DNA标记杂交技术筛选抗HBs-IFN-α融合蛋白表达载体

为在无抗药性改变 ,转化细胞无生物指示系统改变的克隆载体中扩大筛选范围 ,提高筛选阳性率 ,本文应用地高辛标记DNA检测系统筛选人源单抗片段与干扰素融合蛋白表达质粒 (Anti HBs IFN α ) ,取得了理想的效果。纯化制备载体的插入段DNA ,用地高辛标记系统进行化学标记 ,制成标记探针。挑取单克隆菌扩增 ,以溶菌酶加煮沸法批量制备载体DNA ,点样于硝酸纤维膜上并经 80℃烤 2h ,分别用预杂交液和标记探针进行 42℃ 2h、 42℃ 6h的膜预杂交和杂交反应 ,洗膜后用酶标抗地高辛抗体显色。未带插入片段的抗体表达载体为阴性对照 ,IFN α质粒DNA作阳性对照 ,在 40株转化细胞中筛选出 7个目的克隆。为进一步核实该法的筛选效率和可靠性 ,分别用单酶切和双酶切法对筛选出的阳性载体进行鉴定 ,琼脂糖电泳结果显示 ,两者的符合率为 10 0 %。该系统筛选结果可靠 ,尤其在克隆载体转化细胞后无抗药改变 ,无其他筛选特征的载体构建中有一定的优势     

BioPORTER介导MAGE-3多肽转染树突状细胞的初步研究

目的 探讨一种新型转染试剂BioPORTER将黑色素瘤抗原肽(MAGE-3)转染至树突状细胞(DC)的转染效率和细胞毒性.方法 人工合成并荧光素标记MAGE-3抗原肽,利用BioPORTER作为载体,将MAGE-3多肽转染至人外周血单核细胞来源的DC.倒置荧光显微镜及流式细胞仪检测MAGE-3的转染效率,MTT法检测转染试剂对DC的毒性影响.结果 总转染效率平均为(14.57±2.56)%,总细胞存活率平均为(92.58±4.38)%.在反应体系溶液pH为7.5的情况下,当DC密度为5×105/ml,多肽与转染试剂的比例(V/W)为4∶1,两者形成的复合物与细胞孵育8 h获得了较高的转染效率,且转染试剂对细胞的毒性较低.结论 BioPORTER在一定条件下可以较高效率地将MAGE-3多肽转染至DC内,且对DC不产生明显的细胞毒性,为进一步研究以抗原肽为基础的DC疫苗提供了一种较为实用的方法.     

肺癌诊断模型初步研究

目的 探讨肺癌临床诊断的主要影响因素.方法 对1 996例原发性肺癌和肺良性疾病(指肺炎、肺结核和肺炎性假瘤)患者的临床资料进行回顾性分析,采用SPSS 13.0软件进行数据处理以及各相关指标的单因素Mantel-Haenszel以及多因素非条件Logistic模型分析.结果 血痰、胸痛、气促等症状与肺癌的关系在统计学上有显著意义;住地、吸烟史、痰细胞学、X线、CT等指标病例组与对照组差异有显著性;对所构建的诊断模型回代结果显示:灵敏度=97.78%,特异度=88.89%,准确度=94.95%.结论 肺癌诊断模型对临床早期发现肺癌有积极作用.     

两种抗原致敏方式负载树突状细胞疫苗对结直肠癌细胞株的体外杀伤作用

目的 比较两种抗原负载方式对树突状细胞(DCs)疫苗的影响.方法 抽取HLA表型为A11的健康志愿者外周血,分离单核细胞,体外培养.通过反复冻融LoVo细胞,提取肿瘤细胞裂解物或者使用含CEA片断的重组腺相关病毒转染未成熟DCs,诱导特异性细胞毒性T细胞.检测体外培养的DCs和CTL活性,并使用MTT法检测两组CTL对LoVo细胞的杀伤作用.结果 两种方式均可培养的成熟DCs,诱导的CTL细胞分泌IFN-γ有所增加;转染后DCs诱导特异性CTL可有效识别并杀伤HLA-A11阳性的LoVo细胞,腺相关病毒提呈抗原制备的DCs疫苗对LoVo细胞的杀伤作用明显高于肿瘤细胞裂解物的抗原负载方式.结论 两种抗原提呈方式均可培养出成熟的DCs,不明显改变DCs表型和刺激淋巴细胞增殖、分化功能,并可诱导自体CTL增殖.使用腺相关病毒转染DCs的方式明显优于肿瘤细胞裂解物的抗原负载方式.     

一步亲和纯化制备基因工程人源抗HBs单克隆抗体Fab片段

目的：探索亲和纯化人源单克隆抗体片段的简便实用方法。方法：应用自制的抗人免疫球蛋白片段抗体（Ａｎｔｉ－Ｆａｂ）与链球菌蛋白Ｇ亲和胶（Ｇａｍｍａ Ｂｉｎｄ）交联制备亲和层析柱,用一步法从工程菌培养上清中纯化人源抗ＨＢｓ单克隆Ｆａｂ片段。经依沙吖啶沉淀、离子交换、分子筛纯化人混合血清提取ＩｇＧ组分,木瓜酶处理后分离,纯化出Ｆａｂ,免疫绵羊制备高效价抗表。用Ｇａｍｍａ Ｂｉｎｄ一步纯化出抗血清中的ＩｇＧ     

认知行为干预晚期肺癌化疗患者焦虑、抑郁模式分析

目的 探索认知行为干预(CBI)治疗模式对晚期肺癌化疗患者焦虑、抑郁的疗效.方法 随机将100例晚期肺癌化疗患者(ⅢB期或Ⅳ期)均分为4组:第1组予CBI干预治疗晚期肺癌化疗患者及家属,第2组予CBI于预晚期肺癌化疗患者,第3组予CBI干预患者家属,第4组为无CBI干预组,干预时间持续4周,分别采用焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表(SDS)进行CBI干预治疗前后SAS、SDS差值计算.结果 4组晚期肺癌化疗患者SAS差值、SDS差值比较,差异有统计学意义(P＜0.05),其中第1组干预治疗模式SAS、SDS值显著下降.结论 CBI干预晚期肺癌化疗患者及家属治疗模式明显改善晚期肺癌化疗患者焦虑及抑郁状况.     

澄清癌症十大误区

世界卫生组织报告显示，从公众、患者，到部分医护人员，都对癌症存在不少误区。台湾“华人健康网”近日通过调查总结出人们对癌症普遍存在的十大误区，本刊特邀广东抗癌协会肺癌专业委员会常委、南方医科大学南方医院肿瘤科副主任尤长宣逐一澄清。     

肺癌分子靶向治疗新进展

近几年来．肺癌的分子靶向治疗取得了较大的进展．靶向治疗新药不断涌现．在临床试验或正式临床应用中取得非常鼓舞人心的结果，其中最引人注目的有Iressa(ZD1839,Gefitinib),OSI774(Tarceva,erlotinib),Herceptin (Trastuzumab，贺赛汀），（IMC-C225（cetuximab,Erbitux)和Bevacizumab(Avastin)等。