应用DHPLC与SSCP法检测苯丙氨酸羟化酶外显子7基因突变

苯丙氨酸羟化酶（phenylalanine hydroxylase，PAH：EC1．14．16．1）是体内苯丙氨酸转化为酪氨酸的关键酶。PAH肽链合成障碍导致其活性降低或缺如，造成苯丙氨酸（Phe）羟化受阻，Phe在体内蓄积。编码PAH的基因发生突变是导致PAH肽链合成障碍，使其活性降低或缺如的原因。单链构象多态性（single—strand conformation polymorphism，SSCP）是检测DNA突变的一种常用技术，该方法既可检测已知突变，又可筛查未知突变基因或进行连锁分析。     

苯丙氨酸羟化酶基因部分外显子突变研究

目的：探讨苯丙酮尿症(PKU)患者PAH基因突变特点。方法：用PCR—SSCP和PCR—DNA测序法对天津河北等地的70例无血缘关系并已确诊为PKU患者的基因组DNA进行PAH基因外显子3、5、6、7、10、11和12的突变基因分析。结果：70例PKU患者共140条染色体，共发现26种突变，含错义突变14种、无义突变5种、同义突变4种、剪接位点突变2种和缺失突变1种。除4种同义突变外，阳性突变率为64．28％。其中DelS70、R176X、R261X、L385L、IVS5nt 1g→a、A165D、G247R、Y325X、G344E和R413G占总突变种类的38．5％(10／26)。结论：天津河北等地的PAH基因突变类型复杂，有些常见突变的发生频率与以往报道的地域分布略有不同。     

采用GatewayTM系统构建人Rb94基因重组腺病毒载体

 目的 采用Gateway^TM技术构建人Rb94基因重组腺病毒载体(Ad-hRb94)。方法 从人类胚胎中提取总RNA,经反转录得到目的cDNA,PCR扩增Rb94目的基因片段。设计含有attB侧翼序列的引物,用于重组片段的PCR扩增,在BP重组酶的作用下,将含attB位点的PCR产物与受体载体pDONR^TM221发生重组反应,产生入门克隆。在LR重组酶作用下,将入门克隆与带attR1、attR2位点的目的载体 Ad／CMV／V5-DEST体外重组形成表达克隆 Ad-hRb94。经PCR和测序鉴定,将 Ad-hRb94线性化后转入 293A细胞进行病毒的包装、扩增及病毒滴度测定。结果 经PCR和测序证实目的基因Rb94片段按正确方向重组入目的载体中,带Rb94基因的目的载体在 293A细胞中包装成功,获得高滴度的病毒颗粒,滴度为9.41×1010pfu／ml。结论本实验利用Gateway^TM技术成功构建了Ad-hRb94,为进一步进行肿瘤基因治疗研究奠定了实验基础。     

乳腺癌患者对“互联网+”康复健康教育的认知调查分析

目的探讨基于慈善项目平台了解乳腺癌患者对互联网+康复健康教育的认知现况。方法选取2019年7月至2020年4月间某慈善项目平台中3558例乳腺癌患者进行整群抽样调查,采用自行设计的调查问卷开展网络问卷调查。结果55岁及以上患者占33.2%,45~54岁患者占30.6%;一半以上患者来自东部地区(59.9%);患病时间在一年内的新患者占多数(83.4%);患者对自我身体状况的评价倾向于好(51.1%)。97.8%的患者认为互联网+康复健康教育很重要,90.8%的乳腺癌患者认为互联网+康复健康教育比线下康复健康教育(73.5%)更有效,一半以上患者希望通过线上教育平台获得康复知识(84.6%)、临床治疗方法(75.7%)、预防疾病复发知识(67.9%)、营养搭配常识(66.9%)和治疗后不良反应的处理(53.0%)。乳腺癌患者对互联网+康复健康教育重要性的认知在年龄、地区和患病时间上比较,差异无统计学意义(P>0.05),两组人群均以55岁以上、东部地区、患病时间在一年内为主。不同身体状况的患者对互联网+康复健康教育重要性的认知上比较,差异有统计学意义(P<0.01),对自我评价身体状况一般或差的患者倾向于认为互联网+康复健康教育一般/不重要。结论不同特征乳腺癌患者的康复健康教育需求有差异,应以患者需求为导向,实施个性化、多元化的互联网+康复健康教育。     

应用Dot-ELISA进行日本血吸虫循环抗原检测时其滴度与感染度关系的动态观察

以２０条／只和１００条／只剂量的尾蚴感染家兔，并于第９ｗｋ用吡喹酮对约半数家兔进行一次性灌胃治疗，依此建立日本血吸虫感染模型。用分别定位于日本血吸虫表皮膜、肠道上皮和虫卵的单克隆抗体建立直接斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）并应用该法分别检测感染家兔血中３类循环抗原、膜相关抗原（ＭＡＡ），肠相关抗原（ＧＡＡ）和可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ），观察循环抗原滴度水平和日本血吸虫感染度之间的关系。结果发现，当用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法检测３类循环抗原时，２０条尾蚴感染组与１００条尾蚴感染组家兔不论治疗与否，血中３类循环坑原滴度水平无显著性差异。因此Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法检测循环抗原不适宜于作为日本血吸虫感染度的判断方法     

帕瑞昔布钠对腰椎手术后镇痛效果的影响

帕瑞昔布钠是特异性环氧化酶-2(COX-2)抑制药,临床上用于中度或重度术后急性疼痛的治疗.腰椎手术时间长,苏醒期躁动发生率较高,且术后切口疼痛明显.帕瑞昔布钠可有效抑制外周和中枢COX-2表达,减少外周和中枢前列腺素的合成,抑制痛觉超敏,提高痛阈.     

结节性硬化症临床特征及治疗初步探讨

目的探讨结节性硬化症(tuberous sclerosis complex,TSC)的临床特征和治疗特点。方法对天津市儿童医院神经内科1995—2004年41例TSC患儿的临床表现、辅助检查及治疗进行了回顾性分析。结果41例患儿中,39例(95.1%)伴有癫发作,智力低下14例(34.1%),均有头CT/MRI特异性改变,脑电图异常31/39例(79.5%);抗癫药物治疗12/39例(30.8%)完全控制无发作,1例行室管膜下巨细胞星形细胞瘤切除术,1例行肾血管平滑肌脂瘤切除术。结论结节性硬化症临床表现多样,有较明显的年龄特征,抗癫治疗并不悲观。     

婴幼儿喘息者外周血白细胞介素-4受体基因多态性表达的研究

对128例住院的婴幼儿喘息患者和82例同期健康婴幼儿,应用PCR-限制性内切酶酶切法进行白细胞介素-4受体基因150V和Q576R检测。患儿与正常儿童150与V50、Q576与11576等位基因频率和基因型频率之间存在差异,150／150基因型与喘息的易感性相关（P=0．015,OR=0．439,95％CI=0．223～0．826）,150／150和Q576／R576的组合与喘息发病的易感性有关。说明携带易感基因的儿童可能容易发生反复喘息乃至以后的哮喘。