土三七小鼠半数致死量测定及大鼠肝、肾脏毒性实验研究

目的:通过小鼠半数致死量测定和大鼠亚慢性毒性实验观察土三七毒性反应。方法:实验1:取100只ICR小鼠,雌雄各半,分为1组(196 g/kg)、2组(231 g/kg)、3组(272 g/kg)、4组(320 g/kg)和0组(空白对照组),每组各20只,连续观察14天,记录各组小鼠死亡数,计算土三七半数致死量。实验2:取60只SD大鼠,雌雄各半,分成5组,空白对照组(K组)、土三七低(L组)、中(M组)、高(H组)剂量组,分别给予5、10、20 g/kg土三七,分别相当于临床用量的5、10、20倍和三七组(10 g/kg三七),每组12只,连续给药4周,观察土三七对大鼠肝肾功能和肝、脾、肾系数的影响,并进行肝功能检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)、碱性磷酸酶(ALP),肾功能检测血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、总蛋白(TP)、尿微量白蛋白(U-m Alb),进行肝、肾病理组织学观察。结果:1组有2只小鼠死亡,2组有12只小鼠死亡,3组有14只小鼠死亡,4组有19只小鼠死亡。土三七的小鼠LD50为235.0 g/kg,LD5为163.3 g/kg,LD95为338.1 g/kg。与K组比较,H组大鼠肝重量显著降低(P0.05),L、M、H组大鼠脾重量和脾指数均显著增加(P0.05,P0.01),而肾指数均显著增加(P0.05,P0.01)。连续给5、10、20 g/kg土三七和10 g/kg三七4周后,与K组比较,L、M、H组大鼠血清ALT和AST均显著大幅度升高(P0.01);M、H组大鼠血清TBil和ALP均显著升高(P0.01),而L组大鼠血清TBil和ALP有升高的趋势(P0.05),与K组比较,L、M、H组大鼠血清ALT和AST均显著大幅度升高(P0.01);M、H组大鼠血清TBil和ALP均显著升高(P0.01),而L组大鼠血清TBil和ALP有升高的趋势(P0.05)。肝脏严重病变及淋巴细胞浸润,肾脏肾小球体积轻度增大,髓质部局部中性粒细胞浸润。结论:大小鼠大剂量给予土三七后,可导致肝、肠、胰腺等脏器的明显病变,大鼠在相当于临床用量5倍时表现出轻微毒性,而在给予20 g/kg土三七时出现大鼠死亡现象,为临床用药提供了一定的剂量参考。     

活体生物发光示踪术观察中国被毛孢抑制小鼠4T1-luc乳腺癌肺转移作用

[目的]利用活体生物发光成像技术,探讨中国被毛孢菌丝体对小鼠乳腺癌肺转移的影响。[方法]4T1-luc乳腺癌细胞原位接种于50只BALB/c小鼠2周后,取40只荷瘤小鼠,分成4组,即模型组(10mL.kg-1NS)、HSM低剂量组(1.0g.kg-1HSM)、HSM高剂量组(2.0g.kg-1HSM)、阳性组(20mg.kg-1CTX),每组10只,连续给药21d;测定各组小鼠原位肿瘤体积和重量,并用活体生物发光成像仪观察各组小鼠乳腺癌肺转移情况。[结果]小鼠灌胃给予1.0g.kg-1、2.0g.kg-1HSM后,原位肿瘤体积和重量明显降低(P<0.05,P<0.01),原位肿瘤抑瘤率分别为22.92%和32.50%;给予2.0g.kg-1HSM的小鼠乳腺癌肺转移明显减少(P<0.01),乳腺癌肺转移的抑制率为51.77%。[结论]中国被毛孢菌丝体具有较好的抑制小鼠乳腺癌肺转移作用。     

TGF-β/Smad与Wnt/β-catenin在博莱霉素致大鼠肺纤维化中的表达及相互作用

目的观察TGF-β/Smad和Wnt/β-catenin通路相关基因在肺纤维化大鼠模型肺组织中的表达,探讨两条通路对肺纤维化的影响及其相互作用。方法取Wistar大鼠36只,随机分为正常对照组和肺纤维化模型组,每组18只。采用气管内注入博来霉素(BLM)建立Wistar大鼠肺纤维化模型,每组分别于第14、21和28天处死大鼠各6只;取肺组织称重,测定肺组织中HYP、IL-1β水平,观察肺组织Col-I、IL-1β、TGF-β1、Smad3、α-SMA、Wnt1、β-catenin、LEF-1 mRNA的表达,并进行HE染色和Masson胶原染色。结果 (1)与正常对照组比,造模后14~28 d大鼠肺指数均明显升高(P0.01);肺组织HE染色呈现明显的肺纤维化病理改变,Masson染色结果可见造模后14~28 d肺间质蓝色胶原呈渐进性增加。(2)造模后第14天,肺组织IL-1β含量、IL-1βmRNA相对含量均显著升高(P0.01),随后逐渐降低,至造模后第28天IL-1β表达量接近正常水平(P0.05)。(3)造模后14~28d大鼠肺组织HYP含量、Col-I mRNA相对表达量均明显升高(P0.01)。(4)与正常组相比,模型组中TGFβ1、Smad3、α-SMA、Wnt1、β-Catenin、LEF-1 mRNA表达显著增加(P0.01),且TGFβ1、Smad3 mRNA分别与Wnt1、LEF-1、β-catenin mRNA的表达呈显著正相关。结论 TGF-β/Smad和Wnt/β-catenin通路相关基因在博来霉素致大鼠肺纤维化中表达上调,两条通路对肺纤维化可能有促进作用且它们间可能存在一定联系。     

黄芪皂苷提取物对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

为研究黄芪皂苷提取物对糖尿病大鼠肾脏的保护作用,将经链脲佐菌素诱导成功的32只糖尿病大鼠随机分为黄芪皂苷高、低剂量组、阳性对照组、模型组,分别以黄芪皂苷提取物200,50 mg·kg^-1·d^-1、缬沙坦25 mg·kg^-1·d^-1、生理盐水10 mL·kg^-1·d^-1灌胃,另取8只正常大鼠作为正常对照组(生理盐水10 mL·kg^-1·d^-1),连续给药6周。给药后每周称量大鼠体重,第2,4,6周检测空腹血糖;第6周代谢笼法检测24 h尿量及尿蛋白总量(U-TP);第6周末处死大鼠,心脏取血,检测血清中血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、尿酸(UA)、总胆固醇(CH)、甘油三酯(TG)等指标的含量;取双肾,计算肾肥大指数,观察肾脏病理切片。实验结果显示,模型组大鼠的血糖,24 h代谢值,肾肥大指数,U-TP,BUN,Scr,UA,TG较正常组均有显著性升高(P < 0.01,P < 0.05),病理改变明显加重;经黄芪皂苷提取物治疗后,高剂量组大鼠的24 h代谢值,肾肥大指数,U-TP,BUN,Scr,UA,TG均有明显下降(P < 0.01,P < 0.05),低剂量组大鼠的肾肥大指数,BUN,Scr,UA,TG亦下降明显(P < 0.05),2组大鼠的肾脏病理改变均有所减轻。本实验结果说明黄芪皂苷提取物对糖尿病大鼠具有一定的肾脏保护作用。     

肾上腺切除肾阳虚大鼠佐剂性关节炎模型的建立

目的观察肾上腺切除导致下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴功能缺陷对大鼠佐剂性关节炎的影响。方法大鼠单、双侧肾上腺切除后,用完全弗氏佐剂诱导大鼠产生佐剂性关节炎,观察大鼠足趾肿胀度和血清中皮质醇水平的变化。结果大鼠双侧肾上腺切除后,血清中皮质醇水平明显降低(P﹤0.01),且双侧切除组大鼠足趾肿胀度比假手术和单侧切除组大鼠明显升高(P﹤0.01)。结论双侧肾上腺切除的肾阳虚大鼠模型与佐剂性关节炎病证结合后,能促进佐剂性关节炎的发病程度。     

冠心宁片对老年大鼠血液流变学的影响

目的观察冠心宁片对老年大鼠的血液流变学和相关生化指标的影响。方法取15月龄老年雄性SD大鼠50只,随机分成老年对照组、低(0．3 g/kg)、中(0．6 g/kg)、高(1．2 g/kg)冠心宁片组、阳性对照组各10只,另取3月龄成年雄性SD大鼠10只作正常对照组,各组每日给予相应药物,连续15d后,测定血液流变学和血清葡萄糖(GLU)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)等指标。结果给予高、中、低剂量的冠心宁片均可有效降低老年大鼠低切、中切、高切三种状态下的全血粘度及还原全血粘度,显著降低红细胞刚性指数,显著提高中老年大鼠血清SOD,降低MDA含量。高剂量的冠心宁片还具有显著降低TC和GLU的作用。结论冠心宁片对老年大鼠的血液粘滞性和红细胞流变性的异常有显著的改善作用,并可抑制老年大鼠自由基的脂质过氧化,保护抗氧化酶的活性,增强机体自由基的清除,具有活血化瘀的作用。     

胆胃散袋泡剂抗大鼠佐剂性关节炎实验研究

目的：观察胆胃散抗大鼠佐剂性关节炎的作用。方法：取170-180g雄性SD大鼠72只，按体重随机分为空白组、模型组、阿司匹林组及胆胃散低、中、高剂量组，每组12只。每日分别灌胃相应的药物，连续6天后，于大鼠右后足趾皮下注射1％角叉菜胶0．1ml致炎，测定致炎后0．5、1、2、3、4小时大鼠右后足趾的体积，计算各时段的足趾肿胀度，观察胆胃散对大鼠足趾肿胀度的影响。结果：胆胃散能显著降低致炎大鼠的足趾肿胀度，胆胃散高剂量对致炎后0．5、1、2、3小时鼠足趾肿胀有显著抑制作用（P〈0．05），胆胃散中剂量对致炎后0．5、1、2小时鼠足趾肿胀有抑制作用（P〈0．05），胆胃散低剂量有抑制足趾肿胀的趋势，但与模型组鼠比较，差异无显著性意义。结论：胆胃散具有抗大鼠佐剂性关节炎的作用，其作用随剂量的增加而增强。     

人参内生真菌强壮土赤壳菌RSA2004中抗乳腺癌活性化合物的分离鉴定

目的 研究人参Panax ginseng内生真菌强壮土赤壳菌Ilyonectria robusta RSA2004次生代谢产物的化学成分,以期发现具有抗乳腺癌活性的化合物。方法 该菌大米固体发酵的95%乙醇水提取物经硅胶、SephadexLH-20凝胶及HPLC等多种柱色谱技术进行分离纯化,并根据核磁共振、质谱、圆二色谱（electronic circular dichroism,ECD）、计算ECD等手段鉴定化合物的结构,采用MTT法评价化合物对乳腺癌细胞MDA-MB-231的细胞毒性。结果 从人参内生真菌强壮土赤壳菌RSA2004发酵产物中分离得到4个化合物,分别鉴定为强壮土赤壳菌内酰胺A(1)、根赤壳菌素（2）、单青霉素I(3)和单青霉素IV(4)。活性测试结果表明化合物1和3对乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖有显著的抑制活性,半数抑制浓度为（9.37±3.1）、（5.13±2.5）μmol/L。结论 化合物1为新的生物碱类化合物,命名为强壮土赤壳菌内酰胺A;化合物1和3对MDA-MB-231细胞增殖有较强的细胞毒性。     

血糖波动对自发性2型糖尿病GK大鼠肾脏病变的影响

目的 研究血糖波动对糖尿病GK大鼠肾脏病变的影响。方法 5只♂ Wistar大鼠作为正常组,10只♂ GK大鼠按体质量、血糖值随机分为糖尿病组、血糖波动组,每组5只。血糖波动组每日错时腹腔注射葡萄糖及皮下注射胰岛素造成日间血糖波动模型,正常组和糖尿病组每日错时腹腔注射等剂量生理盐水,连续6周。每日观察大鼠一般体征;每周称大鼠体质量;第6周末检测全天9个时间点的血糖值;第3,6周末检测糖化血红蛋白值（glycosylated hemoglobin,GHb）;收集第6周末24 h尿液,生化法检测尿肌酐（urine creatinine,U-CREA）、尿白蛋白总量（total urine albumin,U-ALB）,计算24 h尿蛋白排泄率（urinary protein excretion rate,UAER）;6周末,麻醉处死大鼠,心脏取血,生化法检测血清中血尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）,手工法检测血清超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（malonaldehyde,MDA）及谷胱甘肽过氧化酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）;取双肾,称重,计算肾肥大指数,将肾脏置中性甲醛,PAS染色,光镜下观察病理变化。结果 与糖尿病组相比,血糖波动组大鼠GHb、U-CREA、UAER、血清BUN及MDA、肾肥大指数均显著升高（P<0.05）,体质量增长速度、血清SOD及GSH-Px均显著降低（P<0.05）,大鼠肾脏组织形态出现的肾小球损伤及结构改变更加明显。结论 血糖波动会加重糖尿病GK大鼠肾脏病变,其机制可能与升高MDA水平,降低SOD、GSH-Px水平有关。     

人源脐带间充质干细胞移植治疗大鼠佐剂骨关节炎的对照研究

目的 探讨人源脐带间充质干细胞（hUc-MSCs）治疗大鼠佐剂骨关节炎（OA）的价值。 方法 将 42 只大鼠按抽签 法分为 7 组,G 组为正常对照组,其余 6 组进行右后肢膝关节注射 0.1%碘乙酸 0.1ml 造模;A 组造模后第 6 周处死（空白对照）;B 组 造模后第 6 周注射 0.9%氯化钠溶液,第 10 周处死;C 组造模后第 6、8 周 2 次注射 0.9%氯化钠溶液,第 12 周处死;D 组造模后第 6 周 1 次关节腔注射 hUc-MSCs,第 10 周处死;E 组造模后第 6、8 周 2 次关节腔注射 hUc-MSCs,第 12 周处死;F 组造模后第 6、8 周 2 次尾静脉注射 hUc-MSCs,第 12 周处死;各组大鼠造模前后和注射后测定关节肿胀度和疼痛评分;处死后取关节组织病理检查。 结果 D、E 组较 B、C 组的关节肿胀度均有减小,E 组的消肿作用更显著;而 F 组的消肿作用不明显;D、E 组关节疼痛评分较 B、C 组 均有缓解,E 组止痛作用更显著;F 组的止痛作用与 E 组相当。Mankin 关节软骨病理分级积分结果提示：D 组与 B 组比较无统计学差 异;F 组低于 C 组;而 E 组低于 F 组。病理检查提示：A 组造模后第 6 周关节组织病理检查类似于 OA 病理表现,无宿主与移植物的相 互排斥反应发生;B 组表现类似 A 组,C 组关节病理破坏较 B 组重;D 组滑膜重度增生侵入关节腔,炎症细胞浸润,其病理破坏较 A 组 重,较 C 组轻,并且软骨染色较浅;E 组滑膜增生和炎症较 D 组轻,软骨染色较 D 组更浅;F 组关节病理表现与 E 组基本相仿;在饲养、 造模、注射、观察的实验过程中,无明显局部或者全身的宿主与移植物相互排斥反应发生,未发现注射部位、关节感染、坏死等不良反 应,无意外疾病和死亡发生。 结论 2 次关节腔注射和尾静脉注射 hUc-MSCs 均能较好缓解碘乙酸佐剂 OA 的疼痛,改善滑膜炎症, 修复软骨等作用,而且 2 次关节腔注射 hUc-MSCs 能更明显能消除关节肿胀,减轻滑膜炎症和软骨损害的病理改变;无明显的不良反 应发生;hUc-MSCs 治疗 OA 具有良好的有效性和安全性。