人肝癌细胞辅酶Ⅱ-依赖性视黄醇脱氢/还原酶选择性剪接新亚型的鉴定和分析

目的：鉴定人肝癌细胞HepG2中辅酶Ⅱ-依赖性视黄醇脱氢/还原酶（NRDR）的选择性剪接新亚型DHRS4L1A1,并检测其在不同细胞中的表达情况。方法：采用快速cDNA末端扩增方法,从HepG2中克隆选择性剪接亚型的cDNA序列;通过查找开放阅读框架,预测并分析剪接新亚型的蛋白质序列和功能;用半定量RT-PCR法检测8种不同细胞株中新剪接亚型的相对表达量。结果：DHRS4L1A1全长1 117 bp,为NRDR选择性剪接新亚型;该亚型在卵巢癌细胞SKOV3中的表达量显著高于其他细胞。结论：DHRS4L1A1表达的蛋白属于SDR家族,该亚型可能参与生殖系统相关酶类的代谢。     

辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的表达与多克隆抗体制备

目的：制备辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶（NRDR）多克隆抗体.方法：应用大肠杆菌BL21-AI表达NRDR,制备NRDR包涵体,使用从SDS-PAGE凝胶中回收的重组NRDR作为免疫原,采用肩胛骨下注射作为免疫途径免疫兔.斑点杂交测定抗血清效价,HiTrap Protein G柱纯化兔IgG,免疫印迹鉴定抗体特异性.结果：BL21-AI对NRDR进行了高效表达.回收的NRDR蛋白溶液的浓度为0.36mg/ml,回收率为48.5%.所有免疫的动物在第2次追加免疫之后都产生了高效价的抗血清,血清的效价是1：500,检测极限是8ng NRDR蛋白.纯化后的NRDR抗体具有较高的免疫活性和特异性.结论：建立了高效制备辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶多克隆抗体的方法.     

宫颈癌细胞中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶及其选择性剪接亚型真核表达载体的构建和表达

目的:构建宫颈癌细胞中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)及选择性剪接亚型NRDRB1真核表达载体,并转染HeLa细胞表达融合蛋白和native蛋白。方法:分别以pDONR-NRDR、pDONR-NRDRB1载体为模板,用PCR方法扩增两端带有酶切位点的NRDR及NRDRB1编码区序列,酶切后连接到pCDNA3、pCMV-Myc真核表达载体上,经酶切、测序鉴定后,转染HeLa细胞16 h,Western blot检测蛋白表达情况,蛋白质谱分析鉴定表达蛋白。结果:成功构建NRDR、NRDRB1真核表达载体,转染HeLa细胞后,可表达带有Myc标签的蛋白和不带标签的native蛋白;质谱分析结果进一步证实所表达的蛋白为NRDR和NRDRB1。结论:获得了在真核细胞中表达的NRDR、NRDRB1蛋白,为进一步研究其功能提供了实验材料。     

同步放化疗治疗局部进展期胃癌22例临床分析

目的评价同步放化疗治疗进展期胃癌的疗效及毒副反应。方法22例Ⅲa～Ⅲb期胃癌患者,应用奥沙利铂85mg/m2d1＋氟尿嘧啶500mg/m2d1～5化疗方案,每3周重复。2个周期诱导化疗后进行放疗,放疗均采用6MVX线2Gy/次,适形放疗四野照射,40Gy后缩野加量。结果有效率（CR＋PR）为79%（17/22）,手术切除率为89%（19/22）,2年生存率63.5%,生活质量改善85%。主要不良反应为骨髓抑制,Ⅲ/Ⅳ度骨髓抑制达28%,胃肠道反应为42%,多为Ⅰ/Ⅱ度。结论术前同步放化疗治疗局部进展期胃癌具有较好的疗效。     

锰染毒雄性大鼠体内脂质过氧化水平改变

目的：观察锰染毒后大鼠体内脂质过氧化水平的改变,为锰的毒作用机制研究提供依据。方法：以氯化锰为受度物,雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠为受试对象,测定其脏器脂质过氧化水平。结果：氯化锰经口饮水染毒后,大鼠各脏器超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）均明显下降,谷胱苷肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）亦有不同程度改变,而巯基（－ＳＨ）含量仅肝脏变化较明显。结论：一定剂量的锰可引起大鼠体内脂质过氧化水平的改变,而这种变化很可能是锰的     

新生儿窒息的急救原则

新生儿窒息是胎儿出生后1分钟内,仅有心跳而无呼吸或呼吸不规律的新生儿缺氧状态.新生儿窒息抢救不及时,是造成新生儿死亡或伤残的重要原因之一.因此,要充分认识其严重性,配合医师正确处理,使新生儿的危害降低到最低限度.     

国槐不同组织器官中多成分分析及抗氧化活性研

目的 通过对国槐Sophora japonica不同组织器官进行综合评价,为其资源合理利用提供依据。方法 采用高效液相色谱（HPLC）法、电感耦合等离子体发射光谱（ICP-OES）法、比色法检测样品中芦丁、水仙苷、槲皮素、异鼠李素、重金属含量以及Fe³⁺还原能力、DPPH自由基（DPPH·）、ABTS自由基（ABTS^·+）清除能力和总抗氧化能力（FRAP）。运用SPSS 20.0软件对结果进行聚类分析和主成分分析。结果 国槐不同组织器官中4种黄酮类成分总含量为花蕾 > 花 > 花轴 > 叶 > 枝条;抗氧化能力依次为花蕾 > 花 > 花轴 > 叶 > 枝条,与黄酮类成分总量呈正相关。花和花蕾中5种重金属含量均符合《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》,部分叶、花轴和枝条中Cd超标。聚类分析将花和花蕾聚为一类,花轴、叶和枝条聚为另一类;主成分分析将8个变量提取为2个主成分（PC1和PC2）,不同组织器官间PC1值有明显差异,不同批次间表现在PC2值上有差异。结论 国槐花及花蕾中重金属含量低,黄酮类成分含量高,抗氧化活性强,品质优良;花轴及叶也含有较高的黄酮类成分及较强的抗氧化能力,具有进一步开发利用的价值。     

新疆阿魏菇粗提物抗肿瘤效应研究

研究新疆阿魏菇粗(水、醇)提物中可能的抗肿瘤有效成分,探讨粗提物抗肿瘤作用的分子生物学机制。方法: 采用天然植物化学分离、分析及鉴定技术,对阿魏菇醇提物进行了有效成分的初步分离、鉴定;运用形态学观察、流式细胞技术及RT-PCR技术,从诱导肿瘤细胞凋亡角度探讨粗提物抗肿瘤机制。结果: 1. 分离所得组分1号、2号及3号结晶可能为同一种物质─山梨醇,4号组分为一氨基酸混合物;2. 分离组分的体外抗肿瘤作用明显低于粗提物;3. 荧光染色实验结果显示,不同剂量的阿魏菇粗提物分别作用12及24 h后,四种类型肿瘤细胞的凋亡细胞百分比均明显高于阴性对照组(P<0.05, P<0.01);4. 流式细胞术及RT-PCR实验结果,(1)阿魏菇醇提物及水提物作用后,Q3、Hela细胞P53蛋白表达水平明显上调,尤以Q3细胞醇提物作用24h最为明显;(2)以-actin的表达及表达量作为内对照,四种类型肿瘤细胞均出现P53蛋白表达水平的提高,p53基因、fas基因mRNA表达水平亦上调(P<0.05, P<0.01)。结论: 阿魏菇粗提物可能通过诱导促进肿瘤细胞凋亡基因(p53基因、fas基因)的转录及表达而发挥抗肿瘤作用,至于p53、fas基因通过何种途径促进肿瘤细胞凋亡,尚待进一步探讨。     

维甲酸衍生物对肿瘤细胞的凋亡诱导作用

维甲酸及衍生物的抗肿瘤作用已在白血病及多种实体肿瘤的临床治疗及实验室研究中显示出其诱人前景。其中,较引人注目的是一系列新的维甲酸衍生物,如CD437,ST1926,MM002等。这些新发现的维甲酸衍生物较目前临床应用较广的全反式维甲酸(ARTA)有更强的凋亡诱导作用,更低的细胞毒性和更理想的药物代谢动力学指标,诱导凋亡途径也不同于传统维甲酸类药物作用依赖p53激活的途径。其作用的分子机制也完全有别于目前已知的化疗药物,可诱导对维甲酸和其它多种化疗药物耐药的肿瘤细胞发生凋亡。该文对目前维甲酸衍生物在肿瘤细胞中的凋亡诱导作用研究作一综述。