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目的 构建 SJIR - 2 基因的真核表达载体,检测该基因在真核细胞内的表达,为进一步研究该基因作为血吸虫免疫疫苗打下基础。 方法 PCR 反应扩增出目的基因 SJIR - 2 后插入到真核表达载体 pEG FP 中,双酶切鉴定并进行序列测定,以脂质体介导的方法转染 293T 细胞,再以 Western blot 方法检测该基因的编码蛋白在 293T 细胞内的表达情况。 结果 PCR 反应扩增出目的基因 SJIR - 2,构建了 pEGFP - SJIR - 2真核表达载体,双酶切鉴定插入片段大小正确,DNA 测序结果与 GeneBank 中的 SJIR - 2 基因序列同源性为100% ,重组基因成功转染进 293T 细胞中,Western blot 检测出该蛋白在 293T 细胞内的表达。 结论 成功构建了 pEGFP - SJIR - 2 真核表达载体,该基因编码的蛋白可以在真核细胞内表达,为我们进一步探索 SJIR -2 基因的重组疫苗在血吸虫病防治中的作用打下基础。 相似文献
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背景 氯离子通道阻滞剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)对家兔心肌细胞缺血-再灌注损伤时的细胞凋亡有促进作用,而小梁细胞上也存在ClC型氯离子通道及容积敏感性氯离子通道,但NPPB究竟会对小梁细胞的形态和功能产生什么影响尚不清楚. 目的 探讨氯离子通道阻滞剂NPPB对人眼小梁细胞增生及细胞周期、细胞凋亡的影响.方法 将处于对数生长期的永生株人眼小梁细胞进行培养并以1×106个/ml的密度接种于96孔培养板,将不同浓度(10、50、100 μmol/L)的NPPB分别加入小梁细胞培养基中,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组小梁细胞的增生情况以吸光度(A)值表示;采用流式细胞术测定小梁细胞的细胞周期.将100 mg/L 5-氟尿嘧啶(5-FU)加入培养的细胞中,而另一组培养的细胞中加入100 mg/L 5-FU+100μmol/L NPPB,用Annexin V-PI法检测各组小梁细胞的凋亡情况;罗丹明123法检测细胞线粒体膜电位(△ψm),分别评估各浓度NPPB对培养的人小梁细胞生长和存活的影响.结果 3种不同浓度的NPPB与小梁细胞共同孵育48 h后4个组小梁细胞的增生率差异有统计学意义(F=7.230,P=0.006),50 μmol/L、100μmoL/L NPPB作用后小梁细胞的A值明显低于10 μmol/L NPPB组,50 μmol/L NPPB组、100μmol/LNPPB组与空白对照组比较差异均有统计学意义(t=1.610,P=0.025;t=12.270,P=0.001).小梁细胞培养基中加入NPPB 48 h后,G0/G1期的细胞比例增多,S期细胞比例减少,各细胞周期小梁细胞的比例与未加NPPB的组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).用5-FU作用24 h及48 h后,100 mg/L 5-FU组和100 mg/L5-FU+100μmol/L NPPB组的细胞凋亡率均较其各自空白对照组增加(t24h=2.130,P=0.023;t48h=4.810,P=0.011);100 mg/L 5-FU+100 μmol/L NPPB组细胞凋亡率明显高于100 mg/L 5-FU组,差异均有统计学意义(t24h=1.980,P=0.037;t48h=1.290,P=0.028),小梁细胞线粒体膜电位降低,差异均有统计学意义(t24h=1.580,P=0.029;F48h=6.200,P=0.015).结论 氯离子通道阻滞剂NPPB可抑制小梁细胞增生,抑制小梁细胞通过G1/S期限制点进入S期;NPPB对5-FU诱导的小梁细胞凋亡有促进作用,与内源性线粒体凋亡通路相关. 相似文献
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目的:建立大鼠慢性高眼压模型,检测孕酮对高眼压下大鼠视网膜神经节细胞的保护作用。方法:通过烧灼3条巩膜上静脉制作慢性高眼压动物模型,此模型按腹腔注射不同浓度的孕酮而分为高、中、低浓度孕酮注射组及空白对照组,左眼为模型眼,右眼为自身对照眼,3个月后处死动物,取眼球制石蜡切片,行HE染色、Thy-1.1免疫组化染色及TUNEL原位凋亡检测。结果:各组模型眼比较,高浓度孕酮注射组视网膜神经节细胞数多于低、中浓度孕酮注射组及空白对照组(P<0.05),且TUNEL阳性细胞数也少于低、中浓度孕酮注射组及空白组(P<0.05)。结论:孕酮对慢性高眼压模型大鼠的视网膜神经节细胞有保护作用,并且此保护作用与孕酮的浓度有关。 相似文献
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流感是由流感病毒引起的一种严重危害公众健康的呼吸道传染病,已引起全球的高度关注,接种疫苗是预防流感最有效的措施。当前,建立快速流感疫苗研发生产平台对于流感的预防与控制至关重要。以病毒为载体的活疫苗为感染性疾病的防控提供了新的手段。改良型痘苗病毒安卡拉株(Modified Vaccinia virus Ankara,MVA)是一种复制缺陷型病毒载体。MVA能够同时容纳并表达多个外源抗原、诱导较好的体液和细胞免疫应答并具备良好的安全性,具有成为理想疫苗载体的潜力。本文就MVA载体在流感疫苗研究中的应用做一综述。 相似文献
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目的 探讨氯离子通道阻滞剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸[5-nitro-2-(3-phenyl-propylamino)-benzoic acid,NPPB]对体外培养人眼小梁细胞增殖的影响.方法 RT-PCR检测体外培养人眼小梁细胞ClC-3 mRNA表达,用不同浓度的NPPB作用体外培养的人眼小梁细胞,台盼蓝染色细胞计数法检测细胞存活率,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测其增殖能力.结果 体外培养人眼小梁细胞存在ClC-3 mRNA表达;不同浓度NPPB作用后小梁细胞存活率无显著差异;在一定浓度范围内(50~100 μmol/L),NPPB均可使体外培养的人眼小梁细胞增殖能力下降,其中100 μmol/L NPPB的作用最强.结结论一定浓度的NPPB可降低体外培养的人眼小梁细胞增殖能力. 相似文献
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目的探讨新生血管性青光眼的手术治疗方法。方法对15例(15眼)新生血管性青光眼患者施行小梁切除术+全周边视网膜冷凝+睫状体冷冻术。结果所有病例术后随访6~24个月,12例眼压控制良好,手术成功率为80%,3例再次行睫状体冷冻术,2例眼压控制良好。结论小梁切除术+睫状体冷冻术+全视网膜冷凝术是治疗新生血管性青光眼一种简单、经济、有效的方法。 相似文献
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疫苗接种是预防流感最有效和经济的手段.当前使用的流感疫苗主要是作用于特异性的流感病毒表面糖蛋白血凝素,只能对和疫苗株匹配的流行株提供保护,因此每年需要对疫苗株进行更新.研发能够预防不同亚型流感病毒的广谱疫苗成为流感疫苗研究的热点.M2e是甲型流感病毒保守片段,可作为广谱流感疫苗的候选抗原,是目前广谱流感疫苗研究的热点.... 相似文献