乙脑病毒prME蛋白编码基因表达分析及不同DNA免疫方法比较

将构建的含流行性乙型脑炎病毒(Japaneseencephalitisvirus,JEV)prME蛋白编码基因的重组质粒 (pJME)以不同浓度 (10 μg、5 μg以及 3μg)分别转染于HepG2细胞中 ,Westernblot法分析重组质粒表达特点 ,肌肉与基因枪注射方式将pJME免疫BALB/c鼠 ,二次免疫后 3周 ,腹腔注射乙脑病毒JaGAr 0 1株 ,10 5PFU/10 0 μl作为病毒攻击观察 2 1d。比较分析所产生的中和抗体效价以及保护基金项目 :日本金泽医科大学High Tech nologycenterH2 0 0 0 2项目资助作者单位 :中国医科大学附属第二医院感染科 (冯国和 ,王玉梅 ,窦晓光 ,王占英 ,乔…     

甘丙素在急性心肌梗塞发病学中的意义

本文测定了３１例急性心肌梗塞（ＡＭＩ）患者血浆甘丙素（ＧＡＬ）的放免活性，结果显示ＡＭＩ患者急性期各次血浆ＧＡＬ水平明显高于对照组，伴高血压、糖尿病和心功能不全者升高更显著，ＧＡＬ与内皮素（ＥＴ）、血糖水平均呈正相关。实验性心肌梗塞大鼠血浆ＧＡＬ、血清肌酸激酶（ＣＫ）、ＣＫ同功酶（ＣＫ－ＭＢ）、丙二醛（ＭＤＡ）含量亦明显高于对照大鼠。用ＧＡＬ抗血清治疗心肌梗塞大鼠，减少坏死面积４５．４％和缩小了梗塞范围４７．１％，亦明显降低了血浆ＧＡＬ水平，抑制血清ＣＫ、ＣＫ－ＭＢ、ＭＤＡ活性，提示早期阻断ＧＡＬ的生物学效应，对防治ＡＭＩ有重要意义。     

抗BCG Hsp65单克隆抗体的鉴定及应用研究

目的:对制备的5株抗BCG Hsp65单克隆抗体(Hsp65 mAb)做进一步鉴定和应用.方法:采用ELISA方法对mAb的效价、亚类和结合抗原表位特性进行鉴定,应用mAb对Hsp65融合蛋白进行了Western blot和免疫荧光检测.结果:5株mAb的类型均为IgG,其中ⅠC1和ⅡC3株mAb为IgG1亚类,ⅠA5、ⅠC3和ⅠD6株mAb为IgG2a亚类. 抗原表位竞争结合分析显示,在配对的不同亚类mAb中,存在着结合Hsp65表面不同抗原表位的mAb.通过Western blot检测证实,Hsp65 mAb对Hsp65-MUC1检测结果,与MUC1 mAb的一致.细胞免疫荧光检测显示,制备的 mAb能够识别通过蛋白装载进入树突状细胞内的Hsp65-PSA.结论:获得的Hsp65 mAb可做为检测工具,用于研究BCG Hsp65及其融合蛋白的功能和表达.     

Hsp65与HBV多表位融合基因的表达及其免疫应答研究

目的 用基因工程的方法构建并表达一种由 Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV表面抗原与核心抗原的多个表位组成的乙型肝炎治疗性疫苗(简称为Hsp65-HBV).方法 采用PCR方法人工合成由PADRE和HBV的多个表位组成的基因片段,将此片段克隆入原核表达质粒pET28a/Hsp65后.利用大肠杆菌进行融合蛋白的表达.用纯化后的蛋白免疫nalb/c 小鼠.将小鼠脾细胞用HBsAg 装载的P815细胞在体外刺激5 d后,用流式细胞仪检测IFN-γ 细胞的频率.用ELISA方法检测小鼠血清中的特异性抗体(IgG1和IgG2a)的产生.结果 由Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV的多个表位组成的融合蛋白能在大肠杆菌中进行高水平的表达,能诱导小鼠产生IgG2a亚型的特异性抗体,并能诱导 HBV 特异性的 IFN-γ 的淋巴细胞的产生.结论 获得了大肠杆菌表达的由Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV的多个表位组成的融合蛋白,并能被机体以MHC-Ⅰ途径递呈,为检测本融合蛋白是否能激发出HBV特异性CTL反应奠定了基础.     

抗Ig融合蛋白Fc段单克隆抗体的制备、鉴定与应用研究

目的：制备并鉴定抗Ig融合蛋白Fc段的单克隆抗体(mAb)，建立用于检测Ig融合蛋白的夹心ELISA法和纯化Fc融合蛋白的亲和层析法。方法：以hBCMA—Ig融合蛋白为抗原免疫BALB／c小鼠，通过细胞融合制备抗Fc段mAb，用ELISA等方法鉴定mAb的Ig亚类、表位以及种属特异性，建立用于检测Ig融合蛋白的夹心ELISA法;Western blot检测mAb对变性Ig融合蛋白的反应性。将mAb与Sepharose4B交联，制备亲和层析柱，对LAIR1-Ig融合蛋白进行纯化。结果：获得7株稳定分泌抗Fc段mAb的杂交瘤(FMUFcl-FMUFc7)。利用FMUFc4作为包被mAb，FMUFc5作为酶标记mAb，成功地建立了检测Ig融合蛋白的ELISA法，敏感度达到2μg／L；在7株mAb中，FMUFc6可用于Ig融合蛋白的western blot检测。用FMUFc 6mAb制备的亲和层析柱，可有效地纯化LAIRl—Ig融合蛋白。结论：成功地制备了抗Ig融合蛋白Fc段的mAb，建立了可用于Ig融合蛋白检测和纯化的方法，为Ig融合蛋白的应用提供了有力手段。     

透射电镜超薄切片污染产生的原因及对策

目的 分析电镜超薄切片污染产生的原因及消除污染的对策。方法 对样品制备及观察的每个环节逐一分析，对可能引起污染的各种因素采取有针对性的解决方法，严格按照透射电镜生物样品的制备要点进行操作。结果 消除了污染，保证了超薄切片的质量，电镜下拍出高质量的照片。结论 污染的原因是多方面、多因素的，只要工作中精益求精，基本上可以避免切片污染。     

LAIR-1/LAIR-2(CD305/CD306)与配体结合亲和力的比较

目的:LAIR-1/LAIR-2(CD305/306)与配体结合亲和力的比较。方法:应用不同浓度混合的LAIR-1和LAIR-2融合蛋白,同时或先后与配体表达细胞孵育后,用特异性LAIR-1或LAIR-2单克隆抗体(mAb)进行免疫荧光染色和流式细胞术(FCM)分析,比较LAIR-1和LAIR-2融合蛋白与细胞结合的百分率的变化及相互竞争情况。结果:LAIR-1和LAIR-2膜型配体的分布较广泛,人和小鼠LAIR受体与配体的结合具有相互交叉的特点。LAIR-2能够明显阻断LAIR-1与其膜型配体的结合,而LAIR-1对LAIR-2与其配体的结合无影响。结论:LAIR-1和LAIR-2可能结合相同的膜型配体,但LAIR-2结合配体的亲和力明显高于LAIR-1结合的亲和力。此结果为深入探讨LAIR家族免疫调节的分子机制提供重要的实验依据。     

结肠癌细胞表达的细胞外基质Reelin在淋巴结转移中的作用

探讨一种由结肠癌细胞表达的细胞外基质Reelin在淋巴结转移中的作用.构建了99例结肠癌及其癌旁组织的组织芯片进行免疫组织化学染色,探测其表达强度并结合临床资料进行分析.结果显示,Duke's A,B,C,D分期与结肠癌细胞Reelin表达强度无关,结肠癌细胞Reelin表达强度与其淋巴结转移潜能相关,结肠癌细胞Reelin表达强度每增加一个单位,其转移进入淋巴结的能力将增加3.523倍.结肠癌细胞表达Reelin与其淋巴结转移密切相关,Reelin可以作为结肠癌淋巴结转移预测的一个新指标.     

rGH＋CLS减少电损伤组织坏死的研究

研究rGH CLS局部应用对减少高压电损伤组织进行性坏死的作用。使用该实验室已建立的重度高压电损伤模型,新西兰大白兔45只均分5组。治疗分别使用rCH CLS（1组）,CLS（2组）,rGH(3组）,盐水（4组）和5组对照,临床解剖探查、组织学和超微结构等方法观察。结果：治疗1组有明显的减少组织坏死作用。15d动物伤肢完整,而2,3和4组虽也各有不同程度延缓坏死的作用。但动物伤肢最终坏死丧失,5组7d大部软组织基本坏死,12d坏死离断,光电镜检查1组5d治疗后粒细胞浸润较少,炎性反应轻,有纤维组织细胞再生和新生的线粒体,10d修复过程明显,2,3,4组7d后坏死明显,5组肌坏死迅速,结果表明：CLS持续组织内透析冲洗和rGH局部肌注能有效地减少电损伤坏死速度和范围,值得研究应用。     

冠心病患者支架植入术后近期心绞痛

目的　观察 2 2例冠心病患者PTCA术后 1个月心绞痛发生率 ,分析其原因。方法　选 4 2例冠脉造影证实有狭窄、支架植入术后 1个月内非急性冠脉闭塞患者 ,按冠心病易患因素 (高血压、高血脂、高血糖、吸烟 )多少分 3组 ,A组 17例含 0～ 1个因素 ,B组 12例含 2个因素 ,C组 13例含 3个以上因素。PTCA术共 2 2例 ,3组分别为 4例、7例、11例。结果　 2 2例支架植入术后 1个内发生心绞痛 ,A组 1例 ,B组 5例 ,C组 10例 ,占支架植入总数的 72 7% (16 / 2 2 )。A组明显低于C组和B组 (合并C组 ) ,用Fishers精确概率检验法 ,P值分别是 0 0 33和 0 0 4 5。结论　PTCA术后 1个月内非急性冠脉闭塞性、非再狭窄性心绞痛发生率是比较高的 (72 7% ) ,这可能是冠状循环微血管病变导致的心绞痛 ,与冠心病易患因素增多有关。