幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白的表达及免疫原性

目的克隆幽门螺杆菌(Hp)中性粒细胞激活蛋白(NAP)基因并制备其原核表达系统,研究其表达蛋白的免疫原性,为Hp疫苗研制提供理论依据。方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增Hp-NAP基因,测序并作同源性分析后,亚克隆入原核表达载体pET-22b,转化表达菌BL21-CodonPlus(r)(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析,Western blot鉴定其免疫原性。结果PCR扩增一408 bp产物,与基因库中相关序列具有高度同源性(>98%)。重组质粒pET-22b-nap转化BL21-CodonPlus(r)(DE3)后表达一相对分子质量约19 000的融合蛋白,能与Hp全菌抗体产生结合反应,Western blot显示特异的单一条带。结论成功构建Hp-NAP原核表达系统,所表达NAP融合蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,可作为Hp疫苗的候选抗原。     

应激性溃疡时大鼠胃壁细胞功能及超微结构的动态变化

目的:探讨应激条件下大鼠胃壁细胞泌酸功能和超微结构的动态变化及与急性胃粘膜损伤之间的关系。方法: 将32只雄性SD大鼠随机分成4组, 即对照组、水浸束缚应激1, 2、 4 h组。检测各组胃液pH值、胃粘膜溃疡指数(UI), 并取腺胃区粘膜制作透射电镜标本, 观察壁细胞超微结构变化。结果: 应激条件下大鼠胃泌酸多于对照组, 随应激时间延长胃液pH值明显低于对照组(P<0.01);UI随应激时间延长明显增加(P<0.01), 与pH值之间呈明显负相关(r=-0.987, P<0.01);电镜下见对照组壁细胞呈静息状态, 而应激1、 2、 4 h组壁细胞呈现不同的激活状态, 且以4 h为明显, 壁细胞内线粒体丰富, 分泌小管密集, 囊管泡减少或消失, 呈明显泌酸活跃状态。结论: 水浸束缚应激可引起大鼠胃酸分泌增加, 这与壁细胞超微结构改变相一致, 并与胃粘膜损伤程度有明显相关性。提示胃酸在应激性溃疡的发生发展过程中具有重要意义。     

携带幽门螺杆菌ureB和IL-2质粒DNA的减毒鼠伤寒沙门菌疫苗构建

目的　构建编码幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,H .pylori)尿素酶B亚单位 (ureB)基因和小鼠IL 2基因以减毒鼠伤寒沙门菌为载体的核酸疫苗 ,体外转染Cos 7细胞 ,鉴定其表达蛋白的免疫性。方法　应用聚合酶链式反应 (PCR)技术从H .pylori标准菌株CCUG1 7874基因组DNA扩增ureB基因 ,从重组质粒 pCIneo IL 2扩增小鼠IL 2基因 ,通过T A克隆分别插入 pUCmT载体 ,检测ureB及IL 2的核苷酸序列 ,通过酶切、连接反应分别克隆入真核表达载体 pIRES ,PCR和酶切反应进行鉴定 ;重组载体 pIRES ureB和 pIRES ureB IL 2转入减毒鼠伤寒沙门菌LB50 0 0 ,抽提质粒 ,再次转入SL72 0 7,反复传代 ,鉴定核酸疫苗载体菌的稳定性。通过脂质体法将重组载体 pIRES ureB和pIRES ureB IL 2转染Cos 7细胞 ,SDS PAGE及Westernblot法检测表达蛋白的免疫性。结果　扩增出长约 1 70 0bp的ureB基因和 51 0bpIL 2 ,测序结果表明 ,扩增出的ureB基因与基因库H .pyloriureB序列一致 ,IL 2序列和小鼠的IL 2序列一致 ,PCR和酶切鉴定结果证实ureB和IL 2基因克隆入真核表达载体 pIRES ,并成功构建了稳定的幽门螺杆菌ureB和IL 2基因以减毒鼠伤寒沙门菌为载体的核酸疫苗 ,并且以Westernblot检测到特异性的相对分子质量 (Mr)为 6 6× 1 0 3的UreB蛋白     

13C-尿素呼气试验及其临床应用

幽门螺杆菌(Hp)是慢性胃炎、消化性溃疡的主要致病菌,并与胃癌、MALT淋巴瘤的发生发展密切相关.Hp感染的诊断方法中血清学检查和尿素呼气试验具有非侵入性、无痛苦和检查相对简单等优点 [1].为评价13C呼气试验(13CUBT)对Hp感染的诊断价值,我们引入深圳市微侵袭医疗技术有限公司提供的HeliView气相层析/核素比率质谱仪(韩国产),对2 010例在我科门诊或住院的患者进行检测分析,现将结果报告如下.     

甲胎蛋白异质体对原发性肝癌早期诊断的研究

用植物凝集素亲和交叉免疫电泳自显影法检测78例原发性肝细胞癌和40例良性肝病患者血清的AFP异质体。肝癌组AFP浓度124～56000ng/ml,肝病组AFP浓度31～980ng/ml。不论是应用LCA或ConA,均可将AFP分成两种异质体,分别称之为LCA结合型(AFP-R-L)和非结合型(AFP-N-L);ConA结合型(AFP-R-C)和非结合型(AFP-N-C)。以AFP-N-L<75％或AFP-R-C<100％为界诊断肝癌,肝癌组的阳性率分别达87.2％和89.7％,而肝病组的阳性率仅为2.5％和17.5％根据通常的AFP>400ng/ml的肝癌诊断标准,肝癌组的阳性率为78.2％,肝病组的假阳性率高达20％。结合检测AFP异质体诊断肝癌(用LCA分型),阳性率提高至97.4％,假阳性率降为2.5％。     

caspase—1激活的细胞因子与急性胰腺炎

促炎症细胞因子白细胞介素l—β(1L—lβ)在急性胰腺炎发病过程起着关键性作用。本文综述cas-Pase—l激活的细胞由子IL—1β、IL—18在急性胰腺炎发病机制中的作用及casPase—l抑制剂的研究进展。     

大鼠肝癌侵入性微波治疗实验研究

本文报道采用单极同轴天线插入肿瘤,进行微波局部高温治疗肝癌的动物实验,并以正常动物进行对照,实验结果肝癌直径在1cm以内者肿瘤细胞全部死亡。肝癌鼠经微波治疗后生存期比不治疗肝癌鼠显著延长,前者90天未死,后者平均存活31天。微波对肝脏功能改变有影响,其中以血清酶的变化最为明显,术后2小时开始升高,第7天恢复正常。应引起重视的治疗后淋转率大幅度下降,两周仍未复原。为防止治疗后肝液化坏死,感染脓肿形成,术后应常规使用抗生素预防感染。     

常温下全肝血流阻断动物实验研究

肝脏血管丰富,组织脆嫩,手术中容易出血。目前肝脏手术仍较其他腹部手术出血多,特别对巨大肝脏肿瘤或已侵犯肝门区、肝静脉、下腔静脉的小肿瘤,常因出血问题不能解决而放弃手术治疗。对严重复杂的肝外伤,尤其已波及肝静脉或下腔静脉的肝外伤,也常因止血困难而致使抢救失败。因此,研究一种有效