缺血性脑卒中影响因素的条件Logistic回归分析

目的应用条件Logistic回归模型探讨深圳市缺血性脑卒中的危险因素，为制定相关政策和措施提供科学依据。方法采用1：1配比的病例对照研究设计，选择深圳市两家综合性医院的309例缺血性脑卒中患者为病例组，同时选择年龄、性别匹配309例健康者作为对照组，对研究因素进行单因素及多因素条件Logistic回归分析。结果高血压、吸烟、家庭压力和高血糖是缺血性脑卒中的危险因素。OR值分别为3．507、5．420、3．990和1．183；而饮茶、体育锻炼是缺血性脑卒中的保护因素，OR值分别为0．250、0．100。结论在脑卒中的社区防治中，应尽早、及时地控制高血压、吸烟和体重，同时培养健康的生活方式是预防缺血性脑卒中发生的重要措施。     

氯仿对非洲绿猴肾细胞损伤机理的研究

目的　实验研究氯仿染毒 2 4h对非洲绿猴肾细胞的损伤及其机理。方法　运用显微荧光术测定了非洲绿猴肾细胞 (Vero细胞 )内活性氧 (ROS)含量及游离Ca2 + 浓度 ,同时 ,测定Vero细胞培养上清液乳酸脱氢酶(LDH)活力用于检查Vero细胞受损情况。结果　接触浓度为 4 0mmol L氯仿的Vero细胞内ROS含量及游离Ca2 +浓度与对照组比较无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,同时 ,表示Vero细胞受损指标 (LDH活力 )也无显著性差异 (P >0 0 5 ) ;而接触浓度为 8 0mmol L、12 0mmol L氯仿的Vero细胞内ROS含量显著高于对照组 (P <0 0 1) ,其Vero细胞受损也显著增加 (P <0 0 5、P <0 0 1)。结论　较高浓度的氯仿能损伤Vero细胞 ,其损伤的可能途径是通过提高Vero细胞内ROS含量     

CYP2E1和CYP1A1及白细胞介素-4基因多态性与三氯乙烯药疹样皮炎的关系

目的 研究代谢酶基因CYP2E1和CYP1A1以及白细胞介素(IL)-4的基因多态性与三氯乙烯(TCE)药疹样皮炎易感性的关系.方法 选择35例TCE药疹样皮炎病例作为病例组,选无皮肤损害的35名健康工人作为对照组.应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和TaqMan MGB探针技术,检测病例组和对照组CYP2E1、CYP1A1和IL-4基因的单核苷酸多态性(SNP),计算病例组和对照组的基因型与等位基因型频率.结果 CYP1A1基因(rs1048943)的SNP多态性检测结果显示,病例组G等位基因频率(37.1%)明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);检测发现,病例组CYP2E1基因-1053 C→岬位点T等位基因频率(41.4%)明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);对IL4基因588 C→岬位点(rs2243250)检测发现,病例组TT纯合突变频率(75.0%)明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01),T等位基因频率(87.5%)明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 CYP1A1、CYP2E1和IL-4基因的某些位点的改变可能与少数TCE敏感个体对接触TCE引起的超敏反应存在密切关系,CYP1A1、CYP2E1和IL-4的基因多态性可能是TCE药疹样皮炎患者易感性差异相关的遗传学因素之一.     

H7N9病毒诱导宿主HA抗体产生的特异性及交叉反应

目的揭示人感染H7N9宿主血清HA抗体的产生及与其他HA亚型的交叉反应特性。方法生物公司合成各亚型HA蛋白胞外域核苷酸序列,并克隆到改造过的p CDNA3.1载体上构建表达质粒。采用哺乳动物细胞表达体系表达C端带标签的H1、H3、H5和H7重组HA蛋白。用抗标签的抗体捕获293T细胞转染上清中的HA蛋白。用建立的ELISA法检测22例H7N9感染者血清抗体与蛋白H1、H3、H5、H7(2013)和H7(2017)的结合反应,同时设H1N1感染组及健康对照组。结果成功构建H1、H3、H5和H7重组HA蛋白表达质粒,表达蛋白大小约72 000~100 000Mr。在检测的22例34份H7N9感染血清,对2013年及2017年分离的H7N9病毒株的HA蛋白均有显著结合[OD值=(1.85±0.27)、(1.54±0.27)],与健康对照组及H1N1组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。同时H7N9血清组与组1的H1、H5有交叉反应,OD值分别为(1.53±0.49)和(0.92±0.53),与健康对照组比较差异有统计学意义(P0.05),与组2的H3有交叉反应[OD值=(2.09±0.22)],与健康对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。而健康对照组与H1、H3有一定的结合反应,与H5、H7几乎不结合。结论人感染H7N9病毒诱导的宿主血清HA抗体不仅与H7N9结合且与其他亚型HA蛋白有高度交叉反应,为广谱中和抗体的筛选及疫苗的研发提供了依据。     

实时RT-PCR基因表达相对定量REST~软件分析与2~((-ΔΔCT))法比较

目的利用实时RT-PCR技术建立一种简便、准确的基因表达相对定量方法。方法以正常的人支气管上皮细胞株(16HBE)cDNA为模板5倍系列稀释,分别作DNA聚合酶K(POLK)和磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因标准曲线。以不同剂量反式二羟环氧笨并芘(anti-BPDE)诱导的16HBE、anti-BPDE转化的16HBE及肺癌细胞株(H1299)cDNA为模板,进行实时定量RT-PCR。以GAPDH基因作为内参照,进行POLK基因表达相对定量。实验数据分别采用2(-ΔΔCT)法及REST软件分析。结果5倍系列稀释法制作的标准曲线,呈现较好的线型关系(Rsq0.997)。POLK及GAPDH基因扩增效率分别为117.5%和103.5%。采用2(-ΔΔCT)法计算出的表达比值均比REST软件分析高。结论实时RT-PCR技术结合REST软件分析是一种简便、准确的基因表达相对定量分析手段。     

广东汉族群体Y染色体DYF155S1基因座3''''端多态性研究

【目的】揭示广东汉族人群Y染色体小卫星DYF155S1基因座3'端多态性。【方法】采用Amp-FLP和荧光MVR-PCR方法扩增,PCR产物用ABI377电泳或中性聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染方法分析。【结果】155例无关男性个体的4型核心序列MVR图谱第1条DNA片段大小均为133bp。155例共检出有24种等位基因,有7个等位基因仅出现1次,频率最高的为9号等位基因,DNA条带数为连续的13个,频率为0.1355;基因多样性(h)为0.9226。155人中有3人表现为连续DNA谱带中有1个DNA条带的缺失(nullrepeat),序列分析证明缺失的DNA条带位置对应于3型核心序列。【结论】揭示了DYF155S1位点3'端多态性及其等位基因频率,为群体遗传学研究及法医学应用提供了基础资料。     

低剂量的甲醛诱导MRC5损伤耐受差异表达基因的研究

目的　用荧光差异显示PCR(fluoroDD PCR)方法寻找低剂量的甲醛(FA)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC 5 )损伤耐受差异表达的基因。方法　用MTT方法得到FA对MRC 5毒性的剂量-反应关系。根据剂量-反应关系选择对MRC 5几乎没有损伤或有增殖的剂量作为低剂量,对细胞有明显损伤的剂量为高剂量,然后用低剂量、高剂量、损伤耐受模式(低剂量预刺激后继而用高剂量刺激)三种方式处理细胞,通过荧光差异显示PCR技术寻找不同处理组与对照组比较差异表达的基因。对其中的11个差异条带进行二次PCR、克隆、测序,在GeneBank上通过Blast鉴定基因。结果　根据FA对MRC 5毒性的剂量-反应关系,选择10 0 μmol L为低剂量、10mmol L为高剂量。然后按方法中所述的方式处理细胞后,用荧光差异显示PCR的方法发现有6 1个差异表达的基因。对其中的11个差异条带进行鉴定,发现有2个已知基因,分别与nuclearfactorofactivatedT cells 5 (NFAT5 )和tetratricopeptiderepeatdomain 3(TPRD 3)高度同源,其余9个为新基因。结论　FA在低剂量可以促进MRC 5的增殖,通过荧光差异显示PCR获得6 1个FA诱导MRC 5损伤耐受差异表达的基因,通过对其中11个差异条带的鉴定,为进一步研究FA诱导MRC 5损伤耐受的机制提供线索。     

等位基因测序的简便快速方法

[目的]探索一种简便快速的等位基因测序方法.[方法]用银染方法对待检个体的血样本进行简短串联重复(shorttandemrepeat,STR)基因分型,将需测序的等位基因条带从凝胶图上切下,PCR扩增,产物经纯化作为测序模板.采用循环测序法测序.[结果]对D12S391、D11S554STR基因座的等位基因Ladder及STR基因座(FGA、D12S391、D11S554)等位基因发生突变的19个家系的等位基因进行了测序.STR分型表现为杂合子或纯合子的等位基因用此方法测序都得到了清晰的信号.[结论]此方法不仅给等位基因测序提供了一种有效手段,而且对于只要能利用电泳分离的混合的DNA片段,就能用此方法将各DNA片段分别测序.     

应用BrdU-ELISA法检测化学物皮肤致敏性研究

目的研究应用BrdU-ELISA法检测化学物皮肤致敏性。方法将受试物2，4-二硝基氯苯（DNCB）、三氯乙烯（TCE）、三氯乙酸、抗菌冻胶对小鼠双耳背皮肤进行涂抹，25μl／耳，连续染毒3d，第4天每只小鼠腹腔注射BrdU标记液（0．3ml／只）。第5天取小鼠耳部淋巴结称重，然后制成单细胞悬液，应用BrdU-ELISA法检测淋巴细胞增殖。同时应用豚鼠局部封闭涂皮法检测受试物的致敏性。结果DNCB、TCE各浓度组与AOO溶剂对照组BrdU标记值比较，差异均存在统计学意义（P〈0．01），DNCB各浓度组与AOO溶剂对照组淋巴结重量比较，差异均存在统计学意义（P〈0．01），而TCE各浓度组与AOO溶剂对照组淋巴结重量比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。抗菌凝胶组与三氯乙酸分别与空白对照组比较，其中抗菌凝胶组、1％、5％三氯乙酸BrdU标记值差异均无统计学意义，10％三氯乙酸差异则存在统计学意义（P〈0．05）。结论BrdU-ELISA法具有检测化学物皮肤致敏性的能力，但其灵敏性比标准LLNA和传统豚鼠局部封闭涂皮法差，需要进一步优化实验方法。     

深圳市白纹伊蚊rDNA ITS2区克隆及SNP分析

目的 克隆和序列分析深圳市白纹伊蚊核糖体DNA（rDNA）第2内转录间隔区（ITS2），并探明其rDNA ITS2核酸的特异性及不同个体在rDNA ITS2区的单核甘酸的多态性（sinde Nuclear Polymorphism。SNP），以便利用ITS2基因的高度保守I匿及其蚊媒不种群在ITS2片段的多态性束分子鉴别白纹伊蚊。方法 PCR特异扩增白纹伊蚊rDNA ITS2，利用QIAquick技术从琼脂糖胶上回收纯化扩增的目的ITS2DNA片段，纯化后的目的ITS2DNA片段被连接到TA载体上，在含有青霉素的琼脂糖胶平面上筛选舍目的ITS2DNA片段的阳性克隆，阳性克隆经含有青霉素的LB液体培养基培养，用Ultrapure^TM质粒提取试剂盘提取克隆质粒，用双酶切鉴定插入的片段大小，DNA序列分析仪分析每个蚊rDNArrs2的序列，用生物信息系统进行白纹伊蚊rDNAITS2SNP的差异分析。结果 518bp全长的深圳市白纹伊蚊rDNAITS2被克隆和序列分析．深圳市四个不同地理的白蚊伊蚊rDNAITS2的同一性为97％，而两个地方之间的比较有99％的同一性，其rDNAITS2基因单核苷酸存在转换、颠换和缺失，在518bp的范围内有6个C→T，2个A→G的转换，3A→Ts一个A→C的颠换。3个CG和一个AC缺失。结论 白蚊伊蚊rDN AITS2有高度的保守性，不同个体也表现了单核苷酸的多态性。