供体细胞嵌合率的动态定量检测在供体淋巴细胞回输中的应用

为了探究供体细胞嵌合率 (DC)的动态定量检测在确定供体淋巴细胞回输 (DLI)时机和预测DLI疗效中的作用 ,应用复合扩增荧光标记STR PCR结合毛细管电泳方法 ,对 6例接受异基因造血干细胞移植后早期复发或移植物被排斥并接受DLI治疗的白血病患者 ,进行了DC的动态定量检测。结果发现 ,复发或排斥发生时 6位患者DC均出现大幅度下降 ,介于 2 7.3% - 85 .7% ,4位患者从DC下降 (<90 % )到出现临床复发或排斥的中位时间为2 6天 ,提示DC进行性下降的患者为复发或排斥的高危患者 ,可早期实施DLI干预治疗。 2例患者出现治疗反应 ,治疗有效患者在DLI后短期内出现DC回升 ,供体细胞占优势 ,并转化为稳定的完全供体细胞嵌合状态 (FDC) ,临床上出现移植物抗宿主病 (GVHD)表现。无效患者DLI后DC均无稳定回升现象 ,并对 3例DLI无效患者进行了第二次DLI治疗。结论 :嵌合体检测可指导DLI的实施时机 ,预测DLI的临床疗效 ,而且对首次DLI治疗无效的患者的后继强化治疗提供重要的参考依据。     

CD28/CTLA-4共刺激分子在再生障碍性贫血免疫发病机制中的作用

目的 研究CD28、CTLA-4在再生障碍性贫血（AA）免疫发病机制中的可能作用。方法 以流式细胞术分别分析23例发病期AA、10例恢复期AA患者和15名正常人骨髓细胞中CD3^＋CD4^＋T细胞上CD28、CTLA-4表达率，Th1、Th2细胞比例，评价CD28、CTLA4表达与Th1／Th2、中性粒细胞绝对值（ANC）之间的关系。结果 ①正常对照组CD3^＋CD4^＋T细胞上CD28、cTLA4表达率及CD28^＋／CTLA-4^＋比值分别为（31．40±10．83）％、（2．45±1．30）％、17．02±13．44，AA患者发病期分别为（39．84±10．89）％、（1．43±0．67）％、43．04±37．61，AA患者恢复期分别为（22．00±9．08）％、（3．46±2．26）％、10．49±7．80；与正常对照组比较，AA患者发病期CD28显著升高（P〈0．05），CTLA-4显著下降（P=〈0．01），CD28^＋／CTLA4^＋比值相应地亦显著升高（P〈0．05），而恢复期上述数值与正常对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。②正常对照组Th1、Th2细胞、Th1／Th2比值分别为（4．21±2．11）％、（1．99±1．27）％、2．46±1．28，AA发病期为（11．13±4．96）％、（2．46±1．65）％、5．20±1．98，恢复期分别为（5．39±4．29）％、（2．53±2．41）％、2．87±1．43；与正常对照组比较，AA发病期Th1增高，Th1、Th2平衡向Thl偏移（P值均〈0．01），恢复期与正常对照组比较，差异无统计学意义。③AA患者CD28^＋／cTLA4^＋比值与Thl／Th2比值呈正相关（P〈0．05），ANC与CD3^＋CD4^＋CD28^＋T细胞数呈负相关（P〈0．01），与CD3^＋CD4^＋CTLA-4^＋T细胞数呈正相关（P〈0．01）。结论 ①AA发病期患者骨髓CD4^＋T细胞表面共刺激分子表达异常，CD28升高，而CTLA-4下降，AA患者骨髓T细胞处于“预激活”状态；②CD28／CTLA-4比值与Th1／T12．比值呈正相关提示：CD28、CTLA-4表达失衡可引起Th细胞格局偏移，Th1型细胞增多。③ANC和CD28、CTLA-4间相关分析进一步说明CD28、CTLA-4与AA的发生、发展有关。     

MAG方案对恶性血液病患者造血干细胞动员作用的研究

目的　研究米托蒽醌 (MTZ)联合大剂量阿糖胞苷 (Ara C)、重组人粒细胞集落刺激因子(rhG CSF)组成MAG方案对恶性血液病患者外周血干细胞的动员作用。方法　 1995年 12月至2 0 0 3年 4月 ,采用MAG方案对 14例恶性淋巴瘤和 2 9例急性白血病患者外周血干细胞进行动员 ,其用量为MTZ 10mg/m2 ,第 2 ,3天 ;Ara C 2 g/m2 ,每 12h 1次 ,第 1,2天 ;rhG CSF 30 0 μg/d。首先用MA方案联合化疗 ,白细胞 <1.0× 10 9/L时开始用rhG CSF ,白细胞回升时用CS 30 0 0plus或CobeSpectra血细胞分离机采集外周血干细胞。结果　 14例恶性淋巴瘤患者除 1例外周血干细胞采集失败外 ,其余 13例均 1次性采集成功 ,所得单个核细胞 (MNC) (3.91± 2 .70 )× 10 8/kg ,CD34 细胞 (17.79± 12 .90 )× 10 6/kg。采集 2 9例急性白血病患者外周血干细胞平均 2 .13次 ,2 4例采集成功 ,5例采集失败 ,所得MNC (3.6 2± 2 .89)× 10 8/kg ,CD34 细胞 (7.37± 6 .6 0 )× 10 6/kg。rhG CSF平均使用时间为 7d。经MAG方案动员后 ,除 8例患者有胃肠道反应、14例患者骨髓抑制期合并感染外无明显不良反应 ,无动员相关死亡。MAG方案动员后进行微小残留病检测 ,部分病例转为阴性。结论　MAG方案在恶性淋巴瘤和急性白血病患者外周血干细胞动员中安全     

非清髓性异基因外周血造血干细胞移植后植入综合征2例报告

目的：提高非清髓性异基因外周血造血干细胞移植后植入综合征(ES)的认识和诊治水平。方法：回顾性分析2例接受非清髓性异基因外周血造血干细胞移植后发生ES患者的临床表现、治疗及预后。结果：2例分别于术后6天和7天发生ES，经大剂量甲基泼尼松龙治疗后，症状体征迅速消失，但在糖皮质激素减量过程中均发生了急性移植物抗属主病(aGVHD)，其中l例死于aGVHD，另l例死于植入失败。结论：ES是一种不同于aGVHD的移植后并发症，糖皮质激素对其治疗有效；发生ES者或其后发生aGVHD者预后不良。     

减低剂量的地西他滨治疗骨髓增生异常综合征-难治性血小板减少

目的:总结减低剂量的地西他滨治疗3例骨髓增生异常综合征-难治性血小板减少(MDS-RT)患者的诊疗体会。方法:起始3例患者均行减低剂量地西他滨治疗1疗程:20mg/m2,静脉滴注1h,qd×3d,之后患者2巩固3疗程,患者3转用免疫抑制剂治疗。结果:1疗程结束后,患者1血小板3×109/L升为50×109/L,患者2血小板5×109/L升为45×109/L,均脱离输注,患者3仍未脱离输注,免疫抑制剂治疗无效,后进展为急性单核细胞白血病。结论:减低剂量地西他滨治疗低危的MDS-RT可改善血小板减少、血小板输注依赖问题,且不良反应少,值得在大样本的临床实验中检验其疗效。     

自体骨髓移植结合强化方案对急性白血病的疗效——附10例报告

我所自1988年12月～1991年12月,已用自体骨髓移植(ABMT)结合强化治疗急性白血病(AL)10例,疗效满意,初步报告如下。材料和方法一、一般资料男7例,女3例,年龄28岁～45岁,中数为38,5岁。M_3 5例,M_4 3例,M_5 1例。首次缓解至移植时病程3月～54个月,中数时间为11.5个月。移植时处于首次缓解期者7例,第2次缓解期者3例。仅1例M_3患者的骨髓用普鲁卡因联合加热方法进行体外净化后回输。二、感染的预防按骨髓移植常规消毒处理     

HLA-Cw位点在单倍型相合的造血干细胞移植中作用的初步探讨

目的 探讨HLA—Cw位点对单倍型相合的造血干细胞移植（HSCT）预后的影响。方法 对单倍型相合的供受者进行HLA—A、B、DR、Cw位点检测，总结2002年7月至2006年3月接受HLA单倍型相合HSCT的21例恶性血液病患者（标危8例，高危13例）的临床资料，分析HLA-Cw位点对移植物抗宿主病（GVHD）及生存率的影响。结果 20例患者获得稳定的造血重建，HLA—Cw相合组（13例）和不合组（7例）患者移植后中性粒细胞达0．5×10^9／L的中位时间分别为12d和13d，血小板达20×10^9／L的中位时间分别为20d和23d；两组差异无统计学意义（P〉0．05）。HLA—Cw相合组Ⅱ～Ⅳ度急性GVHD发生率为76．9％，HLA—Cw不合组为14．3％，差异有统计学意义（P〈0．05）。HLA—Cw相合组慢性GVHD的发生率为85．7％，HLA—Cw不合组为57．1％，差异无统计学意义（P〉0．05）。两组28个月累积生存率分别为49．0％和85．7％（P〉0．05）。存活患者Karnofsky评分大于90％。结论 在单倍体相合的HSCT中，选择与受者HLA-Cw位点不合的供者，有助于减低急性GVHD的发生率，有利于长期生存，可以作为供者优化选择的指标之一。     

mIL-10重组复制缺陷型腺病毒载体的构建及制备

目的构建小鼠白介素-10(mIL-10)重组腺病毒真核表达载体,为其体外表达及动物体内试验研究提供依据。方法以pORF5-mIL-10质粒为模板通过PCR方法扩增回收mIL-10,将其定向连接到腺病毒载体pSGCMV中,构建pSGCMV-mIL10质粒。此质粒与5型腺病毒质粒pBGHE3通过Lipofectamine 2000共转染至293细胞,经同源重组产生重组复制缺陷型腺病毒Ad5-mIL-10。纯化后Ad5-mIL-10在293细胞大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化,测定其滴度。结果扩增所得mIL-10经酶切鉴定、PCR扩增、DNA测序均证实为小鼠白介素-10,重组腺病毒Ad5-mIL-10经PCR鉴定正确,滴度达2.5×1010pfu/ml。结论成功构建了Ad5-mIL-10重组腺病毒载体系统,为研究IL-10在临床移植中的免疫学作用及基因治疗奠定基础。     

自体外周血干细胞采集和冷冻保存与移植后造血功能恢复的研究

自体外周血于细胞移植（APBSCT）具有造血及免疫重建快、瘤细胞污染少等优点,正被临床广泛应用。干细胞的采集和冷冻保存是移植成功的关键,只有采集到足够数量的造血干细胞并进行适当有效的冷冻保存,回输后才能获得造血重建。本科1996年12月～1998年10月,对14例恶性血液病患者进行APBSCT,造血干细胞通过程控冷冻,液氮保存,回输后全部患者造血功能得到重建,现报告如下。材料和方法患者：男10例,女4例,年龄15～53岁。急性非淋巴细胞白血病6例,其中M。1例,M。3例,M;2例;急性淋巴细胞性白血病2例;恶性淋巴瘤5例;杂合型白…