利用多重聚合酶链反应和多色毛细管电泳分析布氏菌多位点可变数目串联重复序列

目的 传统的布鲁氏菌多点可变数目串联重复序列分析方法涉及16个位点(MLVA-16),包括单重聚合酶链反应和琼脂糖凝胶电泳,一直以来都作为标准的基因分型方法,用于布病的病原监测和流行病学调查。然而,目前这种传统方法工作量较大,实验室间结果不宜比较;尤其是对大规模菌株进行基因分型或面临突发疫情时,急需一种高通量且快速的方法。方法 用多重PCR和多色毛细管电泳方法建立一种可靠的,高通量的且自动化程度较高的MLVA-16改良分型系统,用82株菌进行测试。结果 这种改良的MLVA-16分型系统具有很高的准确性,且具有快速和高通量的特点。结论 改良的MLVA-16分型系统可用于基层布病实验室,为布病的病原监测提供高效的工具。     

布鲁菌分子分型方法应用研究进展

布鲁菌属细菌是布病的病原菌。当前,用于布鲁菌属细菌分型的方法有多种,而布鲁菌分子分型方法在布病的分子流行病学调查、病原菌的快速分型鉴定、病原菌的溯源分析和菌株之间差异关系的分析过程中被广泛应用并具有十分重要的作用。本文就常用的布鲁菌的核酸探针技术(DNA probes)、聚合酶链式反应(PCR)、实时定量PCR(Real-time PCR)、16SrDNA鉴定、PCR限制性片段长度多态性( PCR-RFLP)、单核苷酸多态性分析(SNP)、脉冲场凝胶电泳(PFGE)、多位点序列分型(MLST)、多位点串联重复序列分析(VNTR/MLVA)等分子分型方法的应用研究进展予以综述。     

多重荧光定量PCR方法鉴定布鲁氏菌属及牛羊种布鲁氏菌研究

摘要：目的 利用多重实时荧光PCR技术,建立快速鉴定布鲁氏菌的方法。方法 根据布鲁氏菌特异性基因Bcsp31,AlkB/IS711和BMEI1162/IS711的部分片段作为靶基因,分别设计探针引物,将扩增产物连接到PUCm18-T载体上,制备标准品及标准曲线,确定此方法的灵敏度。利用布鲁氏菌的其他生物型菌株和同源性较近的致病菌（汉赛巴尔通体、霍乱弧菌、土拉弗朗西斯菌、大肠杆菌O:157、大肠杆菌O:16、小肠结肠耶尔森菌O:9、沙门氏菌N群血清型、嗜麦芽假单胞菌）验证所建立方法的特异性。通过布鲁氏菌标准菌株建立方法,优化体系后扩增97株地方株进行验证。结果 应用多重Taqman荧光PCR技术检测布鲁氏菌结果显示,布鲁氏菌属、牛种布鲁氏菌和羊种布鲁氏菌有各自的荧光信号,而与其同源性较高的致病菌均未见荧光信号;由标准曲线可知该方法的单重和多重荧光PCR最低检测下限均约为102copy/μL（13-24fg /μL）,是常规PCR灵敏度的100倍。结论建立的方法有灵敏度高、快速易操作等优点,可用于布鲁氏菌快速鉴定,并同时确定是否为牛种或羊种布鲁氏菌。     

布鲁氏菌的脂肪酸分型研究

目的探索脂肪酸分型方法对布鲁氏菌进行分型的可能性。方法选择90株布鲁氏菌经化学方法提取菌体脂肪酸后,用气相色谱分析,获得布鲁氏菌脂肪酸成分的数据资料。并利用SPSS11.5统计软件对获得的数据资料进行聚类分析。结果布鲁氏菌脂肪酸分型方法将90株布鲁氏菌分为5组:第1组为部分牛种菌;部分羊种菌;部分猪种菌;部分绵羊附睾种;部分变异牛种;部分变异羊种;沙林鼠种标准株。第2组为猪种1、2、3、5型标准株和疫苗株S2;羊种疫苗株M28和Rev.1;绵羊附睾种标准株。第3组为部分羊种;部分变异羊种菌;部分牛种3型和6型;犬种;部分绵羊附睾种。第4组为犬种菌标准株。第5组为部分羊1型;部分变异羊种;部分牛1型;部分猪1型和3型。结论依据布鲁氏菌菌体脂肪酸含量差异可以对布鲁氏菌进行分型;依据19∶0CYCLOω8c,18∶1ω7c,16∶0三种脂肪酸含量差异可以区分猪种布鲁氏菌和犬种布鲁氏菌;脂肪酸分型结果进一步提示犬种布鲁氏菌不只1个生物型;脂肪酸分型结果进一步证实牛3型和牛6型布鲁氏菌高度同源。     

约翰逊不动杆菌研究进展

不动杆菌属近年来受到越来越多的重视,不仅是由于能够引起人类的疾病[1],而且也与不动杆菌属中各菌种具有独特的生物特征有关,例如约翰逊不动杆菌(Acinetobacter johnsonii)在污水和污物处理磷化合物的降解和碳链分解方面具有重要的作用[2,3].引起人类致病的不动杆菌多为条件致病菌,可引起呼吸道感染、烧伤感染、中耳炎、脑膜炎、败血症和泌尿系统感染等.其中,医院感染性败血症和脓毒血症是不动杆菌属引起的最严重感染性疾病,病死率为32.0%,体弱者多为混合性感染,病死率更高[4].鲍曼不动杆菌是医院感染的重要致病菌,具有多重耐药的特性[5],而约翰逊不动杆菌引起的疾病越来越受到重视,本文综述了国内外约翰逊不动杆菌最新研究进展,特别是其独特的生物学特征.     

莱姆病研究进展

莱姆病(Lyme disease,LD)亦称莱姆疏螺旋体病(Lyme borreliosis)是1975年Streere在美国康涅狄克州莱姆(Lyme)镇发现的一系列"少年红斑性关节炎"儿童中发现的蜱传螺旋体感染性人兽共患病[1,2].1982年Burgdorfer及其同事从蜱中分离出螺旋体称伯格多疏弗螺旋体(Borrelia burgdorferi,简称B.b),并证实为莱姆病的病原[2].感染伯氏疏螺旋体后可引起多系统、多器官损害,如游走性红斑(erythema migrans,EM)、神经炎、心肌炎、关节炎等,严重者可终身残废,甚至死亡.有30多个国家发现有莱姆病存在.我国1986年艾承绪等在黑龙江省海林县首次分离出3株B.b后.1987年张哲夫等从病原学上证实人被蜱叮咬后发生的皮肤、神经、关节、心血管等损害的多种临床病症是莱姆病.莱姆病在我国分布相当广泛,至今全国以血清学方法确定的有30个省、市、自治区,以病原学方法确定的有18个省、市、自治区存在莱姆病的自然疫源地[3,4].     

2006-2015年山西省布鲁氏菌病疫情分析

目的 分析2006-2015年山西省布鲁氏菌病（布病）疫情特征,为开展布病预防与控制提供依据。方法 对山西省10年间报告的布病数据资料进行描述性分析。结果 10年间山西省共报告布病54 679例,呈逐年增加趋势,由2006年的3452例增至2015年的6997例,平均增幅为10.27%;病例波及全省11市119个县（市、区）,2011-2015年扩散至山西省所有县（市、区）,报告发病率介于10.26/10万~23.53/10万之间,平均发病率为15.51/10万;2014年发病数、发病率均达到有记录以来的最高水平,大同市、朔州市、晋中市和忻州市共报告布病37 619例,占全省报告病例总数的68.80%。布病监测点共采集职业人群血清25 190份,阳性2068人,阳性率为8.21%。全省共分离到布鲁氏菌226株,羊种布鲁氏菌225株,布鲁氏菌非典型菌株1株,羊种3型布鲁氏菌225株,占总分离菌株数的99.56%。结论 山西省近年来布病发病呈快速上升趋势,大同市、朔州市和晋中市布病流行水平较高,运城市和临汾市疫情增长较快,呈明显的季节性高发特征。布鲁氏菌流行优势菌种是羊种3型,应进一步加强布病防治,控制布病疫情。     

倍比稀释虎红平板凝集试验对布鲁氏菌病诊断的探讨

目的 探索倍比稀释虎红平板凝集试验（RBPT）作为布鲁氏菌病（布病）诊断实验的可能性。方法 选择2013年内蒙古自治区布病患者血清93份,同时进行试管凝集试验（SAT）和倍比稀释RBPT检测,根据二者实验结果的相关性,以SAT结果作为判定标准,分析不同稀释倍数的RBPT作为诊断截断值的灵敏度和特异度来评价诊断的准确性。结果 倍比稀释RBPT受试者工作特征曲线下面积为0.946,以1∶2为截断值时约登指数最高为0.893,灵敏度为89.30%,特异度为100%;以1∶4作为截断值,RBPT的灵敏度为63.10%,约登指数为0.631,特异度为100%;以1∶8作为截断值,RBPT的灵敏度为57.14%,约登指数为0.571,特异度为100%;以1∶16作为截断值,RBPT的灵敏度为19.05%,约登指数为0.191,特异度为100%。结论 倍比稀释RBPT以1∶2为截断值时诊断的准确性最高,可以为布病诊断提供参考。     

山西省天镇县人畜布鲁氏菌病血清学监测分析

目的 了解家畜布鲁氏菌病布病感染率与职业人群布病感染率的关系.方法 通过对天镇县6个自然村的人及家畜的布病血清学抽样调查,分析人布病感染率和家畜布病感染率的关系.结果 人布病感染率和家畜布病感染率呈直线正相关,统检验差异有统计学意义(r=0.884 25,P=0.0193＜0.05),其直线回归方程为Y=9.866+18.54x.结论 家畜布病的血清学监测可以预测布病疫情,同时家畜感染率可以考虑作为预警指标;另外降低人布病感染率,首先应该控制家畜布病的流行.     

2006年西藏部分地区布鲁氏菌病调查分析

目的　了解西藏那曲和昌都地区人群布鲁氏菌病（布病）的感染情况,掌握流行现状及特征。方法　用血清学试验方法检测人群布鲁氏菌抗体,了解布病感染情况。结果　采样人群布病阳性率为7.96%,其中男性感染率略高于女性;昌都地区的感染率较高于那曲地区。结论　西藏那曲、昌都地区存在布病流行。