人白介素－6受体小分子拮抗剂高通量筛选模型的建立

目的：建立新的白介素－6受体（ interleukin－6 receptor, IL－6R）小分子拮抗剂高通量筛选模型。方法PCR扩增IL－6R胞外区基因,将其克隆至真核表达载体构建重组质粒pABHis－IL6R,瞬时转染HEK293T细胞进行分泌表达。利用Western 印迹实验、受体配体结合实验对表达产物进行活性验证。利用二者的相互作用以及Fc片段与酶标二抗结合的特性建立基于ELISA法的IL－6R拮抗剂筛选模型,并用Z′－因子检测与已知拮抗剂ab47215对该模型的稳定性与可靠性进行评估。结果成功构建了真核表达载体pABHis－IL6R,并对IL－6R进行了分泌表达。所表达的IL－6R能够被特异性抗体识别,能够与其配体rhIL－6特异性地结合,并表现出良好的量效关系。经测算得出,该模型的Z′－因子为0．53,满足高通量筛选的要求。 ab47215能够剂量依赖性地阻断IL－6R与其配体的结合,其IC50＝（0．55±0．11）μg／ml。结论建立了一种新颖而简便的IL－6R拮抗剂筛选模型,为寻找高效、低毒的小分子拮抗剂奠定了基础。     

消栓通络有效成分组对脑缺血再灌注大鼠的神经保护作用

目的探讨消栓通络有效成分组(XECG)对脑缺血/再灌注大鼠的神经保护作用。方法采用线栓法阻断大脑中动脉(MCAO)建立大鼠脑缺血/再灌注(I/R)模型。缺血2h,再灌注24h时后,通过腹腔给予XECG(200、100、50mg·kg-1),以脑梗死体积、脑含水量和伊文思蓝(Evans Blue,EB)法检测血脑屏障通透性等指标评价XECG对脑缺血的神经保护作用。结果 XECG能显著降低缺血再灌注大鼠脑梗塞体积和血脑屏障通透性。结论 XECG对脑缺血损伤有直接的神经保护作用。     

人表皮生长因子在烟草中的表达及其重组蛋白的初步鉴定

目的:运用Dot-ELISA方法对转基因烟草中所表达的重组hEGF蛋白进行初步检测,以确定是否表达出具有免疫功能的蛋白质.方法:将所合成的hEGF基因置于CAMV35S启动子的驱动下,用农杆菌介导的方法转入烟草中,经过抗性筛选和PCR鉴定出阳性转化子后,提取转化子的总蛋白.总蛋白提取物经透析后,取适当浓度蛋白质点在尼龙膜上,用Dot-ELISA方法对所提取的蛋白质进行测定.结果:结果表明,转基因烟草中的重组蛋白能与抗体发生特异性结合,Dot-ELISA反应后的膜上显示出清晰的棕色斑点.结论:通过实验证明Dot-ELISA方法是一种简便快捷的检测方法,适用于植物基因工程中大规模重组蛋白生产的初步检测.     

山茱萸的化学成分研究

利用各种色谱技术对山茱萸的化学成分进行研究,从山茱萸水提取物中分离得到6个化合物,分别为6'-O-乙酰基-7α-O-乙基莫诺苷(1),(-)-isolariciresinol 3α-O-β-D-glucopyranoside(2),芹菜素(3),cirsiumaldehyde(4),对香豆酸(5),咖啡酸(6),其中化合物1为新化合物,化合物2~4为首次从山茱萸属植物中分离得到。利用MTT法检测了化合物2~6对缺氧缺糖损伤的PC12细胞的保护作用,结果表明化合物4在1.0μmol·L-1的浓度下,对OGD/R损伤的PC12细胞物有一定的保护作用。     

吡西达替尼抑制单核细胞向肿瘤微环境的聚集并减少M2型肿瘤相关巨噬细胞的数量

目的研究吡西达替尼(pexidartinib)对单核细胞向肿瘤微环境的聚集与M2型肿瘤巨噬细胞极化的影响。方法皮下接种结肠癌MC38细胞建立结肠癌细胞小鼠体内成瘤模型,观察吡西达替尼对小鼠体内的成瘤速度、荷瘤小鼠存活,免疫荧光组织化学染色检测肿瘤组织F4/80阳性肿瘤相关巨噬细胞(TAM)数量;分离增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因小鼠外周血单核细胞经尾静脉过继转移给荷瘤小鼠后,用吡西达替尼处理,流式细胞术检测肿瘤组织中单核细胞聚集及F4/80和CD206阳性细胞的比例。结果吡西达替尼减缓MC38结肠癌细胞在体内的成瘤速度并提高荷瘤小鼠的生存率,还可减少肿瘤微环境中TAM的数量和M2型TAM的形成,并抑制外周血的单核细胞向肿瘤微环境的聚集。结论吡西达替尼抑制单核细胞向肿瘤微环境的聚集并减少M2型TAM的数量。     

瑞香科植物药理研究进展

瑞香科(Daphne genus)为被子植物双子叶植物纲蔷薇亚纲桃金娘目十二科之一[1].分布于热带、温带,非洲尤多.我国主要分布于长江以南.多为乔木或灌木,有草本.瑞香科约有50属500种,我国有9属90种[2],分别为:瑞香属(Daphne)、结香属(Edgeworthia)、莞花属(Wikstroemia)、狼毒属(Stellera)、沉香属(Aquilaria),鼠皮树属(Rhamnoneuron)、毛花瑞香属(Eriosolena)、草瑞香属(Diarthron)、假狼毒属(Stelleropsis).该科植物具有较显著的生理活性,一直受到各国药学与化学工作者的关注.现已分离到香豆素、苯丙素、黄酮、萜类等多类化合物,具有抗菌、抗肿瘤、抗生育等较显著的生理活性.     

消栓通络有效成分组对SH-SY5Y细胞氧糖剥夺损伤的影响

目的研究消栓通络有效成分组(XECG)对SH-SY5Y细胞氧糖剥夺(OGD)损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,将细胞随机分为正常组、氧糖剥夺模型组和XECG组(1、3、10mg·L-1),建立体外OGD/R细胞模型。倒置显微镜观察细胞形态;MTT法测定细胞存活率;酶标法试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量;Western Blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax蛋白表达的变化。结果与模型组相比,XECG能明显改善OGD/R引起的SH-SY5Y细胞的损伤,提高细胞存活率(P<0.05),减少LDH的释放量(P<0.05),能提高缺糖缺氧神经元Bcl-2/Bax比值。结论 XECG对OGD/R引起的SH-SY5Y细胞损伤有保护作用,其机制可能与影响凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达有关。     

消栓通络有效成分组对大鼠脑缺血损伤的保护作用及其机制

目的研究消栓通络有效成分组(XECG)对大鼠脑缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用及其机制。方法SD大鼠随机分为6组:假手术组,模型组,尼莫地平对照组(4 mg·kg-1),XECG高、中、低剂量组(200、100、50mg·kg-1)。采用线栓法阻断大脑中动脉(MCAO)建立大鼠脑缺血/再灌注(I/R)模型。缺血2h,再灌注24h后,HE染色观察大鼠缺血侧脑组织的病理变化;Western blot法检测缺血侧脑组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(Interleukin 1β,IL-1β)的表达。结果 XECG能明显改善缺血再灌注大鼠脑组织的病理变化,降低缺血侧脑组织TNF-α、IL-1β的表达。结论 XECG对脑缺血再灌注大鼠具有明显的保护作用,其机制可能与降低TNF-α、IL-1β的表达,抑制炎症级联反应有关。     

新思路·新技术——中药复方新药研发相关重大科学和技术问题

"第十二届全国中药与天然药物药理学术会议"于2019年10月11-13日在天津市社会山国际会议中心酒店举行。会议期间,中国药理学会中药与天然药物药理专业委员会召开了"中药复方新药研发相关重大科学和技术问题"专题研讨会。研讨会分为主题报告和综合讨论2部分。主题报告由中国药理学会中药与天然药物药理专业委员会副主任委员吴春福教授主持,刘建勋、孙晓波、段大跃和吕圭源教授作主题报告。中国药理学会理事长兼中药与天然药物药理专业委员会主任委员张永祥研究员主持综合讨论,国家卫生健康委员会科技教育司重大专项处顾金辉处长全程参加。与会专家围绕中药复方新药研发相关重大科学和技术问题进行了广泛、深入的讨论。本文整理了专家们的主要观点和建议,希望能为中药复方新药研发提供新思路和新技术,为提高我国中药复方新药的研发水平发挥积极的推动作用。