T淋巴细胞内mTOR/S6途径在难治/复发再生障碍性贫血发病机制中的作用

目的 研究难治/复发再生障碍性贫血(AA)患者骨髓T淋巴细胞内雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/核糖体蛋白S6途径活化情况,以及mTOR抑制剂雷帕霉素(RAPA)和CD28抗原阻断剂CTLA-4免疫球蛋白(CTLA-41g)对此途径的影响.方法 采集13例难治/复发AA、8例初治重型AA(SAA)以及1O例缺铁性贫血(IDA)患者(对照组)的骨髓标本,加入RAPA和CTLA-41g进行孵育,用流式细胞术检测加药前后每组患者CD3+T淋巴细胞胞质内磷酸化mTOR(p-mTOR)、磷酸化S6(P-S6)和干扰素-γ(IFN-γ)的表达水平,并分析其与疾病的关系.结果 ①难治/复发AA组患者骨髓CD3+T细胞胞内p-mTOR、P-S6及IFN-γ的表达水平较对照组显著升高(P值均＜0.01).②初治SAA患者p-mTOR和p-S6的表达水平低于难治/复发AA组(P值均＜0.01),而与对照组比较差异无统计学意义(P值均＞0.05);初治组IFN-γ的表达水平明显高于对照组(P值均＜0.01).③RAPA和CTLA-41g作用后,难治/复发AA患者p-mTOR、p-S6及IFN-γ的表达水平较用药前明显下降(P值均＜0.01).结论 CD3+T淋巴细胞内mTOR/S6途径在难治/复发AA患者中活化.RAPA和CTLA-41g均可抑制难洽/复发AA患者体内mTOR/S6途径,并下调IFN-γ.CD28/mTOR/S6和IFN-γ途径参与难治/复发AA的免疫发病机制,并且对RAPA和CTLA-41g敏感,以CD28、mTOR为治疗靶点,临床应用RAPA和CTLA-4Ig治疗此类AA患者值得探索.     

24例正常供体外周血干细胞动员和采集的研究

1997年7月-2002年11月，我院予24例正常供体行25例次外周血干细胞的动员和采集，动员剂包括粒细胞集落刺激因子(G-CSF)粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，现将结果和研究分析如下。     

急、慢性白血病患者化疗后胸腺近输出功能状态的研究

目的研究急、慢性白血病患者化疗后胸腺近输出功能,评价白血病化疗后T细胞免疫状态。方法通过real-time PCR检测56例急、慢白血病患者化疗后外周血T细胞受体重排删除环(TREC)含量,同时检测50例正常健康人TREC水平以确定正常值范围。结果正常人TREC含量为3351.06±3711.12拷贝/105细胞,并且正常人TREC含量与年龄呈负相关。37例急性白血病患者化疗后TREC含量为307.87±433.26拷贝/105细胞;19例慢性粒细胞性白血病患者化疗后TREC含量为314.23±868.63拷贝/105细胞。结论正常人外周血TREC含量与年龄呈相关。急、慢性白血病患者化疗后TREC含量均远远低于正常人水平(P<0.001),但两组患者之间无明显差异(P>0.05)。急、慢性白血病患者化疗后胸腺近输出功能低下,T细胞免疫缺陷。     

mIL-10重组复制缺陷型腺病毒载体的构建及制备

目的构建小鼠白介素-10(mIL-10)重组腺病毒真核表达载体,为其体外表达及动物体内试验研究提供依据。方法以pORF5-mIL-10质粒为模板通过PCR方法扩增回收mIL-10,将其定向连接到腺病毒载体pSGCMV中,构建pSGCMV-mIL10质粒。此质粒与5型腺病毒质粒pBGHE3通过Lipofectamine 2000共转染至293细胞,经同源重组产生重组复制缺陷型腺病毒Ad5-mIL-10。纯化后Ad5-mIL-10在293细胞大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化,测定其滴度。结果扩增所得mIL-10经酶切鉴定、PCR扩增、DNA测序均证实为小鼠白介素-10,重组腺病毒Ad5-mIL-10经PCR鉴定正确,滴度达2.5×1010pfu/ml。结论成功构建了Ad5-mIL-10重组腺病毒载体系统,为研究IL-10在临床移植中的免疫学作用及基因治疗奠定基础。     

自体外周血干细胞采集和冷冻保存与移植后造血功能恢复的研究

自体外周血于细胞移植（APBSCT）具有造血及免疫重建快、瘤细胞污染少等优点,正被临床广泛应用。干细胞的采集和冷冻保存是移植成功的关键,只有采集到足够数量的造血干细胞并进行适当有效的冷冻保存,回输后才能获得造血重建。本科1996年12月～1998年10月,对14例恶性血液病患者进行APBSCT,造血干细胞通过程控冷冻,液氮保存,回输后全部患者造血功能得到重建,现报告如下。材料和方法患者：男10例,女4例,年龄15～53岁。急性非淋巴细胞白血病6例,其中M。1例,M。3例,M;2例;急性淋巴细胞性白血病2例;恶性淋巴瘤5例;杂合型白…     

树突状细胞亚群在慢性移植物抗宿主病中的作用研究

目的：探讨树突状细胞亚群在慢性移植物抗宿主病中的作用。方法：通过三色流式细胞仪检测8例慢性移植物抗宿主病病人治疗前后外周血DC1、DC2变化。结果：慢性移植物抗宿主病病人DC1、DC2明显增高，而治疗好转后DC1、DC2又显著降低。结论：DC1、DC2在cGVHD发病中起着重要作用。     

复合扩增荧光标记STR-PCR定量检测无关供体脐带血移植后供受体嵌合状态

近年来，脐带血移植(CBT)治疗血液系统良、恶性疾病取得较大进展，无关供体脐带血已成为造血干细胞的重要来源。但由于脐血中有核细胞数量少，CBT多数HLA不全相合，增加了植入失败及移植物被排斥的可能。临床需要一种敏感可靠的方法检测移植后供体细胞嵌合状态，以早期判断植入与排斥。我们2002年4月对1例重型再生障碍性贫血(SAAⅡ)患儿实施HLA不全相合的CBT，并应用复合扩增荧光标记STR-PCR结合毛细管电泳的方法，首次定量检测了CBT后供体细胞嵌合率(DC)，现报告如下。     

清髓性和非清髓性干细胞移植后树突状细胞亚群的动态观察

探讨不同预处理方法移植后树突状细胞亚群早期重建情况。采用三色流式细胞仪动态检测不同移植方法后早期患者外周血树突状细胞亚群DC1(Lin-HLA-DR+CD11c+)、DC2(Lin-HLA-DR+CD123+)水平。结果:清髓性干细胞移植组包括同胞全相合干细胞移植和HLA半相合移植,移植后14dDC1分别为0.093%±0.091%,0.090%±0.064%,DC2为0.056%±0.026%,0.130%±0.036%,二者差别无统计意义。非清髓性干细胞移植组移植后14dDC1为0.223%±0.084%,DC2为0.360%±0.023%,非清髓性干细胞组DC1、DC2略低于正常对照组,和清髓性移植组相比,非清髓性干细胞组明显增高,P<0.05,二者差别有统计学意义。移植前的预处理方案强度影响树突状细胞亚群重建。     

单元型相同骨髓移植后患者单核细胞来源的DC表面分子的检测

对单元型相同骨髓移植患者造血重建后的外周血单个核细胞加GM-CSF、IL-4进行DC诱导,7d后加入TNF-α于培养DC中,继续诱导3d。测定DC的表型、混合淋巴细胞反应对T细胞增殖能力的测定,并与健康志愿者外周血来源的DC进行比较。探讨单元型相同造血干细胞移植后患者单个核细胞来源的DC的生物学特性。结果显示,单元型相同造血干细胞移植患者外周血单个核细胞和正常人外周血单个核细胞来源的DC均高表达CD1α、CD83、CD80、CD86和HLA-DR等DC的相关抗原和共刺激分子,患者的未成熟DC经TNF-α诱导后,成为成熟和有功能的DC,单元型相同造血干细胞移植患者单个核细胞来源的DC在体外具有激发同种异体外周血T细胞增殖的能力,与健康人外周血来源DC组相比均无统计学意义(P>0.05)。