用酶联免疫吸附试验测定曼氏血吸虫循环阴极抗原的抗体

作者以三氯醋酸处理成虫抗原,继以阴离子交换层析法分离出循环阴极抗原(CCA);以150μg/ml的浓度直接包被聚苯乙烯微量滴定板的凹井,并以5%牛血清白蛋白(BSA)封闭凹井中未包袱的空白处,但这一封闭必须有足够长的时间,否则底色将会过深。血清的稀释液是含2%BSA的PBS。     

用吡喹酮治疗家兔血吸虫病时宿主免疫水平与疗效的关系

家兔感染日本血吸虫尾蚴3至10周,用吡喹酮40 mg/kg ig 1次治疗时,疗效以感染3周组的为最差,感染5周组的疗效明显增加,而以感染8及10周组的最好,全部或大部分受治兔的雌虫被杀灭。这一结果与宿主特异性抗体的有无和抗体水平的增长相一致,而与细胞的免疫水平则无密切的平行关系。进一步的试验结果表明,吡喹酮对虫龄为3周童虫的疗效与特异性抗体的存在有密切关系。     

用酶标记日本血吸虫成虫抗原对流免疫电泳检测抗血吸虫抗体

将新鲜日本血吸虫成虫以甘氨酸——盐酸缓冲液浸泡30分钟后用NS充分洗净,真空干燥,取这种材料100毫克以冷丙酮研磨脱脂2次,乙醚脱脂一次,取脱脂后的虫粉100毫克先以10毫升NS研磨30分钟,离心后上液保存,沉淀再加0.1MNa_2HPO_4溶液10毫升混悬,超声处理15分钟,离     

日本血吸虫副肌球蛋白全基因克隆、测序及体内表达

目的： 将日本血吸虫大陆株副肌球蛋白（ Ｓｊｃ９７） 编码区全基因克隆及测序, 并研究 Ｓｊｃ９７ 全基因核酸疫苗在小鼠体内的表达。方法： 抽提日本血吸虫成虫总 Ｒ Ｎ Ａ, 逆转录 聚合酶链反应 （ Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ） 扩增编码 Ｓｊｃ９７的全基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ, 双脱氧链末端终止法测 Ｄ Ｎ Ａ 序列。构建含 Ｓｊｃ９７ 全基因的质粒表达载体 （ｐ Ｃ Ｍ Ｖ Ｓｊｃ９７） , 并用免疫荧光染色法研究ｐ Ｃ Ｍ Ｖ Ｓｊｃ９７ 在小鼠体内的表达特性。结果与结论： 用 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 扩增获得了 Ｓｊｃ９７ 的编码区全基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ, 并测定了该基因编码区的全序列。与日本血吸虫菲律宾株、日本株及曼氏血吸虫副肌球蛋白编码区全基因比较, 核苷酸序列同源性分别为： ９９４ ％ 、９９２ ％ 和９１０ ％ ; 推导的氨基酸序列同源性分别为：９９７ ％ 、９９８ ％ 和９６０ ％ 。ｐ Ｃ Ｍ Ｖ Ｓｊｃ９７ 核酸疫苗能在注射的小鼠局部肌肉组织表达 Ｓｊｃ９７ 。     

重组日本血吸虫26kDaGST抗原免疫家兔后抗体动态观察

目的： 探讨重组日本血吸虫２６ ｋ Ｄａ Ｇ Ｓ Ｔ 抗原免疫家兔后抗体水平动态变化。方法： 家兔随机分为免疫组与佐剂对照组,免疫组用纯化重组日本血吸虫 ２６ ｋ Ｄａ Ｇ Ｓ Ｔ 抗原加福氏佐剂免疫;佐剂对照组用０．８５％ 盐水加福氏佐剂免疫。免疫后,每兔逐周取耳静脉血,采用酶联免疫吸附试验（ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ） 检测血清中特异性抗体水平。结果： 免疫组家兔从免疫后第４ ｗ ｋ 起血清中特异性抗 Ｇ Ｓ Ｔ 抗体升高,且维持在较高的水平达６５ ｗ ｋ。结论： 重组日本血吸虫 ２６ ｋ Ｄａ Ｇ Ｓ Ｔ 抗原免疫家兔后,特异性抗 Ｇ Ｓ Ｔ 抗体水平较对照组明显升高,且至少能维持 １ 年。     

水牛感染血吸虫后病原消亡时间与防制对策的关系

目的　观察水牛感染血吸虫后排卵量和毛蚴出孵规律及其消失时间。　方法　选择购自血吸虫病非流行区8～ 10月龄水牛 9头 ,每头水牛感染血吸虫尾蚴 2 0 0 0条。从感染后第 5 0d开始定期收集粪便作定量检查血吸虫卵和毛蚴 ,连续观察 3 2个月。　结果　在感染血吸虫后第 5 0d 9头水牛均在粪便中发现血吸虫卵和毛蚴 ,平均EPG和MPG分别为 4.65± 2 .0 8和 4.3 6± 2 .19;感染后第 60d分别达 41.0 5± 2 .0 9和 2 5 .97± 2 .45 ,显著高于第 5 0d。感染后第 80d ,MPG为最高 41.73± 3 .2 9,感染后第 90d ,EPG达最高 5 5 .0 4± 1.44。以后随着观察时间的延长 ,EPG和MPG逐渐降低 ,至 3 3 0d全部为阴性。感染后第 5 0d毛蚴孵出率最高 94.45± 6.412 % ,第 60d降为 65 .89± 19.0 1% ,第 80d有所回升85 .76± 10 .5 0 % ,以后逐渐降低 ,至 3 3 0d全部为 0。感染后 1年 ,粪便中未再检出血吸虫卵。肝、脾和肠组织中的虫卵不能孵出毛蚴 ,但沉积在组织中的血吸虫卵仍可造成该组织损害。　结论　 1岁以内的水牛感染血吸虫后 1年无需治疗虫体均可消亡 ,粪卵排出消失 ,但在肝脾组织中的血吸虫卵沉着所致病变仍存在。     

用于血吸虫病定性和定量的诊断技术

多年来,在南非许多实验室以Visser滤片法用于人血吸虫病的定量及定性诊断。本研究主要对Visser滤片法用于血吸虫诊断时的有效性与用Millipore滤纸连接到注射器进行尿液分析法以及以Kato-Katz涂片法检查粪便作比较。结果发现Visser滤片法对     

日本血吸虫三磷酸甘油醛脱氢酶核酸疫苗小鼠体内的免疫应答特征

目的 研究日本血吸虫大陆株三磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）基因核酸疫苗免疫C57BL/6小鼠诱生的免疫应答特征和保护性。 方法 将用免疫筛库得到的日本血吸虫大陆株GAPDH编码基因以PCR扩增，扩增产物T-A克隆至载体pT-Adv而后与真核表达载体pcDNA3连接，构建成核酸疫苗（pcDNA3-SjGAPDH）。将纯化的pcDNA3-SjGAPDH经后腿胫前肌免疫C57BL/6小鼠。免疫荧光染色法研究pcDNA3-SjGAPDH在注射的局部肌肉表达特性；用十二烷基硫酸钠?鄄聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）、蛋白质印迹法（Western blotting）、ELISA等方法分析pcDNA3-SjGAPDH所诱导的特异性免疫应答特征。 结果 pcDNA3-SjGAPDH免疫后24和48h即可在荧光显微镜下看到C57BL/6小鼠小腿胫前肌的局部肌肉的冰冻切片发出淡绿色荧光，表明有GAPDH蛋白的表达。pcDNA3-SjGAPDH免疫小鼠主要诱生IgG2a、IgG2b和IgG3亚类；免疫小鼠脾淋巴细胞体外经特异性抗原刺激主要诱生γ-干扰素(IFN-γ)和白介素-2(IL-2)细胞因子，未检出IL-4。另外，免疫鼠血清能够识别日本血吸虫SWAP中的天然GAPDH成分。 结论 pcDNA3-SjGAPDH核酸疫苗免疫C57BL/6小鼠主要诱导Th1类型细胞免疫应答。     

配子体形成的和非配子体形成的恶性疟原虫克隆

引起部分红细胞内疟原虫分化为雌、雄配子体的原因不明。在恶性疟原虫培养时尽管培养条件相同,但有的分离物形成的配子体数量就较多。这一现象提示遗传因素的重要性,从而就有可能得到能形成和不能形成配子体的细胞系。本文报道以恶性疟原虫洪都拉斯株分离的一个非配子体形成和2个有配子体形成的细胞系进行生物学特性的比较结果。每一原虫细胞系均用相差显微镜油镜检查。确定在培养的小滴中仅含一个原虫而后才进行选择的。分离物经22或26天的培养     

自愈水牛血清免疫筛选日本血吸虫cDNA文库

目的　采用自愈水牛血清免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库并寻找日本血吸虫疫苗新候选抗原。　方法　用感染日本血吸虫后的自愈水牛血清免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库,将阳性重组子克隆、测序,对核酸序列进行分析,确定目的基因。　结果　从大陆株日本血吸虫成虫λZAPIIcDNA文库筛到26个阳性克隆,经初步鉴定获3种编码蛋白分子的基因:副肌球蛋白,谷胱甘肽S转移酶,羟基类固醇脱氢酶。　结论　感染日本血吸虫后的自愈水牛血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库,可用于寻找日本血吸虫疫苗新候选抗原。