一种多器官功能障碍综合征模型的建立

目的建立既符合临床特征、又简便易行的标准大鼠多器官功能障碍综合征(MODS)模型.方法用人为方法使大鼠失血0.5～0.7ml、两后肢粉碎性骨折合并软组织挫裂形成严重复合伤,以诱发MODS;参照临床标准提出大鼠的实验诊断标准;观察并检测84只大鼠和16只对照大鼠在创伤8、24和48 h后生化和病理变化.结果大鼠创伤24 h后,肌酐、肌酸磷酸激酶、乳酸脱氢酶、羟丁酸脱氢酶和谷丙转氨酶浓度分别达到(140.3±34.4)mol/L、(14 318.0±2 128.9)U/L、(2 373.7±274.9)U/L、(1 179.5±284.9)U/L和(298.2±40.6)U/L的最高值,与对照组相比差异具有非常显著性(P＜0.01);48 h后病理变化最明显.创伤后24 h的大鼠MODS处于若干脏器功能衰竭早期伴若干脏器功能受损期.结论本研究的复制方法是成功的,复制的MODS模型适于创伤及其药物筛选研究.     

猕猴自体骨髓干细胞移植治疗急性肝损伤的实验研究

目的探讨自体骨髓干细胞肝门静脉移植对猕猴急性肝损伤的治疗作用和为人类肝损伤治疗提供依据和方法。方法猕猴10只,随机分为实验组和对照组,每日皮下注射40?L40.8ml/kg,连续注射4d,经肝功能生化指标检测及肝穿组织病理学观察确认肝损伤后,分离实验组猴的自体骨髓单个核细胞,按3×108细胞/kg将骨髓细胞植入肝门静脉,植入后60d进行肝功能相关指标检测及组织病理学观察。结果连续注射CCL44d后,血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、球蛋白(GLOB)(P<0.001),而总蛋白(TP)和白蛋白含量无变化(P>0.05),肝组织结构紊乱,大量肝细胞坏死,部分细胞变性,水肿,汇管区及周围有大量炎性细胞浸润。骨髓细胞肝门静脉移植后60d,血清AST、ALT活性和GLOB、BIL含量显著低于对照组(P<0.05),而TP、ALB、LDL含量高于对照组(P<0.05),病理组织学观察结构清楚,而对照组有纤维增生和肝细胞有脂肪变性。结论自体骨髓细胞肝门静脉移植能对猕猴急性肝损伤有明显治疗作用,可改善急性肝损伤猕猴的肝功能及组织结构,提示该方法可能对人类急性肝损伤有一定治疗意义。     

三七总皂甙、大鼠高胆固醇血清对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：为观察tPNS对HCS刺激的VSMC增殖的影响。方法：通过MTT法和电镜观察法，观察了tPNS对VSMC的保护作用。结果：HCS可明显刺激VSMC增殖并导致其表型的改变，tPNS可呈浓度依赖性抑制VSMC的增殖（r=-0.972)，与对照组相比具显著差异；tPNS还可明显抑制HCS对VSMC的刺激增殖作用，与HCS组相比具有显著差异。结论:tPNS可抑制VSMC增殖而抗动脉粥样硬化，这种抑制作用没有种属差异性。     

代谢综合征动物模型的研究进展

代谢综合征(MS)是一组涉及多种代谢疾病的临床综合征,可导致严重的心脑血管疾病。MS相关模型的建立对深入研究MS对心脑血管疾病的影响具有十分重要的意义。目前MS的动物模型包括遗传性模型、诱发性模型以及转基因和基因剔除性模型三类。三类模型均具有MS的特点,具有各自的优缺点,但与人类MS的实际情况仍有一定的差距。     

纯化和标记抗人轻链β2m单克隆抗体的方法

背景: 通过杂交瘤细胞株接种小鼠腹腔可获得含大量抗体的腹水,但以往纯化腹水中单克隆抗的方法较复杂,不易操作。 目的：制备、纯化和标记抗人类白细胞抗原Ⅰ类分子轻链的单克隆抗体,以检测肿瘤细胞表面的人类白细胞抗原Ⅰ类分子的表达。 方法：将杂交瘤细胞接种至小鼠腹腔,获得含抗人轻链β2m抗体的腹水,用改良的辛酸-硫酸铵方法纯化腹水,将纯化后的单克隆抗体标记异硫氰酸荧光素(FITC),标记后的抗体用于检测外周血单个核细胞、表达空载人类白细胞抗原A2分子的T2细胞和白血病K562细胞表面的人类白细胞抗原Ⅰ类分子,并用流式细胞仪和荧光显微镜观察人类白细胞抗原Ⅰ类分子的表达。 结果与结论：纯化后的抗人轻链β2m-FITC单克隆抗体纯度为96%。流式细胞检测结果表明,人类白细胞抗原Ⅰ类分子在外周血单个核细胞表面高表达,在表达空载人类白细胞抗原A2分子的T2细胞表面低表达,而在白血病K562细胞表面不表达。结果证实,用改良的辛酸-硫酸铵方法纯化腹水以此制备的抗人轻链β2m-FITC能有效区别不同细胞表达人类白细胞抗原Ⅰ类分子的强弱,其纯化方法简便易行。     

干细胞移植治疗糖尿病肾病

背景:糖尿病肾病所致的终末期肾病已成为慢性肾功能衰竭的主要原因,传统的血液透析和肾脏移植已无法满足临床治疗的需求,以干细胞为基础的再生医学研究有可能为糖尿病肾病的治疗带来新的希望。目的:综合分析不同来源干细胞治疗糖尿病肾病的机制及临床研究进展。方法:应用计算机检索CNKI和PubMed数据库中2006年1月至2011年8月关于干细胞治疗糖尿病肾病的文章,在标题和摘要中以"胚胎干细胞;骨髓间充质干细胞;诱导性多能干细胞;糖尿病肾病"或Embryonic stem cells;Bone marrow mesenchymal stem cells;induced poluripotent stem cells;induced multipotent stem cells;diabetic nephropathy"为检索词进行检索。最终选择26篇文章进行综述。结果与结论:胚胎干细胞、骨髓间充质干细胞、诱导性多能干细胞均具有向肾脏组织细胞分化的潜能,大量研究表明干细胞移植对肾脏损伤和修复具有积极的作用。通过对干细胞相关特性的描述和相关机制的研究,干细胞移植有可能为糖尿病肾病提供一种新型的治疗方案。     

灯盏花素对动脉粥样硬化兔内皮素、一氧化氮、超氧化物歧化酶、丙二醛分泌水平的影响

目的观察灯盏花素对动脉粥样硬化兔内皮素、一氧化氮、超氧化物歧化酶、丙二醛分泌水平的影响。方法日本大耳白兔50只,随机分为健康组、对照组、实验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组。健康组饲喂正常的基础饲料,对照组饲喂高胆固醇饲料（由79.5%基础饲料,15%蛋黄粉,0.5%胆固醇,5%猪油混合加工而成。）,实验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组给予高胆固醇饲料的同时,每日分别肌肉注射1.53、.0和4.5 mg/kg体重的灯盏花素。3个月后分别采血测定内皮素、一氧化氮、超氧化物歧化酶、丙二醛的含量。     

不同年龄人骨髓间充质干细胞体外生长特性分析

目的建立人骨髓间充质干细胞（marrow mesenchymal stem cells，MMSCs）体外分离培养和扩增方法，观察不同年龄人MMSCs在体外培养的生长特性，为MMSCs的临床应用提供技术方法和依据。方法采集10～60岁之间的人骨髓血，密度梯度法分离出单个核细胞，利用DMEM／F12培养基添加胎牛血清进行黏附培养和扩增MMSCs，分析第3代MMSCs生长情况和形态变化，细胞计数，用MTT法观察其增殖及生长特征，免疫组化法分析MMSCs的纯度。结果10～60岁人MMSCs均贴壁生长，呈典型MMSCs形态和生长特征，传代细胞的增殖速度比原代细胞快，但随着年龄的增长，原代及传代培养MMSCs的增殖能力下降，生长周期延长，其中CD105阳性细胞均大于95％，但老年人的CD105阳性细胞比率有所降低。结论密度梯度离心结合贴壁培养法可获得高纯度MMSCs，成人MMSCs在传代培养的增殖活性随年龄增加而降低。     

成人骨髓间充质干细胞体外培养方法的建立及生长特性分析

目的 建立成人骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MMSCs)体外分离培养和扩增方法,观察MMSCs在体外培养的生物学特性,为MMSCs的临床应用奠定技术基础.方法 采集成人骨髓,密度梯度法分离单个核细胞,利用DMEM/F12培养基添加自体血清进行黏附培养和扩增MMSCs,光镜观察MMSCs生长和形态变化,计数和MTT法观察原代和传代培养的增殖及生长特征,免疫组化法分析MMSCs纯度.结果 MMSCs贴壁生长,呈典型MMSCs形态和生长特征,原代及传代5代内的MMSCs均有活跃的增殖能力,其中CD105阳性细胞＞98%.结论 密度梯度离心结合贴壁培养法可获得高纯度和高增殖活性的MMSCs,成人MMSCs至少在传代培养5代内生长旺盛并维持其生物特性,可满足临床治疗和人体生物组织研究要求.     

兔后肢缺血模型的制作

目的建立患肢缺血实验动物模型。方法结扎10只家兔左后肢的股动脉，1周后切除髂外动脉，股动脉及所有侧支血管。术后6周内定期评价每只家兔缺血程度。结果术后临床观察4只家兔患肢有缺血表现（3只皮肤发绀，1只足趾坏死）；患肢血压术后3d下降明显（P〈0．05，VS术前），以后缓慢上升，到术后6周达到平台期。放射性同位素灌注扫描显示了与血压类似结果。术后2周患肢造影，髂内动脉发出侧支血管与膪动脉发生重建。术后6周造影，侧支血管增粗扭曲。结论成功制作家兔后肢持续缺血模型。