PEDF下调 HIF-1α表达抑制缺氧状态下NSCLC细胞增殖、迁移的作用机制

目的:研究色素上皮衍生因子（PEDF）对缺氧状态下非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖、迁移和缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达的影响。方法:体外培养NSCLC细胞A549,氯化钴（CoCl2）100 μmol/L 模拟缺氧环境。实验分为4组:正常对照组（A组）、氯化钴干预组（B组）、氯化钴＋PEDF 50 ng/ml干预组（C 组）及氯化钴＋PEDF 200 ng/ml干预组（D组）。MTT检测各组细胞增殖能力,进行划痕实验,在光镜下观察实验组和对照组细胞的移行情况;进行Transwell小室侵袭实验,计算细胞穿透数;进行ELISA法检测各组细胞培养液上清中HIF-1α、血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达水平。结果:细胞增殖能力:B组较A组增加,C组较B组降低,D组较C组降低,各组间差异均具有统计学意义（P<0.05）;细胞迁移能力:B组较A组增加,C组较B组降低,D组较C组降低,各组间差异均具有统计学意义（P<0.05）;细胞穿透数:B组较A组增多,C组较B组减少,D组较C组减少,各组间差异均具有统计学意义（P<0.05）;HIF-1α和VEGF的表达水平:B组较A组升高,C组较B组下降,D组较C组下降,各组间差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论:肺癌A549细胞在缺氧环境较常氧具有更强的增殖力和移行能力;可以分泌HIF-1α,HIF-1α对VEGF的表达有一定的促进作用。PEDF对缺氧状态下A549细胞高表达的VEGF具有一定抑制作用,且该抑制作用可能与PEDF调控HIF-1α有关。     

改良CVP联合rhG-CSF动员方案外周血干细胞移植治疗血液肿瘤及实体瘤41例

目的:研究改良CVP联合rhG-CSF方案对血液肿瘤和实体瘤41例患者自体外周血干细胞移植(APBSCT)动员及造血重建效果.方法:2001年3月至2006年3月采用改良CVP联合rhG-CSF动员方案,完成APBSCT 41例(血液肿瘤32例,实体瘤9例),平均年龄39.6岁(18岁～67岁).WBC升至4.0×109/L左右采集单个核细胞(MNC)并计数MNC和CD34 细胞数;预处理结束48h～72h回输MNC.结果:动员期间患者WBC均降至1.0×109/L以下,PLT 40×109以下.34例1次采集成功,7例(双次移植5例)作第2次采集.采集MNC数 0.9×108/kg～8.3×108/kg(2.8±2.0 ×108/kg),CD34 细胞1.1×106/kg～9.4×106/kg(3.2±2.6×106/kg).预处理后所有病例均达到骨髓抑制,WBC恢复到1.0×109/L时间为 8～ 16d(平均 11.3d);38例PLT恢复到50×109/L时间为 13～ 22d(平均 16.8d),3例PLT恢复延迟,最长 35d.随访15～65个月,持续完全缓解19例(46.3%),部分缓解或好转13例(31.7%),总有效率78.0%,无效9例(22.0%),无1例发生移植相关死亡(其中5例带瘤生存,17例死亡).结论:改良CVP联合rhG-CSF动员方案行APBSCT是一种安全有效的动员自体外周血造血干细胞的方法,临床疗效满意.     

Flt3配体胞外域的原核表达纯化及对脐血CD34~＋细胞的扩增作用

背景：Fms样酪氨酸激酶3配体（Flt3配体）是一种重要的生长因子,通过激活特定的酪氨酸激酶受体,调控造血细胞的生长、生存和/或分化,具有促进造血干细胞体外扩增的应用潜力。目的：构建pET32a（＋）-hFLext原核表达载体,表达、纯化hFLext蛋白,观察其对脐血CD34＋细胞的扩增作用。方法：克隆hFLext,构建pET32a（＋）-hFLext重组表达载体。转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导蛋白表达,镍珠亲合层析纯化蛋白。磁珠分选脐血CD34＋细胞,单独加入hFLext或联合干细胞因子、血小板生成素孵育1周,观察体外扩增作用。结果与结论：成功克隆hFLext,并构建了pET32a（＋）-hFLext重组表达载体。在大肠杆菌BL21成功表达Trx-hFLext融合蛋白,经8mol/L尿素变性包涵体蛋白,逐步透析复性,镍珠亲合层析纯化蛋白,成功获得高纯度的Trx-hFLext融合蛋白。Trx-hFLext融合蛋白不仅具有维持及轻度刺激CD34＋细胞体外扩增的作用,并且与干细胞因子及血小板生成素具有协同作用,为造血干/祖细胞体外扩增研究奠定了基础。     

Flt3配体胞外域的原核表达纯化及对脐血CD34+细胞的扩增作用

背景:Fms 样酪氨酸激酶3配体(Flt3配体)是一种重要的生长因子,通过激活特定的酪氨酸激酶受体,调控造血细胞的生长、生存和/或分化,具有促进造血干细胞体外扩增的应用潜力.目的:构建pET32a(+)-hFLext原核表达载体,表达、纯化hFLext蛋白,观察其对脐血CD34+细胞的扩增作用.方法:克隆hFLext,构建pET32a(+)-hFLext重组表达载体.转化大肠杆菌 BL21,IPTG诱导蛋白表达,镍珠亲合层析纯化蛋白.磁珠分选脐血CD34+细胞,单独加入hFLext或联合干细胞因子、血小板生成素孵育1周,观察体外扩增作用.结果与结论:成功克隆hFLext,并构建了pET32a(+)-hFLext重组表达载体.在大肠杆菌BL21成功表达Trx-hFLext融合蛋白,经8 mol/L尿素变性包涵体蛋白,逐步透析复性,镍珠亲合层析纯化蛋白,成功获得高纯度的Trx-hFLext融合蛋白.Trx-hFLext融合蛋白不仅具有维持及轻度刺激CD34+细胞体外扩增的作用,并且与干细胞因子及血小板生成素具有协同作用,为造血干/祖细胞体外扩增研究奠定了基础.     

Flt3配体胞外域的原核表达纯化及对脐血CD34+细胞的扩增作用*

背景：Fms 样酪氨酸激酶3配体(Flt3配体)是一种重要的生长因子,通过激活特定的酪氨酸激酶受体,调控造血细胞的生长、生存和/或分化,具有促进造血干细胞体外扩增的应用潜力。 目的：构建pET32a(+)-hFLext原核表达载体,表达、纯化hFLext蛋白,观察其对脐血CD34+细胞的扩增作用。 方法：克隆hFLext,构建pET32a(+)-hFLext重组表达载体。转化大肠杆菌 BL21,IPTG诱导蛋白表达,镍珠亲合层析纯化蛋白。磁珠分选脐血CD34+细胞,单独加入hFLext或联合干细胞因子、血小板生成素孵育1周,观察体外扩增作用。 结果与结论：成功克隆hFLext,并构建了pET32a(+)-hFLext重组表达载体。在大肠杆菌BL21成功表达Trx-hFLext融合蛋白,经8 mol/L尿素变性包涵体蛋白,逐步透析复性,镍珠亲合层析纯化蛋白,成功获得高纯度的Trx-hFLext融合蛋白。Trx-hFLext融合蛋白不仅具有维持及轻度刺激CD34+细胞体外扩增的作用,并且与干细胞因子及血小板生成素具有协同作用,为造血干/祖细胞体外扩增研究奠定了基础。     

地西他滨联合CAG方案治疗不适合标准方案化疗的急性髓系白血病

目的 研究地西他滨联合CAG方案治疗不适合标准方案化疗的急性髓系白血病(AML)的安全性及有效性.方法 回顾性分析2013年1月至2015年5月就诊的不适合常规方案化疗的20例初诊AML患者的临床资料.所有患者诱导治疗应用地西他滨联合CAG方案,缓解后治疗应用原诱导方案26例次,标准"3+7"方案治疗7例次,中剂量阿糖胞苷3例次,疗程共2~8个周期.结果 20例患者全部完成首次诱导治疗,完全缓解(CR)11例,部分缓解(PR)5例,无效(NR)4例,总有效率(ORR)80.0%(16/20).高危组ORR 69.2%(9/13),中低危组ORR 100.0%(7/7).伴有骨髓增生异常综合征(MDS)相关改变的AML患者ORR 60.0%(6/10).诱导过程发生感染8例(40.0%).死亡2例,死因均为肺部感染.平均输注红细胞(9.1±5.7)U,平均输注血小板(57.5±51.9)U.中性粒细胞恢复时间(8.7±5.6)d.所有患者至少随访1年,共死亡12例.3个月、6个月及1年总生存率分别为85.0%、80.0%及40.0%,获得CR的12例患者3个月、6个月及1年无复发生存率分别为75.0%、75.0%及65.6%.结论 地西他滨联合CAG方案耐受性好,诱导缓解率高,可用于不适合标准方案化疗的AML的一线治疗.     

化疗联合微移植诱导治疗难治及复发急性髓系白血病疗效观察

目的 研究化疗联合微移植方案治疗难治及复发急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)的疗效.方法 收集2014年2-8月在唐都医院血液内科采用化疗联合微移植方案诱导治疗的12例难治及复发急性髓系白血病患者,对治疗效果进行分析.结果 12例患者均完成1个疗程的化疗联合微移植,其中获得完全缓解3例,部分缓解3例,未缓解6例,有效率50％.达到完全缓解的3例中2例随后分别行二次微移植、异基因骨髓移植治疗,1例患者在第1次微移植后1个月时出现移植物抗宿主病(GVHD)导致死亡.部分缓解3例中2例行二次微移植治疗,仍未缓解,1例放弃治疗.6例未缓解中2例分别行二次微移植、异基因骨髓移植结果均未缓解,2例因并发症于院外死亡,2例放弃治疗.结论 化疗联合微移植提高了难治、复发ANLL的缓解率,并且降低单纯化疗的毒性作用,是难治复发ANLL的较好的治疗手段.     

融合蛋白TRX-hJagged1原核表达载体的构建及其在BL21中的表达

本研究旨在构建原核表达载体并原核表达Notch配体Jagged1。构建不同长度但均包含DSL区的原核表达载体pET-hJagged1,将构建重组原核表达载体pET—hJagged1转化大肠杆菌BL21后,予以IPTG诱导,优化诱导条件,使目的蛋白TRX—hJagged1在上清中有较大量表达。诱导工程菌并以镍柱纯化对可溶性的目的蛋白进行纯化。结果表明,成功构建了原核表达载体pET—ldaggedl（Bg1Ⅱ）、pET—hJagged1（Hind1）及pET-hJagged1（stuI）,但仅pET—hJagged1（StuI）表达可溶性的TRX—hJagged1。通过镍柱纯化获得了较单一的TRX—Jagged1蛋白,WesternBlot证实了其为目的蛋白。结论：成功地构建了原核表达载体pET—hJagged1,并在原核表达系统表达了TRX-Jagged1融舍蛋白,为进一步研究Jagged1在淋巴造血系统中的作用奠定了基础。     

急性淋巴细胞白血病合并高嗜酸细胞综合征(附1例报告及文献综述)

目的:报告1例急性淋巴细胞白血病合并高嗜酸细胞综合征(ALL/Eo)患者并结合文献进行讨论.方法:男性患者17岁,因胸闷、低热1 mo入院.除具有浅表淋巴结和脾脏肿大、胸骨压痛及骨髓原始幼稚淋巴细胞比例增高的ALL临床特点外,还具红斑性皮疹、血栓形成(脾)和心肌内膜纤维化典型HES的临床表现.结果:入院诊断ALL/Eo,由于经济困难放弃治疗,出院3 mo后死亡.结论:ALL/Eo是一种罕见病例,一种独特的临床病理学类型,目前全世界报告有50余例.患者外周血持续性嗜酸细胞增高同时找不到幼稚淋巴细胞且无全血细胞减少,诊断时应全面考虑.