端则表现为4型-3型排列。[结论]中国汉族人群DYF155S1位点5′端序列较3′端的多态性高。