抗HIV-1活性化合物作用靶点的快速判断方法

目前,艾滋病的防治工作主要依靠抗HIV-1药物,临床使用的抗HIV药物主要是逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、融合抑制剂和整合酶抑制剂。逆转录酶抑制剂包括核苷类逆转录酶抑制剂（NRTI）,如Zidovudine（AZT）、Lamivudine（3TC）、Emtricitabine（FrC）等,非核苷类逆转录酶抑制剂（NNRTI）,如Efavirenz（EFV）、Nevirapine（NVP）、Delavirdine（DLV）等。蛋白酶抑制剂主要有Ritanovir（RTV）、Saquinavir（SQV）、Indinavir（IDV）等。     

人乳头状瘤病毒18型E6E7基因诱导人胚食管上皮永生化

提要人乳头状瘤病毒18型E6E7AAV感染胎儿食管，建立一株新的人食管，上皮细胞株（SHEE），这株细胞成为永生化并继续繁殖超过60代。经过长时间的传代培养，其10代细胞表型保留原始上皮细胞培养物的特征，表现为单层生长和锚使依赖性生长，在软琼脂培养不形成克隆，接种裸鼠未成瘤。SHEE细胞系电镜检查可见张力原纤维，免疫组化检查细胞角质蛋白阳性，证实为鳞状上皮来源。荧光原位杂交和PCR检测显示有HPV18E6E7基因。结论：我们提供这株用HPV18E6E7基因成功地诱导永生化细胞株SHEE，支持HPV18可能和食管癌病因有关，它可用以…     

抗结核药物筛选模型荧光素酶报告系统的建立

目的:以ESX -1分泌系统为靶点,建立能够寻找既能抑制该系统发挥功能、降低结核菌毒力和细胞内生存力,又不抑制分枝杆菌生长、减少耐药性产生可能性的抗结核药物.方法:通过PCR的方法扩增得到Luciferase(LUC)、CFP-10及其突变体△CFP-10,应用搭桥的方法将二者融合,电击转化入海分枝杆菌,测定海分枝杆菌上清中LUC活性.结果:表达LUC-CFP-10融合蛋白重组海分枝杆菌上清中荧光素酶的活性是表达末端缺失7个氨基酸的LUC-△CFP-10融合蛋白的10倍左右.结论:可以通过检测LUC-CFP-10蛋白的分泌,即通过测定海分枝杆菌上清中荧光素酶活性来反映ESX -1分泌系统的活性,而该分析方法可以发展成为寻找ESX -1抑制剂的高通量筛选方法.     

人免疫缺陷病毒1(HIV-1)膜蛋白基因片段在酵母中的克隆表达

目的为获得足够量的膜糖蛋白,以便于对不同ＨＩＶ分离株膜糖蛋白的结构与功能进行进一步的研究。方法从人免疫缺陷病毒１（ＨＩＶ－１）ＨＸＢ２分离株原病毒基因组的重组质粒ｐＨＸＢ２中克隆了两段膜糖蛋白基因（ＥＮＶ）片段。以酵母穿梭诱导表达质粒ｐＹＥＳ２为载体,构建了两个相应的重组表达质粒ｐＹＥＮＶ１和ｐＹＥＮＶ２;进一步利用大肠杆菌β－半乳糖苷酶基因（β－ｌａｃＺ）构建了ＨＩＶ－１膜外糖蛋白ＤＮＡ片段与β－ｌａｃＺ基因的融合表达质粒。将此３种质粒分别转化单细胞真核生物酿酒酵母ＢＪ１９９１,得到的转化子经半乳糖诱导表达后进行菌体全蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析。结果克隆的基因片段在酿酒酵母中产生了分子质量为５０×１０３的特异性诱导蛋白;对含此融合表达质粒的酵母转化子半乳糖诱导后表达产物的免疫检测表明,与对照菌株相比,融合表达产物具有和ＨＩＶ－１阳性血清抗体反应的抗原性。结论可通过β－半乳糖苷酶活性的测定直接指示抗原片段的表达;为表达的膜糖蛋白片段的进一步分离纯化打下了一定基础     

佛波酯和人乳头瘤病毒在细胞恶性转化作用中的协同效应

目的探讨人乳头瘤病毒（HPV）和促癌物在肿瘤诱发过程中的协同作用。方法研究选择与恶性肿瘤关系密切的癌基因和抑癌基因，利用免疫组化、Southem Blot和半定量RNA斑点杂交的方法，研究在HPV18E6E7和促癌物佛波酯（TPA）的协同作用下，这些基因在细胞内的表达。结果HPVE6E7和TPA的协同作用可以引起细胞内癌基因c-myc的扩增4-8倍，c-erbB2的表达水平提高32-64倍，并导致抑癌基因p16的表达水平下降到正常水平的1／4．1／8。结论HPVE6E7和TPA的协同作用可以引起细胞内癌基因和抑癌基因表达水平异常，可能是细胞癌变的重要原因之一。     

新形势下医药科研院所产学研一体化的探讨

随着我国事业单位改革工作不断深化,处在转型过渡期的医药科研院所,需要通过加强产学研一体化,以实现可持续发展。目前,科研立项缺乏市场调研,科技转化吸引资金难度大,复合型人才缺乏。以上因素制约了医药科研院所产学研一体化。结合国外的经验,分析医药科研院所的优势与面临的挑战,通过创新药物占领市场,多渠道加强复合型人才的建设,与市场需求准确对接,以及借助“外脑”开发引资,加快产学研一体化的进程。产学研互相促进,进而达到社会效益和经济效益的双丰收。     

抗丙型肝炎药物研究进展——药物、靶点和耐药性

<正>丙型肝炎为丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)引起的全球性传染病。目前全球感染率约为3%,感染者约2亿人[1]。我国在2010年公布了一般人群的血清抗HCV阳性率为0.43%。丙型肝炎以输血为主要传播途径。15%~40%的感染者6个月内感染症状可自行消失[2-3],剩余60%~85%发展为慢性丙型肝炎[4],其中约20%的慢性丙型肝炎患者在慢性感染HCV后20年左右的时间内发展为肝硬化甚至肝脏衰竭或HCV相关的肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)[5]。目前丙型肝炎的预防     

HPV18型E6E7基因诱导胎儿食管永生化上皮的生物学特性

提要目的：研究SHEE生物学特性，包括增殖，分化和凋亡。方法：SHEE细胞系，199培基培养细胞，用光镜，电镜和荧光显微镜，免疫组化（Ki67，角蛋白），TdT标记，流式细胞仪和染色体分析。结果：细胞培养呈单层，锚定依赖和接触抑制生长。增殖指数PI34％，分裂指数MI2．74％（1．2％－4．8％），凋亡指数AI1．30％－6.90m％，核染色体分析46条为主（44－54条）和细胞周期DNA呈2倍体核型分布。电镜可见胞浆有张力原纤维和角蛋白免疫组化证实鳞状上皮有分化特征。结论：从生物学行为看来，SHEE细胞株接近于其来源组织胎儿食管上皮基…     

藏柴胡中三萜皂苷类成分的研究

该研究主要探究藏柴胡中的三萜皂苷类成分。采用大孔吸附树脂,MCI,硅胶,ODS,MDS柱色谱以及半制备高效液相色谱等分离纯化方法,从藏柴胡70%乙醇(含0.5%氨水)提取物中得到12个化合物。利用高分辨质谱、核磁共振等波谱手段鉴定其结构分别为柴胡皂苷b2(1),柴胡皂苷a(2),柴胡皂苷b1(3),柴胡皂苷d(4),hydroxysaikosaponin a(5),柴胡皂苷b3(6),柴胡皂苷c(7),柴胡皂苷i(8),柴胡皂苷f(9),chikusaikosidesⅡ(10),柴胡皂苷s(11),柴胡皂苷I(12)。12个化合物均属齐墩果烷型三萜皂苷类化合物,其中化合物1,3,5,8~9,11~12均为首次从该植物中分离得到。体外抗流感病毒实验表明在20μmol·L-1下,化合物2,4,6,8,11~12对流感病毒WSN33具有较明显抑制作用,其抑制率分别为91.3%,88.6%,53.4%,61.3%,77.3%,57.4%。