利用牛胶原构建人工真皮

目的制备成纤维细胞胶原凝胶(即真皮替代物),以研究细胞的生长、分化、增生及真表皮间的相互作用,为研制大面积创面覆盖物-复合皮奠定基础。方法(1)酶消化法培养胎儿成纤维细胞;(2)制备细胞胶原凝胶,分为Ca-gel和Cf-gel组,接种后于不同时间观察两组细胞的形态变化和胶原凝胶的收缩情况;(3)细胞计数;(4)SEM观测胶原凝胶的表面是否有成纤维细胞附着;(5)HE染色。结果(1)成纤维细胞形态及增殖情况:成纤维细胞胶原凝胶形成后呈半透明状,可出现较明显的细胞增殖,并可见凝胶收缩现象,但Ca-gel组较小;人工真皮质地与颜色近似真皮组织,有一定的弹性和抗拉性,不易脆。(2)细胞计数法所得两组生长曲线基本相似。Ca-gel和Cf-gel组细胞均具有典型的细胞增殖现象,Cf-gel组细胞在后期的增殖略快于Ca-gel组。(3)扫描显微镜下可见到凝胶表面有梭形的成纤维细胞出现,且成纤维细胞紧密贴附于凝胶上。(4)HE染色可见胶原呈较均一的淡红色网状分布,成纤维细胞分布于胶原凝胶内部和表面。结论(1)培养好的细胞凝胶称之为真皮替代物,是进行皮肤器官型培养和制作复合皮的关键与基础,并可与培养的人工表皮膜片混合移植,起到促进表皮细胞的生长粘附和加速创面愈合的作用。(2)成纤维细胞在胶原凝胶中有着活跃的生物学特性,因此在研究成     

电磁脉冲辐射对小鼠睾丸结构的影响

目的 :探讨不同场强的电磁脉冲辐射对睾丸结构的影响。方法 :二级昆明雄性小鼠 114只 ,随机分为辐射组和对照组。辐射组小鼠分别接受 8× 10 3 ,2× 10 4,6× 10 4V/m电磁脉冲 5次重复全身照射 ,于照射后 6h ,1d ,3d ,7d ,14d和 2 8d观察睾丸和附睾病理学改变。结果 :3种场强的电磁脉冲辐射均未引起小鼠肛温和阴囊皮肤温度的明显升高 ,但睾丸却发生显著的各级生精细胞水肿、坏死和脱落 ,曲细精管内成熟精子稀少和缺失 ;最敏感的靶细胞是精原细胞和精子细胞 ;周边部曲细精管病变最明显 ;病变的严重程度与场强的大小呈正相关。结论 :8× 10 3 ～ 6× 10 4V/m电磁脉冲 5次重复全身照射小鼠 ,可引起小鼠睾丸严重的非热效应性生精细胞结构损伤。     

bax和bcl-2基因在单纯和放射复合伤口中的表达及与细胞凋亡和愈合延迟的关系

目的研究bax、bcl-2基因在单纯和放射复合伤口愈合中的表达规律及与细胞凋亡和愈合延迟的关系.方法用TUNEL原位末端标记法检测细胞凋亡,用核酸原位杂交方法检测bax、bcl-2mRNA表达并进行定量分析.结果(1)照射后细胞凋亡出现的频度及延续的时间明显高于单伤组;(2)伤口愈合过程中bax、bcl-2表达随着细胞凋亡的增加呈规律性改变bax表达明显增强,且与细胞凋亡发生有良好的相应关系;而bcl-2呈明显下降趋势.结论bax和bcl-2在放射复合伤口愈合细胞凋亡的调控和愈合延迟中起着重要作用.     

冲击波复合四氧化二氮染毒致冲毒复合伤对大鼠血气变化及病理形态学的影响和c-fos基因表达的研究

目的探讨冲击波复合四氧化二氮(N2O4)染毒致冲毒复合伤对大鼠血气及病理形态学的影响,以及该条件下c-fos基因的表达及其意义.方法采用Wistar雄性大鼠复制冲击伤、N2O4中毒及复合效应的3组动物模型,均于伤后3、6、12、24、48、72h活杀,进行主要器官病理形态学检查及血气分析,并采用SP免疫组化技术观察肺组织c-fos基因表达的变化.结果三组动物PaO2均在伤后3～6 h内显著下降,冲毒复合伤组动物伤后PaO2下降最为显著,重者死于呼衰.三组动物的主要病理形态学均有改变,以冲毒复合伤组的损伤最重;冲击伤和N2O4组c-fos基因表达均明显增加,而于复合伤组表达持续呈强阳性,其阳性部位以支气管上皮、血管内皮和单核细胞为主.结论单纯中度冲击伤组和单纯中度N2O4组中毒早期血气均有显著变化;复合伤对血气的影响更为显著.另外,三组动物的主要病理形态学均有改变,以复合伤组的损伤最重;结果表明c-fos基因表达可能参与复合伤对肺损伤的加重过程,提示对冲毒复合伤进行早期救治(在3～6h内)的重要性.     

骨形态发生蛋白和碱性成纤维细胞生长因子激发纤维环细胞成骨的潜能

目的研究联合使用重组人骨形态发生蛋白（recombinant human bone morphogenetic protein-2,rhBMP-2）和碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）椎间盘纤维环细胞成骨潜能的激发作用。方法向体外培养的纤维环细胞中分别及联合加入rhBMP-2和bFGF,观察纤维环细胞的表型表达特点。结果联合使用rh-BMP-2和bFGF能够明显促进椎间盘细胞增殖,提高细胞内碱性磷酸酶活力,增加I型胶原分泌,提高钙盐沉积程度,提高骨钙素的表达水平。结论联用rhBMP-2和bFGF能够诱导纤维环细胞向成骨细胞方向分化,分泌钙盐并形成钙结节。     

PDGF-A、PDGFR-α在单纯创伤和照射复合创伤愈合过程中伤口成纤维细胞内的表达与意义

目的 探讨局部照射对创伤愈合过程中伤口成纤维细胞PDGF－APDGFR－α表达的影响及意义。方法 将132只Wisar大鼠分为单纯创伤组（对照组）和照射复合创伤组（照射组），用免疫组织化学，原位RT－PCR和图像分析方法检测两组伤口伤后1－60d各时间点PDGF－A，PDGFR－α蛋白及PDGF－A mRNA的表达规律。结果 局部照射使伤口愈合各阶段滞后，延长。对照组伤口成纤维细胞PDGF－A和PDGFR－α表达有明显的时相性，PDGF－A在伤后2－21d可见表达，5d为表达高峰；照射组在伤后各时间点其表达均减弱，且表达时相延长，伤后28d仍有表达；PDGFR－α在对照组于伤后2－15d在表达，5d时达高峰，照射组PDGFR－α表达减弱，但共表达时相与对照组一致。结论 照射抑制伤口成纤维细胞内源性PDGF－A及PDGFR－α的表达，表明照射使成纤维细胞自分泌PDGF－A功能减弱并对外源性PDGF-A反应性减弱，进而导致伤口愈合延迟。     

电磁脉冲辐射对小鼠生精细胞超微结构的改变

目的　探讨电磁脉冲辐射对小鼠生精细胞超微结构的改变。　方法　二级昆明雄性小鼠 1 3 8只 ,随机分为辐射组和对照组。辐射组小鼠分别接受 8× 1 0 3V/m、2×1 0 4 V/m、6× 1 0 4 V/m电磁脉冲 5次重复全身照射 ,于照射后 6h和 1、3、7、1 4、2 8、90 d观察生精细胞超微结构的改变。　结果　电磁脉冲照射后 6h～ 2 8d,精原细胞、精母细胞和精子细胞均出现核膜间隙增宽、线粒体肿胀或灶性空化、内质网扩张 ,而精原细胞还出现异染色质凝集或边移 ,核膜局灶性溶解 ,糖原颗粒减少 ;精子细胞高度水肿、核膜膨出或灶性溶解、线粒体高度肿胀、内质网显著扩张 ;精子头部形态异常、染色质浓缩不良、顶体形态结构异常等。　结论　电磁脉冲照射可引起小鼠各级生精细胞超微结构的明显损伤 ,精原细胞、精子细胞和精子是电磁脉冲辐射最敏感的靶细胞     

北京生物工程研究所(张兆山);北京基础医学研究所(龙建银、王会信)TGF β1反义基因及表达荧光素酶的重组腺病毒对放射性肺纤维化体内基因治疗初探

目的探索TGFβ1反义基因和脂质体混合物以及重组腺病毒转移载体进行放射性肺纤维化体内基因治疗的可行性.方法通过支气管插管与滴注的方式进行.结果检测分析表明,转基因后1.5 d,肺组织DNA用neo基因特异引物PCR扩增阳性;第5.5天,PCR扩增67%(2/3)阳性.RNA dot blot分析表明,转染TGFβ1反义基因的肺组织TGFβ1 mRNA含量降低.转染35 d后取动物肺组织测定其羟脯氨酸含量表明,尽管转染TGFβ1反义基因的动物其肺组织羟脯氨酸含量比正常对照组高(P＜0.01),但它比生理盐水治疗对照组动物和转染TGFβ1正义基因的动物其肺内羟脯氨酸含量低(均为P＜0.01).用含有荧光素酶基因的复制缺陷型腺病毒感染大鼠,其肺脏均检测到了有荧光素酶活性蛋白的表达.结论由聚阳离子脂质体介导的TGFβ1反义基因进行的肺纤维化体内基因治疗是一个简单易行的方法,它可以减缓肺纤维化的发生;用复制缺陷的重组腺病毒进行肺脏的基因治疗是一种较为理想的方法,有望成为治疗肺纤维化的有效的新途径.     

c-fos基因在冲毒复合伤大鼠肺组织中的表达

目的 探讨冲击波、四氧化二氮（N2O4）及其复合效应所致大鼠肺组织损伤特点，c-fos基因表达及其意义。方法 采用雄性Wistar大鼠复制冲击伤、N2O4中毒及复合效应动物模型，于伤后3、6、12、24、48及72h活杀，采用苏木精伊红及标记的抗生蛋白链菌素生物素免疫组织化学技术观察肺组织损伤病变特点及c-fos基因表达的变化。结果 冲击伤组肺组织出血（3h)、水肿和透明膜形成（6h)、炎细胞浸润（1－3d)，并见大量单核细胞（2d)及泡沫样细胞（3d)。N2O4组肺组织于伤后3h见水肿、渗出，6－12h见多量的嗜酸性粒细胞和单核细胞，1－3d见大量的单核细胞和泡沫样细胞。冲击伤＋N2O4组肺组织出血水肿严重，炎细胞渗出早而多，支气管阻塞严重。免疫组织化学显示c-fos蛋白于冲击伤组和N2O4组表达均明显增加，而于冲击伤＋N2O4组表达持续呈强阳性，其阳性部位以支气管上皮、血管内皮和单核细胞为主。结论 冲击波和N2O4均可引起大鼠肺组织出血、水肿、炎细胞浸润、水肿吸收和退变吞噬等病理变化；冲击伤合并N2O4中毒使肺组织损伤出现叠加效应；c-fos基因表达可能在冲击波和N2O4致肺损伤的发生、发展过程中起一定的作用。     

Effect and mechanism of electronic magnetic pulse on peripheral lymphocytes in dogs

目的　研究电磁脉冲 (EMP)对犬淋巴细胞的损伤效应 ,并探讨其作用机理。方法　用酸性磷酸酯酶细胞化学方法检测T、TH 和TS 淋巴细胞 ,用原位末端标记和免疫细胞化学技术分析淋巴细胞凋亡和Bcl 2、Bax蛋白的改变。结果　 (2 - 12 )× 10 4 V/m的场强能使外周血T细胞及其亚群出现明显降低 ;凋亡淋巴细胞随照射剂量的增加而明显升高 ;不同剂量照射后 10天 ,淋巴细胞Bax蛋白的表达明显增强 ,与淋巴细胞凋亡呈现出比较好的相关性 ,而Bcl 2蛋白显著降低。结论　首次证实一定场强的EMP确实能损伤淋巴细胞 ,并呈现出较好的剂量效应关系。淋巴细胞凋亡是EMP引起淋巴细胞死亡和机体免疫功能降低的主要原因 ,Bax和Bcl 2在上述凋亡调控中起着重要作用。