抗人脑源性神经营养因子单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备抗人脑源性神经营养因子(BDNF)单克隆抗体。方法利用BDNF纯品与酸处理后的沙门氏菌菌体(抗原∶菌体为1∶5)混合免疫BALB/C小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb。结果获得3株抗BDNF的单克隆抗体,分别命名为B1、B2和4D1,mAb的Ig亚类均为IgG1。ELISA间接法测定腹水mAb效价为1×10-6~1×10-5,各单抗相对亲和力结果为B2>B1>4D1。结论成功研制出抗人BDNF单克隆抗体,为进一步研究BDNF在体内组织的表达及分布提供了一种工具,并为基因工程制备BDNF提供了检测方法。     

Herceptin治疗Her-2过度表达的转移性乳腺癌7例报告

为探讨抗Her-2受体单克隆抗体Herceptin对Her-2阳性的转移性乳腺癌的治疗作用，观察了7例接受Herceptin联合TAX或NVB治疗的Her-2/neu阳性的转移性乳腺癌的疗效和毒副反应。结果7例中完全缓解（CR）2例，部分缓解（PR）3例，稳定（SD）1例，进展（PD）1例，有效率为71.4%（CR PR），且未发现有任何与Herceptin有关的毒副反应出现，初步分析近期缓解率与Her2/neu表达状况明显相关。     

肿瘤标志物CEA和CYFRA21-1在晚期肺癌中的临床价值

0引言肺癌患者发现时多属晚期,目前化疗是晚期肺癌的主要治疗手段,故化疗疗效的评价尤为重要,随着分子生物学研究的不断发展,肿瘤标志物在疗效预测方面的价值越来越大.我们监测了80例晚期肺癌患者化疗前后CEA (carcinoembryonic antigen)和CYFRA21-1( cytokeratin 19 fragment)的变化,以期为晚期肺癌的诊断、疗效监测、合理用药提供参考,现报告如下.     

角蛋白19致敏的DC/CTL对MCF-7体外抑瘤作用的实验研究

目的探讨体外经角蛋白19（K19）致敏的树突状细胞（DC）诱导的细胞毒T细胞（CTL）对MCF-7细胞株的抑瘤作用.方法经抗原多肽K19体外致敏外周血来源的DC诱导特异性CTL,流式细胞仪检测DC表面标志及细胞因子分泌,3H-TdR掺入法检测DC诱导CTL增殖,51Cr释放法测定CTL对MCF-7细胞的杀伤活性.结果外周血单个核细胞经体外扩增培养出可见树突状形状的DC,流式细胞仪检测细胞表面CD83、CD40、CD80及CD86高表达,混合淋巴细胞反应观察经K19致敏的DC刺激的自体淋巴细胞增殖明显较对照组高（P＜0.01）.在同一效靶比时,K19致敏的DC诱导的CTL对MCF-7细胞的杀伤率与对照组比较差异有显著性（P＜0.01）,且随着效靶比增加,杀伤作用增强（P＜0.01）.结论DC在体外经K19抗原致敏后,可诱导产生对MCF-7细胞有特异性杀伤作用的效应细胞杀伤MCF-7细胞,且随效靶比增加,杀伤力增强.     

肿瘤生物治疗新进展

生物治疗已经成为肿瘤综合治疗中的第四种模式,越来越受到重视.主要包括:体细胞疗法与细胞因子疗法,肿瘤疫苗与树突状细胞,肿瘤分子靶向治疗,放射免疫靶向治疗,肿瘤基因治疗和生物化疗.现对这些治疗方法和存在问题及展望做一综述.     

人源乙型肝炎病毒表面抗原抗体Fab片段与IFN-α融合蛋白表达载体的筛选

目的探讨如何在无药物抗性改变;无转化细胞生物指示系统改变的情况下准确快速地筛选出人源抗乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）抗体Ｆａｂ片段／ＩＦＮ－α融合蛋白原核表达载体。方法在 ＩＦＮ－α基因两端加上 ＸｂａⅠ酶切位点后用 ＰＣＲ法扩增,再重组入以抗体库技术筛选得到的人源抗ＨＢｓＡｇ－Ｆａｂ片段表达载体的相应位点上,构建 ａｎｔｉ－ＨＢｓＡｇ－Ｆａｂ／ＩＦＮ－α融合蛋白表达载体。取 ＰＣＲ扩增得到的 ＩＦＮ－α ＤＮＡ,用地高辛标记系统进行化学标记,制备 ＩＦＮ－α ＤＮＡ探针。取构建的融合蛋白表达载体转化受体菌．增菌后,以溶菌酶加煮沸法批量制备载体 ＤＮＡ,点样于硝酸纤维膜上, ８０℃烤２ｈ,预杂交液 ４２℃,２ｈ膜预杂交,标记探针 ４２℃, ４ｈ杂交,洗膜后用酶标抗地高辛抗体显色。同时设单纯人源抗 ＨＢｓＡｇ－Ｆａｂ片段表达载体为阴性对照, ＩＦＮ－α质粒为阳性对照。阳性克隆再以 ＳａｃＩ和 ＸｂａⅠ酶切,琼脂糖电泳鉴定。结果４０株转化细胞中筛选出７个阳性克隆,酶切鉴定显示两者符合率达１００％,成功地筛选出了ａｎｔｉ－ＨＢｓＡｇ－Ｆａｂ／ＩＦＮ－α融合蛋白表达载体。结论人源ＨＢｓＡｇ抗体Ｆａｂ片段／ＩＦＮ－α融合蛋白表达载     

含癌胚抗原片段的重组腺相关病毒转染树突状细胞疫苗的体外杀伤作用

目的：观察研究人外周血单核细胞来源的树突状细胞（DC）转染含癌胚抗原（CEA）片段的重组腺相关病毒后所诱导的特异性T细胞对直肠癌细胞株LOVO和SW480的体外杀伤作用。方法：抽取HLA表型为A11的健康志愿者外周血，分离单核细胞，体外培养，使用含CEA片断的重组腺相关病毒转染未成熟DC，诱导特异性T细胞。检测体外培养的DC和CTL活性，并使用MTT法检测细胞毒性T细胞（CTL）对LOVO细胞的杀伤作用。结果：转染或未转染的体外培养的成熟DC高表达CD40、CD86、IL-12，诱导的细胞毒性T细胞高表达IFN-γ；转染后DC诱导特异性细胞毒性T细胞可有效识别并杀伤HLA-A11阳性的LOVO细胞。结论：重组腺相关病毒转染DC，不明显改变DC表型和刺激淋巴细胞增殖、分化功能，可诱导自体细胞毒性T细胞增殖，含CEA片断的腺相关病毒转染DC诱导自体细胞毒性T细胞对LOVO细胞有明显杀伤作用，DC疫苗可以作为直肠癌患者免疫治疗的有效补充。     

鼻咽癌组织中β-连环蛋白基因表达水平的初步研究

目的 观察鼻咽癌组织中β-连环蛋白(pcatenin)的基因表达水平,以进一步研究其与鼻咽癌发生、发展的关系。方法 采用RT-PCR半定量方法检测鼻咽癌组织及正常鼻咽组织中β-连环蛋白的表达情况。结果 15例鼻咽癌组织中有11例β-连环蛋白基因表达水平减弱(占73．3%)。结论 β-连环蛋白的异常表达在一定程度上改变了鼻咽癌组织的分子正常功能及其介导的信号传导作用,提示β-连环蛋白是一个与鼻咽癌的发生、发展相关的生物学指标。     

两种抗原致敏方式负载树突状细胞疫苗对LNCaP细胞株的体外杀伤作用

目的：比较验证重组腺相关病毒负载PSA基因转染方式与LNCaP细胞裂解物诱导方式对产生树突状细胞（DCs）疫苗的的影响．方法：抽取HLA表型为A2的健康志愿者外周血,分离单核细胞,体外培养．通过反复冻融LNCaP细胞、提取肿瘤细胞裂解物以及使用含PSA片段的重组腺相关病毒转染未成熟DCs,诱导特异性细胞毒性T细胞（CTL）．检测体外培养的DCs和CTL活性,并使用MTT法检测两组CTL对LNCaP细胞的杀伤作用,同时使用腺相关病毒转染组诱导的CTL对LNCaP和DU145两种前列腺癌细胞进行杀伤实验检测．结果：两种方式均可培养成熟的DCs,诱导激活CTL并分泌IFN-γ,而腺相关病毒转染的DCs成熟度和CTL诱导率均高于细胞裂解物组;腺相关病毒转染组诱导的CTL对LNCaP细胞的杀伤率显著高于细胞裂解物组诱导的CTL;腺相关病毒转染组诱导的CTL对LNCaP细胞有特异性杀伤作用．结论：两种抗原递呈方式均可培养出成熟的DCs,并可诱导自体CTL增殖;而使用重组腺相关病毒转染PSA至DCs的方式明显优于肿瘤细胞裂解物的抗原负载方式,具有高效特异性．     

131I人源抗HBs Fab在裸鼠人肝癌模型定位的研究

目的在人源抗HBsFab表达载体构建、抗体片段表达及纯化成功后,进行放射免疫显像研究,以评价其在动物模型中的免疫导向活性。方法用131I标记人源抗HBsFab,经腹腔注射l,3,5,7d后行裸鼠人肝癌模型放射免疫显像,于第7天作组织分布测定,并以鼠源抗HBsAg单抗为对照进行比较。结果实验组在标记抗体注入后第3天即获阳性显像,第5天更加清晰,此时人源抗HBsFab、鼠源单抗及无关Fab的瘤／肝放射性比值分别为5＞4,4＞0和0＞9。结论人源抗HBsFab具有良好的导向活性,为其用于肝癌的导向治疗提供了实验依据。