风疹病毒JR23株糖蛋白E1在毕赤酵母表达系统中的表达和抗原性分析

目的在毕赤酵母表达系统中表达风疹病毒(rubella virus，RV)JR23株包膜糖蛋白E1，为研究E1蛋白的结构功能、开发基因工程疫苗和重组蛋白诊断试剂盒奠定基础。方法E1基因的表达质粒pGAPZαa-E1经AVRⅡ线性化后用LiCl法转化酵母菌，在YPD(含100μg／ml Zeocin^TM)平板上两次筛选，挑出单菌落，于液体YPD中培养，并在不同时间收集培养物，用SDS-PAGE和Western blot进行分析。结果SDS-PAGE显示E1重组蛋白在毕赤酵母中高效稳定表达，在48h时表达量达到最高，之后趋于稳定，上清和细胞中均有蛋白表达。Western blot结果表明，上清中的E1重组蛋白能够分别与抗RV的阳性血清和单克隆抗体反应，而细胞中的E1重组蛋白只能与抗RV的阳性血清反应，不能与单克隆抗体反应。这说明所表达的蛋白一部分在信号肽的引导下分泌出胞，并经过折叠形成了正确的构像，能够与单克隆抗体结合；而另一部分由于蛋白本身的跨膜区连在了细胞膜上没有分泌出去，没有形成能够被单抗识别的构像，不能与单抗结合。结论E1包膜糖蛋白在酵母菌中成功表达，且免疫反应性良好。     

血清游离脂肪酸和尿足细胞标志蛋白检测在2型糖尿病肾病中的诊断价值

目的探讨血清游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)及尿足细胞标志蛋白(podocalyxin,PCX)在2型糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)中的诊断价值。方法选取120例2型糖尿病患者,依据尿清蛋白/尿肌酐比值(urinary albumin-creatinine ratio,UACR)将患者分为正常清蛋白尿组(NA)、微量清蛋白尿组(MA)和大量清蛋白尿(LA)3组;选取同期体检健康者40例作为对照组。检测各组血清FFA和尿PCX水平并进行相关性分析,采用ROC曲线评估其对DN的诊断价值。结果 NA组、MA组、LA组以及健康人对照组血清FFA检测结果分别为(0.61±0.14)、(0.81±0.13)、(0.95±0.18)和(0.49±0.11)mmol/L,尿PCX检测结果分别为(1.86±0.45)、(4.47±1.48)、(6.72±1.40)和(1.38±0.24)ng/m L,糖尿病患者血清FFA和尿PCX均高于健康人对照组,差异有统计学意义(P均0.05),并随着疾病进展而升高。Pearson相关分析显示,血清FFA与尿PCX呈正相关(r=0.73,P0.05)。血清FFA和尿PCX单独检测诊断DN的敏感性分别为74.1%和80.6%,联合检测的敏感性为89.5%(P0.05)。结论 2型糖尿病患者肾损伤时血清FFA和PCX明显升高,两者对于DN诊断具有重要的临床价值。     

食管鳞状细胞癌组织中VRK1及BANF1的表达及其意义

目的探讨牛痘病毒相关性激酶1(VRK1)及屏障自整合因子1(BANF1)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及其意义。方法免疫组化染色法检测120例ESCC患者癌组织及配对的癌旁组织中VRK1和BANF1蛋白的表达水平;RT-q PCR法检测VRK1和BANF1 mRNA在ESCC癌组织和配对的癌旁组织中的表达水平;并分析其与ESCC患者临床病理参数间的关系。结果免疫组化染色结果表明,VRK1和BANF1蛋白在癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(χ2分别为70.815,60.286,P均0.05),且两者的表达水平与TNM分期和分化程度差异均有统计学意义(P均0.05),而与不同性别、年龄和有无淋巴结转移的差异无统计学意义(P均0.05)。RT-q PCR结果显示,VRK1和BANF1 mRNA在癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(0.88±0.09 vs 0.59±0.08,0.78±0.08 vs 0.41±0.05),差异均有统计学意义(t分别为1.95,1.99,P均0.05)。结论 VRK1和BANF1在ESCC患者组织中呈过表达,且与ESCC的发生、发展有关。     

昆明地区青少年非综合征遗传性耳聋患者耳聋基因热点突变的筛查

目的探讨昆明地区青少年非综合征遗传性耳聋(NHI)患者病因学特点,揭示该地区NHI人群的常见致病基因,分析遗传因素在耳聋致病因素中的作用。方法采用基因芯片技术检测昆明地区某聋哑学校110例NHI患者4个耳聋基因中常见的13个位点:包括GJB2基因35del G、155del TCTG、176del16、235del C和299del AT,SLC26A4基因1229CT、2168AG和IVS7-2AG,线粒体DNA基因1555AG、1494CT、7445AG和12201TC,GJB3基因538CT位点。结果携带遗传性耳聋相关突变基因的患者有21例(19.1%,21/110)。其中GJB2突变者14例,包括235del C纯合突变6例,235del C单杂合突变2例,235del C复合299del AT突变4例,235del C复合176del16突变2例;SLC26A4突变5例,包括IVS7-2AG纯合突变3例,IVS7-2AG杂合突变2例;线粒体基因突变(mt DNA)2例,mt DNA1494CT均质突变及mt DNA7445AG均质突变各1例。结论昆明地区青少年NHI患者中耳聋易感基因检出率较高,GJB2基因突变比例最高。     

X线照射对外周血淋巴细胞Ku70表达与染色体易位的影响

目的分析X线照射引起的染色体易位与DNA双链断裂修复蛋白Ku70表达的关系。方法收集12例健康人外周血标本进行X线照射(0.5 Gy、1 Gy和2 Gy剂量),并进行淋巴细胞分离培养。用荧光原位杂交(FISH)检测其染色体易位率,实时荧光定量PCR(RT-PCR)和western blot分别检测Ku70 mRNA和蛋白质的表达水平。分析X线照射剂量对染色体易位率和Ku70表达水平影响,以及染色体易位率与Ku70表达水平的相关性。结果 FISH检测结果表明,淋巴细胞经1 Gy和2 Gy剂量X线照射后,染色体易位率均高于对照组(P均0.05);Ku70 mRNA表达量随照射剂量增加而增加(P0.05);并且染色体易位率与Ku70在mRNA和蛋白质水平的表达存在弱相关(r分别为0.473、0.386,P均0.05)。结论染色体易位率和Ku70的表达都与X线照射剂量关系密切,且染色体易位率与Ku70表达间也存在相关性。     

血液病患者9号染色体倒位检测结果调查

目的调查血液病患者9号染色体倒位(pericentric inversion of chromosome 9,inv(9))的发生率。方法用R显带技术分析2010年1月至2015年10月苏州大学附属第一医院确诊的39 589例血液病患者染色体核型,比较各血液病患者inv(9)检出率的差异。结果血液病患者inv(9)总检出率为1.44%(571/39 589);急性髓系白血病(AML)和非AML患者inv(9)检出率分别为3.28%(172/5 251)和1.17%(399/34 338),差异有统计学意义(P0.01);在AA和非AA患者inv(9)检出率分别为3.64%(43/1 181)和1.39%(528/38 408),差异有统计学意义(P0.01)。结论 AML和AA患者inv(9)检出率升高。     

临床微生物形态学及特殊耐药性检测室间质量评价体系的建立及应用

目的研究临床微生物形态学及特殊耐药性检测室间质量评价(external quality assessment,EQA)体系的建立、运行与实施,探讨该体系的临床应用价值。方法每年2次定期在甘肃省对各参评实验室发放已知的临床微生物细(真)菌落、革兰染色、抗酸染色图片,以及美国临床和实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)标准更新的知识点(特殊耐药性检测)结果图片。要求各参评单位在规定时间内完成判读并上报结果。回报结果以完全符合、基本符合和不符合的形式进行总结、分析。结果临床微生物形态学及特殊耐药性检测EQA体系运行2年,共进行24次,年度完全符合率逐年上升,2015年达到91.3%。结论临床微生物形态学及CLSI标准知识点考核EQA体系可督导二级以上医院临床微生物检验人员掌握形态学识别技能及学习CLSI知识点,全面提高临床微生物人员专业技能。     

Ⅰ型胶原羧基端肽β特殊序列和Ⅰ型前胶原N 端前肽在绝经后女性骨质疏松性骨折愈合中的变化

目的观察血清Ⅰ型胶原羧基端肽β特殊序列(β-CTx)和Ⅰ型前胶原N端前肽(P1NP)在绝经后女性骨质疏松性骨折愈合中的变化特征。方法对2014-2015年就诊的560例绝经后女性患者进行追踪随访,剔除不符合条件者及失访者,余下51例绝经后女性骨质疏松性骨折患者作为实验组,同时随机选择40例未发生骨折的对应年龄段的绝经后女性作为对照组,分别检测各研究对象的骨密度值。追踪并检测对照组人群首诊时以及实验组患者骨折48 h内、第3个月、第6个月、第12个月的β-CTx、P1NP值,并进行对比分析。结果实验组患者48 h内、第3个月、第6个月、第12个月β-CTx值分别为(554.14±243.13)、(682.41±265.08)、(594.21±260.72)、(556.25±226.28)pg/m L;P1NP值分别为(55.56±22.86)、(69.52±21.62)、(59.02±26.92)、(56.63±25.39)ng/m L,对照组患者β-CTx、P1NP值分别为(348.65±150.54)pg/m L、(41.89±16.94)ng/m L,实验组β-CTx、P1NP各个时间截点的值均明显高于对照组(P均0.01);绝经后女性发生骨质疏松性骨折后β-CTx、P1NP增加明显(P0.01)。结论绝经后女性骨质疏松症患者发生非暴力骨折后β-CTx、P1NP明显增加,3个月时基本达到峰值水平,持续到12个月仍处于高水平状态。     

mTOR活化对抗β2 GPI抗体/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞组织因子表达的影响

目的探讨雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在抗β_2糖蛋白I(β_2GPI)/β_2GPI复合物诱导THP-1细胞组织因子(TF)表达中的作用。方法用抗β_2GPI抗体/β_2GPI和β_2GPI/Ig G-APS处理THP-1细胞,mTOR抑制剂雷帕霉素(100 nmol/L)进行干预实验;收集细胞总RNA和蛋白质,实时定量PCR(RT-q PCR)和TF活性试剂盒分别检测THP-1细胞中TF mRNA表达水平及其活性,western blot检测THP-1细胞中mTOR、磷酸化mTOR(p-mTOR)、p38、p-p38、ERK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK、NF-κB p65和p-NF-κB p65的表达情况。结果抗β_2GPI抗体/β_2GPI和β_2GPI/Ig G-APS复合物均能明显增加THP-1细胞TF mRNA和TF活性以及mTOR磷酸化水平(P均0.05);雷帕霉素能明显降低抗β_2GPI抗体/β_2GPI和β_2GPI/Ig G-APS诱导THP-1细胞TF的表达水平以及mTOR磷酸化的效应(P均0.05),也能明显地削弱p38、ERK1/2和NF-κB p65的磷酸化水平(P均0.05),而对JNK的磷酸化水平无抑制效应(P0.05)。结论抗β_2GPI抗体/β_2GPI复合物能够刺激THP-1细胞mTOR的活化,并能影响TF的表达。     

维持性血透治疗的2型糖尿病肾病患者血浆eotaxin-2、sTNFRⅡ等表达水平与代谢综合征状态的关系

目的探讨维持性血透(MHD)治疗的2型糖尿病肾病(DN)患者血浆嗜酸性粒细胞趋化因子-2(eotaxin-2)、可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅰ、Ⅱ(s TNFRⅠ、Ⅱ)等表达水平与代谢综合征(MS)状态的关系。方法选取接受MHD治疗3个月以上且病情稳定的DN患者30例,以首次确诊且尚未实施任何治疗的单纯2型糖尿病(T2D)患者和体检健康者各30例为对照;检测MS相关指标血压、腰围、体质指数、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、C反应蛋白(CRP)等;AAH-INF-G3抗体芯片法分析40种细胞因子的表达水平;Pearson法分析其与MS相关指标的相关性。结果 DN患者和T2D患者MS发生率分别为88.89%和33.33%。与T2D患者和健康人对照者相比,DN患者有较多的MS危险因素个数、较高的腰围和较低的体质指数;血浆eotaxin-2和趋化因子I-309水平升高,同时伴有s TNFRⅠ、Ⅱ的表达水平升高。Pearson相关分析提示,血浆eotaxin-2、I-309与MS危险因素TG、FBG及舒张压(DBP)水平等呈现明显正相关。此外,血浆s TNFRⅡ和I-309表达水平均与CRP水平呈显著正相关。结论 MHD治疗的DN患者机体内存在着消耗性MS微炎症状态。糖脂代谢的异常影响机体的免疫生理状态,造成免疫炎症微环境。eotaxin-2、I-309可能参与这种微炎症状态的慢性化、持续化,并进一步通过s TNFRⅠ、Ⅱ的上调而加重肾脏损伤,导致MHD治疗的DN患者MS状态的形成。