用单克隆抗体研究和分析霍乱弧菌抗原(摘要)

本文用ELISA以12株单克隆抗体(McAb)对55株EI Tor霍乱弧菌和用遗传学方法突变的28株霍乱弧菌的菌体抗原进行了研究,同时与四种常规分型方法进行对比试验。结果用12株McAb可将55株EI Tor霍乱弧菌分成11种抗原决定簇和18个McAb型,将遗传学方法的突变株分成9种抗原决定簇和10个McAb型。其中一株McAb 2B_1H_1F_3能识别所有55株 EI     

小鼠趋化因子COL19Ig融合蛋白表达载体的构建、表达及鉴定

通过特异引物扩增出去掉终止密码的mCCL19编码序列，经酶切、亚克隆、拼接构建了真核表达载体pcDNA3．1-CCL19Ig，酶切和测序鉴定插入序列；将重组质粒转染CHO细胞进行体外表达，通过RT—PCR、Western blot鉴定目的基因的表达，利用趋化小室法测趋化活性。结果测序证实重组表达载体含mCCL19编码序列和人IgGI Fc段序列，其序列分别与GenBank中公布序列比对一致，IgG1-Fc段读码框未发生改变；Western blot结果证实转染了pcDNA3．1-mCEL19Ig的CHO细胞培养上清中有相对分子质量为38000的融合蛋白mCCL19Ig表达；体外趋化实验表明融合蛋白mCCL19Ig对小鼠脾细胞有趋化活性，且呈剂量依耐关系。     

mic2/CD99在经典型霍奇金淋巴瘤H/RS细胞中的表达及与Eber-1/LMP-1相关性的研究

目的： 检测mic2基因与CD99蛋白和Eber-1基因与潜伏膜蛋白-1（LMP1）在经典型霍奇金淋巴瘤（cHL）H/RS细胞中的表达，探讨mic2/CD99表达与Eber-1/LMP-1的相关性。 方法： 采用分子原位杂交和免疫组化技术并结合组织芯片技术检测59例石蜡包埋淋巴瘤组织标本［43例cHL,16例非霍奇金淋巴瘤（NHL）］mic2/CD99和Eber-1/LMP-1的表达，比较分析mic2/CD99在两组中的表达及与Eber-1/LMP-1的关系。 结果： cHL组CD99蛋白表达阳性率为2.3％，mic2基因表达为55.8％，LMP1表达为58.1％，Eber-1表达为53.5％；NHL组CD99蛋白与mic2基因表达高于cHL组（P<0.05）；LMP1和Eber-1的表达低于cHL组（P<0.05）；mic2基因的表达高于CD99蛋白的表达（P<0.05）；Eber-1与LMP1的表达无统计学意义（P>0.05）。CD99蛋白与LMP1的表达呈负相关（P<0.05），各项指标的表达与性别无关。CD99蛋白与LMP1的表达与年龄呈负相关（P<0.05），mic2与Eber-1的表达与年龄无关（P>0.05）。 结论： CD99蛋白在cHL H/RS细胞中低表达，并与LMP1的表达呈负相关。     

MBL对树突状细胞体外分化成熟的影响

目的: 探讨甘露聚糖结合凝集素 (MBL)对人外周血单核细胞来源的树突状细胞 (MoDC)分化成熟的影响。方法: 以天然人MBL刺激MoDC, 在倒置显微镜下观察DC的形态; 用FACS分析DC的表型; 用 3H- TdR掺入法测定DC刺激同种异体T细胞增殖的能力; 以酵母多糖颗粒吞噬试验评估DC的抗原摄取能力; 用ELISA检测DC培养上清中IL- 12和TNF- α的含量。结果: MBL刺激的DC表面分子CD1a、CD83、CD40、CD80、CD86和MHC DR的表达均上调,摄取酵母多糖颗粒的能力降低, 激发初始T细胞增殖的能力加强, 分泌的IL- 12增多但几乎不分泌TNF- α。结论: MBL能诱导DC分化成熟, 提示其可能通过调节DC的功能而参与获得性免疫应答。     

霍乱弧菌稻叶型McAb的研制与鉴定

<正> 为了制备特异敏感的诊断霍乱弧菌的试剂,我们于1984年曾建立霍乱弧菌小川型McAb,并对其诊断应用的价值进行了一系列的研究。但因所制备的McAb主要是针对霍乱弧菌小川型菌株,为了制备对本菌配套诊断试剂,我们使用化学CO_2缸法又成功地建立了霍乱弧菌稻叶型McAb杂交瘤细胞系,并对其所分泌的抗体进行了鉴定。现将结果报道如下。     

新疆汉族和维吾尔族健康人群VKORC1启动子区基因多态性研究

目的了解VKORC1—1639A／G基因多态性在新疆汉族和维吾尔健康人群中的分布及其与国外其他不同民族之间的差异。方法采用PCR—RFLP技术对205名汉族和204名维吾尔族乌鲁木齐地区体检健康者VKORC1—1639A／G基因多态性进行检测，计算其基因型和等位基因频率，并与国外多个民族VKORC1—1639A／G基因多态性分布进行比较。结果新疆汉族和维吾尔族健康人群中共检测到2种等位基因：A和G。汉族A和G等位基因频率分别为87％和13％，维吾尔族A和G等位基冈频率分别为62％和38％。新疆汉族和维吾尔族健康人群VKORC1—1639A／G基因多态性共检测到3种基因型，新疆汉族健康人群以AA基因型常见，基因型频率74％。其次是AG基因型，基因型频率分别为26％。GG基因型的个体仅检测到1例，基因型频率小于1。新疆维吾尔族健康人群以AG基因型常见，基因型频率58％。其次是AA基因型，基因型频率分别为33％。GG基因型频率为9％。结论新疆汉族VKORC1—1639A／G基因多态性以AA基因型为主。维吾尔族VKORC1—1639A／G基因多态性以AG基因型为主，新疆汉族VKORC1—1639A／G基因多态性分布与维吾尔族人群和欧美人群存在较大差异。新疆维吾尔族人群VKORC1—1639A／G基因多态性分布与欧关人群接近。     

单克隆抗体对霍乱弧菌抗原性的研究——Ⅰ.12株McAb对50株霍乱弧菌菌体抗原的初步研究

本文是用12株单克隆抗体对50株El Tor生物型霍乱弧菌的菌体抗原的研究结果。采用的方法是ELlSA间接法:于酶联板中加入经鉴定的待检测的菌体抗原50ul/孔(1亿/ml),过夜蒸干包被,洗3次,加入1％BSA100ul/孔,37℃经1小时封闭,洗3次:加入McAb(1:80)50ul/孔,37℃1小时,洗3次,加兔抗鼠酶标抗体50ul/孔,37℃作用2小时,洗3次后,加底物20分钟后,用2M硫酸终止反应,于酶联免疫检测仪中测定OD值,以P/N>     

脐血ANF、CG和β2-m检测与高危新生儿心、肝、肾功能关系的研究

应用放射免疫法对112例、170例和113例新生儿脐血分作ANF、CG和β_2测定。结果:(1)早产儿和地期产儿ANF、CG和β_2-m的含量显著高于正常足月儿,与正常儿比较P值分别为:P<0.001、P<0.01、P<0.05。(2)高危新生儿出生1分钟Apgar评分越低,脐血ANF、CG和β_2m的含量越高。Apgar评分0′～3′和4′～7′组脐血ANF、CG和β_2-m含量高于8′～10′组。(3)高危儿的转归不同,脐血ANF、CG和β_2-m含量差异也极为显著。抢救成活组、死亡组脐血ANF、CG和β_2-m含量明显高于正常成活组(P值均<0.01)。(4)本文经抢救和死亡高危儿共27例同时检测了上述三项指标ANF、CG、β_2-m的含量呈高度正相关。 研究结果表明,高危新生儿ANF、CG和β_2-m的含量越高,心、肝、肾功能受损程度越严重。因此,脐血ANF、CG和β_2-m可客观而可靠地反映高危新生儿心、肝、肾功能,具有较高的临床应用价值。     

霍乱弧菌单克隆抗体诊断应用的研究——Ⅱ.酶标霍乱弧菌单克隆抗体快速检测霍乱弧菌的实验研究

本文就所获得的12株霍乱弧菌单克隆抗体中有种特异性的三株(2B_1H_1C_6,2B_1H_1F_6及2B_1H_1F_3)单克隆抗体及抗霍乱弧菌多克隆抗体,作酶标抗体直接法和间接法,对霍乱弧菌模拟标本进行快速检测,探究在临床诊断应用中的价值。结果表明,酶标McAb较酶标多克隆抗体敏感,前者在10~4/ml菌时可以检出,后者要在10~4～10~6/ml菌时才能检出;同时表明酶标间接法比直法敏感,特异性实验结果显示酶标单克隆抗体对10株霍乱弧菌有很高的     

霍乱弧菌单克隆抗体诊断应用的研究——Ⅳ.McAb吖啶橙(McAb-AO)简易免疫荧光菌团法快速检定霍乱弧菌的实验研究

将获得的12株霍乱弧菌单克隆抗体中的一株“2B_1H_1C_6”的McAb与荧光素吖啶橙标记制成简易AOFA、对霍乱弧菌模拟标本进行快速检测,研究其敏感性,特异性和实用性同时以霍乱弧菌多克隆抗体比较。结果表明:McAb-AO比PcAb-AO敏感度高,特异性强(前者仅对霍乱弧菌呈现荧光菌团,对其它肠道菌无交叉反应),在每毫升类模拟标本中含10个