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背景与目的:检测神经母细胞瘤中新的辅酶II_依赖性视黄醇脱氢/还原酶[NADP(H)_dependen tretinold ehydrogenase/reductase,NRDR]选择性剪接亚型。材料与方法:我们用NRDR特异引物,从人神经母细胞瘤细胞系SK_N_SH和SK_SY_5YcDNA中分别经PCR扩增出635bp和429bpDNA片段,测序证实635bp片段是NRDR,而429bp片段是选择性剪接新亚型。再用快速cDNA末端扩增(Rapidamplification of cDN Aends,RACE)方法得到429bp片段cDNA全长序列。用绿色荧光蛋白与新亚型的融合蛋白做亚细胞定位。结果:得到新亚型全长并命名为humanNRDRA2(hum NRDRA2)(AY616182)。已知NRDR有8个外显子,而新亚型hum NRDRA2由选择性剪接造成了第4和第6外显子丢失,从第5外显子开始读码框架前移1bp,导致随后的编码区框码漂移(frameshift),同时蛋白翻译终止信号提前出现,产生仅有188个氨基酸的蛋白,其中第137氨基酸以后的序列相对于NRDR完全发生改变,同时C_末端的过氧化物酶体定位信号_SRL丢失,却在160~176氨基酸处出现了一个细胞核定位信号。我们在ESTs库中未找到与其相同的剪接形式,提示它可能是神经母细胞瘤特有的一种NRDR剪接亚型。用GFP_NRDRA2融合蛋白做该蛋白的亚细胞定位,发现发绿色荧光的细胞均已悬浮,但悬浮状态不佳,而作为对照的NRDR另一亚型则能定位成功,提示NRDRA2蛋白可能具有一定的细胞毒性。结论:人神经母细胞瘤NRDRA2选择性剪接亚型羧基端框移突变并有核定位序列;该蛋白可能是一种细胞毒性蛋白。 相似文献
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细胞凋亡与抗肿瘤 总被引:1,自引:0,他引:1
细胞死亡是许多临床状态下的一种重要现象 ,具有广泛的病理学意义。细胞凋亡 (apoptosis)是细胞死亡的另一种方式 ,又称程序性细胞死亡 (programm ed cell death,PCD) ,是一种不同于细胞坏死的细胞生理性死亡方式。几乎所有的低等和高等动物的细胞均具有细胞凋亡这一功能 ,它对多细胞动物机体的正常发育和自身稳定起着极其重要的作用。细胞凋亡与细胞增殖、分化均是细胞的基本生命活动 ,三者密切相关 ,且均受到一序列复杂基因群的严格调控。三者之间的平衡失调与肿瘤的发生发展有关 [1 ] 。肿瘤的发生发展是一与多基因相关的、多步骤、多… 相似文献
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加强实验室建设,提高实验技术人员的综合素质 总被引:5,自引:0,他引:5
高校的实验教学:是学校教学工作的重要组成部分,与理论教学具有同等重要的作用,尤其是在提倡素质教育和创新教育的今天,实验教学尤为重要。高等学校的教学质量和办学水平,不仅取决于其办学思想和师资队伍的结构和水平,还取决于其实验室的建设水平和管理水平。实验技术人员队伍是高校实验教学条件建设的重要组成部分,也是实验教学改革的主要力量。实践表明实验教学相对于理论教学更具有直观性、实践性、综合性和创新性,它有着课堂理论所不能替代的作用。随着医学教育改革的不断深入,对医学专业的实验教学提出了更高、更新的要求,过去的实验教学模式和实验室管理方式已经不能适应社会对医学专业人才的要求,只有促进实验技术人员队伍综合素质的提高,才能确保实验室建设和管理工作迈上一个新的台阶。 相似文献
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锂对小鼠子代神经行为发育的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
本实验以昆明种小白鼠为模型,采用氯化锂经口饮水喂饲染毒,观察了锂对仔鼠神经行为发育的影响。结果表明:染毒组仔鼠体格发育、早期生理发育均显著滞后于对照组(P<0.05,P<0.01),神经行为发育迟缓,学习能力和记忆能力均明显减退。由此提示:锂染毒后不仅可损伤母鼠,而且可通过胎盘屏障作用于子代,影响其中枢神经系统的生长发育,导致神经行为发育异常。 相似文献
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正交设计结合药效学实验优选四君子汤颗粒水提及精制工艺 总被引:1,自引:1,他引:1
目的优选四君子汤颗粒最佳水提及精制工艺。方法采取正交试验法,以人参皂苷Rg1、Re、Rb1及甘草酸、甘草苷的含量及出膏率为指标,考察浸泡时间、加水量、提取时间、提取次数4个因素,优选四君子汤颗粒最佳水提工艺;以药液质量浓度、药液含醇量、醇沉时间为考察因素,优选四君子汤颗粒最佳水提醇沉工艺;通过干预脾虚证药效学实验对醇沉前后提取物进行比较。结果四君子汤颗粒最佳水提工艺为加10倍量的水浸泡60 min,煎煮3次,每次30 min;最佳水提醇沉工艺为水提滤液浓缩至1 mL药液相当于原药材0.5 g,药液含醇量为80%,醇沉时间为12 h。与模型组比较,四君子汤颗粒水提物组、水提醇沉物组大鼠唾液淀粉酶活性和血清胃泌素含量均显著升高(P<0.05),且能提高脾虚大鼠小肠木糖吸收功能(P<0.05);与四君子汤颗粒的水提物组比较,四君子汤颗粒水提醇沉物组D-木糖排泄率有显著性差异(P<0.05),但唾液淀粉酶活性和血清胃泌素含量无显著性差异(P>0.05)。结论四君子汤颗粒不宜采用醇沉工艺进行精制,因此,选择水提工艺作为四君子汤颗... 相似文献
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目的检测子宫颈鳞癌组织中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶[NADP(H)-dependent retinol dehydrogenase/reductase,NRDR]及其选择性剪接亚型NRDRB1 mRNA的表达,建立SYBR实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测NRDR及其选择性剪接亚型mRNA的方法,为准确、快速分析NRDR、NRDRB1基因表达奠定基础。方法根据子宫颈鳞癌组织中NRDR、NRDRB1基因序列,设计并合成引物,将逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增的基因片段克隆至pGEM-T easy载体,重组质粒经蓝白筛选、酶切、测序鉴定后,作为阳性克隆标准品,用于标准曲线的制备,由此可定量检测出每一样品模板中NRDR、NRDRB1起始拷贝数。结果阳性克隆标准品制作的标准曲线可显示循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系(NRDR:r=0.994,NRDRB1:r=0.997),可用于NRDR及其选择性剪接亚型基因表达的起始拷贝数定量测定。结论 RQ-PCR方法较常规PCR技术更为准确、特异、灵敏,对定量检测及研究NRDR及其选择性剪接亚型表达有积极意义。 相似文献