血友病A基因治疗的初步实验研究

目的：制备血友病A的治疗基因，从in vivo途径观察人凝血因子Ⅷ（hFⅧ）在动物体内的表达。方法：将B区缺失（760－1639位氨基酸）的hFⅧcDNA克隆至真核细胞表达载体pRC/RSV，与传染试剂DOTAP－Cholesterol liposome混合，制备治疗基因pRC/RSV-hFⅧBD-DOTAP-Cholesterol。肌肉注射给BALB／c小鼠后，在第2，10，20，30，40，50天取小鼠的血液以及心、肝、脾、肺、肾、骨髂肌等组织。检测血浆中的hFⅧ抗原和抗体，用PCR和RT－PCR方法检测hFⅧBDcDNA在小鼠各组织基因组中的分布及其转录情况，免疫组织化学染色检测各组织中hFⅧ的表达。结果：在注射结束后的第48小时，小鼠血浆和组织中即有hFⅧ的表达，第10天血浆中的hFⅧ抗原水平最高。达17＝55ng/ml，以后逐渐下降，血浆中的hFⅧ抗体在注射结束后的第10天出现，以后缓慢升高，第50天时达37．06U/ml。PCR、RT－PCR检测和免疫组织化学染色显示小鼠各组中均有hFⅧBDcDNA的存在、转录和表达，但随着时间推移逐渐减少。脾、肺、肾脏中hFⅧBDcDNA的转录和表达时间均长于心脏、肝脏和骨骼肌。结论：由pRC/RSV-hFⅧBD与DOTAP－Cholesterol liposome结合而制备的治疗基因pRC/RSV-hFⅧBD-DOTAP-Cholesterol能够通过in vivo途径在动物体内很好地表达hFⅧ，这为临床基因治疗血友病A提供了实验依据。     

血清炎性指标联合评估社区获得性肺炎严重程度的价值

目的 探讨血清炎性指标联合评估社区获得性肺炎(CAP)严重程度的价值.方法 选择2018年4月至2020年4月该院呼吸内科收治的60例CAP患者为研究对象,所有患者入院前根据CAP CURB-65评分系统得分分为轻度20例,中度24例,重度16例.所有患者于清晨抽取空腹静脉血5 mL,连续采集4份血样,测定C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、白细胞介素(IL)-6、IL-10水平,对比不同感染程度患者血清炎症因子水平,利用ROC曲线分析CRP、PCT、IL-6、IL-10水平评估中重度CAP的价值,通过Kappa分析CRP、PCT、IL-6、IL-10水平联合评估中重度CAP的价值.结果 CAP病情越严重,CRP、PCT、IL-6、IL-10水平越高,差异均有统计学意义(P＜0.05).经ROC曲线分析显示CRP、PCT、IL-6、IL-10水平对中重度CAP有一定的评估价值,曲线下面积(AUC)分别为0.730、0.677、0.729、0.744;CRP、PCT、IL-6、IL-10联合评估中重度CAP的灵敏度为0.880,特异度为0.867,准确度为0.875,Kappa值为0.875.结论 CRP、PCT、IL-6、IL-10联合可用于CAP严重程度的评估,同时联合评估灵敏度高,特异度好,值得临床推广应用.     

KLF5沉默通过抑制NF-κB信号通路减少氧化应激条件下心肌细胞炎症因子分泌

目的研究沉默Krüpple样因子5(KLF5)对氧化应激条件下心肌细胞炎症因子分泌的影响及机制。方法心肌H9c2细胞用过氧化氢处理,qRT-PCR和Western blot检测细胞中KLF5 mRNA和蛋白表达水平。用KLF5 shRNA慢病毒感染H9c2细胞,给予过氧化氢处理后,qRT-PCR和Western blot检测细胞中KLF5表达水平。MTT检测沉默KLF5对过氧化氢处理的心肌细胞活性的影响,同时用qRT-PCR法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA水平,Western blot检测细胞中核因子-κBp65(NF-κBp65)蛋白水平。用NF-κB激活剂处理沉默KLF5的心肌细胞,MTT检测其在过氧化氢处理后细胞活性,qRT-PCR法检测过氧化氢处理后细胞中TNF-α、IL-1β水平。结果过氧化氢诱导H9c2细胞中KLF5 mRNA和蛋白表达。KLF5 shRNA慢病毒感染可下调氧化应激条件下H9c2细胞中KLF5的表达。过氧化氢能够下调H9c2细胞活性,提高细胞分泌的TNF-α、IL-1β水平,促进细胞中NF-κBp65蛋白表达。沉默KLF5能够提高过氧化氢条件下H9c2细胞经活性,减少细胞分泌TNF-α、IL-1β,抑制细胞中NF-κBp65蛋白表达。NF-κB激活剂可以逆转沉默KLF5对过氧化氢处理的心肌细胞增殖活性、炎症因子分泌的影响。结论氧化应激诱导心肌细胞表达KLF5,沉默其表达可以通过抑制NF-κB通路减少心肌细胞中炎症因子表达。     

丁酸钠诱导人凝血因子Ⅷ的体外表达

目的：观察丁酸钠对人凝血因子Ⅷ（hFⅧ）表达的作用，并初步探讨其机制。方法：采用B区缺失（760－1639氨基酸）的hfⅧ cDNA(BDD-hfⅧcDNA)的重组质粒载体pRC/RSV-BDD-hFⅧ转化体外培养的小鼠NIH/3T3细胞，经丁酸钠作用后，分别采用一期法和ELISA法检测细胞培养上清中hfⅧ的活性（hfⅧ：C）的抗原含量（hfⅧ：Ag），并运用体外细胞核连缀反应技术（Run-on assay)观察丁酸钠对编码BDD－hfⅧ全长、重链和轻链的cDNA转录的影响。结果：经丁酸钠诱导后，hfⅧ：C和hfⅧ：Ag较对照组提高了约70％。Run-on assay显示丁酸钠通过增强BDD－hfⅧ重链基因的转录进而增强BDD－hfⅧcDNA全长的转录，因而提高hfⅧ cDNA的表达水平。结论：丁酸钠通过增强编码hfⅧ重 cDNA的转录进而提高hfⅧ的表达水平，因而是一个很有前途的诱导hfⅧ表达的化学物。     

麝香保心丸对急性冠状动脉综合征患者PCI术预后的影响

目的:观察麝香保心丸对急性冠状动脉综合征患者经皮冠状动脉介入治疗手术(percutaneous coronary intervention,PCI)术后预后的影响。方法:将200例急性冠状动脉综合征患者按随机数字表法分为观察组和对照组,每组100例。对照组患者术后采用常规西药治疗,观察组采用常规西药联合麝香保心丸治疗。观察两组患者治疗前后血脂指标、高敏C反应蛋白(high sensitivity C reactive protein,hs-CRP)和基质金属蛋白酶(matrix metallo proteinase-9,MMP-9)情况。结果:(1)观察组患者治疗后的血脂指标包括总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)、甘油三酯(triglyceride,TG)水平值分别为(3.72±0.48)mmol·L~(-1)、(1.86±0.27)mmol·L~(-1)、(1.29±0.22)mmol·L~(-1),显著低于对照组的(4.31±0.56)mmol·L~(-1)、(2.30±0.59)mmol·L~(-1)、(1.47±0.42)mmol·L~(-1),组间比较,差异有统计学意义(P0.05)。而治疗后两组患者高密度脂蛋白胆固醇(highdensity lipoprotein-cholesterol,HDL-C)分别为(1.37±0.34)mmol·L~(-1)、(1.30±0.29)mmol·L~(-1),组间比较,差异无统计学意义(P0.05);(2)观察组患者治疗后hs-CRP和MMP-9结果分别为(4.29±1.24)mg·L~(-1)、(120.93±12.81)μg·L~(-1),显著低于对照组的(9.81±2.65)mg·L~(-1)、(149.65±18.67)μg·L~(-1),组间比较,差异有统计学意义(P0.05);(3)观察组不良反应发生率为13.00%高于对照组的8.00%,组间比较,差异无统计学意义(P0.05);(4)患者进行为期12个月随访观察,观察组不良反应发生率为9.00%,显著低于对照组的19.00%,组间比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:急性冠状动脉综合征患者PCI手术后应用麝香保心丸进行支持治疗,可降低患者血脂水平,对患者心肌损伤有保护作用,改善PCI术后的预后效果,且不良反应少。     

PAMAM-D纳米载体介导TF反义寡脱氧核苷酸防治心肌缺血再灌注损伤的实验研究

目的 研究聚酰胺-胺型树枝状高聚物(PAMAM-D)纳米载体介导组织因子(TF)反义寡脱氧核苷酸对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用.方法 分别设计合成针对大鼠TF的反义寡脱氧核苷酸(AS/TF)、正义寡脱氧核苷酸(S/TF)和错配寡脱氧核苷酸(Sc/TF),将该三种寡脱氧核苷酸偶联于PAMAM-D纳米载体,构建寡核苷酸-P...     

主灶切开外口扩创引流治疗复杂性肛瘘136例

我们采用主灶切开外口扩创置管引流治疗复杂性肛瘘136例,取得满意疗效,现报告如下。 临床资料：本组男85例,女51例;年龄15～72岁,平均32岁;病程1个月至13年。低位复杂性肛瘘98例,高位复杂性肛瘘38例。     

C-反应蛋白与血栓形成的研究进展

1 C-反应蛋白的结构及生物学特性 1.1 CRP的基因结构：其人的编码基因位于1号染色体长臂上（1q21-1q23）,长约2.3kb,有2个外显子和1个内含子。第一个外显子编码一个信号肽,第二个外显子是编码成熟蛋白质的氨基酸。内含子为278个核苷酸的GT重复序列。而该内含子使编码区的信号肽（第一个外显子）与编码区的成熟蛋白（第二外个显子）隔开。CRP基因表达主要在转录水平调控,主要由IL6,IL1,TNF-α及其它细胞因子调控。     

纠纷病案在医学生医患沟通带教中的应用

目的：探讨纠纷病案在医学生医患沟通带教中的应用。方法：以32名医学生作为教学对象,在建立纠纷病案库的基础上,开展病案分析、讨论及评价,学生参与沟通全过程演示,从中学到沟通技巧。结果：92％的学生认为能提高对沟通课的兴趣;89％的学生提高了对沟通知识的掌握程度;99％的学生提高了解决问题的能力;96％的学生提高了碰到类似问题的解决能力。结论：纠纷病案带教获得师生一致肯定,为探讨沟通技能教学法积累了经验。     

CASP8基因多态性与食管鳞癌淋巴结转移易感性的关系

目的探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶8（cAsP8） rs1035142G〉T基因多态性与食管鳞癌淋巴结转移易感性的关系。方法应用sNPscan“高通量基因分型技术检测食管鳞癌淋巴结转移组85例和无淋巴结转移组270例患者cAsP8 rs1035142 G〉T基因多态性,并计算各种基因型的淋巴结转移风险（以D兄表示）及其95％可信区间（c,）。结果cAsP8 rs1035142G〉T三种基因型GG、CT、TT在淋巴结转移组和无淋巴结转移组的频率分布无统计学差异（P=0．123）。多因素Logistic回归发现,在调整了年龄、性别、吸烟及饮酒状况后,携带GT基因型的个体淋巴结转移风险比携带GG基因型的个体显著增加（调整OR=1．77,95％CI=1．02～3．09,P=0．04）。结论cAsP8 rs1035142GT基因型可能是食管鳞癌淋巴结转移的易感因素。