诱变剂NTG致弱尾蚴免疫小鼠后的体液和细胞免疫状况

对NTG致弱尾蚴免疫小鼠后的体液和细胞免疫状况观察的结果表明.免疫鼠血清中特异性抗体呈逐渐增高的趋势。不论NTG致弱15min pc免疫还是NTG致弱60min ip免疫的小鼠,免疫后7周ELISA检测抗体的滴度均达1:1280以上.IFA达1:1024。SDS-PAGE电泳的结果表明免疫鼠血清IgG在MW 50000及40000左右比感染鼠多1条蛋白带,从而提示NTG致弱尾蚴免疫后,不仅抗体滴度逐渐增加,且抗体的组成成分也有所不同。免疫后各周淋巴细胞对血吸虫抗原的增生应答水平不同,免疫鼠比感染鼠的淋巴细胞对SEA的应答要强得多,特别是淋巴结淋巴细胞。上述结果提示NTG致弱尾蚴作为免疫原免疫后不同时间攻击感染.其减虫率不同,免疫力的大小呈有规律的动态变化,这很可能是与NTG致弱尾蚴免疫后不同时间体液和细胞免疫状况有关。从而,为进一步研究以化学致弱新途径诱导日本血吸虫保护性免疫力提供一定的依据。     

日本血吸虫重组Sj26抗原抽提、纯化及初步应用

从 Mitchell 实验室引进与我们报告的24—26kD 抗原类似的重组 Sj26抗原基因的 E coil,从中抽提并纯化出 rSj26抗原。重组 Sj26抗原初步应用的结果表明:(1)rSj26抗原 ELISA 可以检测日本血吸虫大陆株感染鼠血清中特异性抗体,最高滴度1:320,不比同种24—26kD 抗原检测的效果差;(2)用24—26kD 抗原检测 rsj26免疫鼠血清中的抗体水平,和以 rSj26抗原检测的水平相似,而用 SEA 测抗 rSj26抗体水平较差}(3)用 rSj26免疫鼠后以大陆株尾蚴攻击感染,减虫率可达44.4%,表明 rSj26可诱导一定程度保护性免疫力预防日本血吸虫大陆株尾蚴感染。对 rSj26抗原引进的重要意义进行了讨论。     

日本血吸虫97kDa DNA疫苗与致弱尾蚴疫苗诱导免疫应答特征的比较研究

目的　对比观察日本血吸虫大陆株副肌球蛋白基因疫苗(Sjc97DNA)与紫外线致弱尾蚴(UVC)疫苗免疫C57BL6小鼠诱导的抗感染保护力及免疫应答特征。　方法　以Sjc97DNA核酸疫苗经后腿胫前肌免疫C57BL6小鼠共2次,每次间隔3wk,末次免疫后3wk攻击感染日本血吸虫尾蚴;UVC疫苗接种同种小鼠后5wk攻击感染上述等量尾蚴。均于攻击感染后7wk计数虫负荷及肝卵负荷。并设空质粒对照及感染对照组。用ELISA分析免疫鼠攻击感染前后血清特异性IgG、IgA及亚型抗体水平,以及脾淋巴细胞体外诱生的细胞因子水平。　结果　Sjc97DNA疫苗及UVC疫苗免疫小鼠均诱生出以Th1型免疫应答为主的IL2、IFNγ及特异性抗AWA、SEAIgG2a、IgG2b亚型及IgA抗体,UVC疫苗组小鼠各细胞因子及抗体水平均显著高于Sjc97DNA疫苗组,但两疫苗组均未测及IL4。攻击感染后,Sjc97DNA疫苗组的减虫率36.3%、减卵率42.4%,明显低于UVC疫苗组的66.9%和75.6%。攻击感染后7wk,两疫苗组小鼠Th2型免疫应答虽有所增强,但仍以Th1型免疫应答占优势;而空质粒对照组和感染对照组小鼠则以Th2型免疫应答为主。　结论　核酸疫苗与紫外线致弱尾蚴疫苗均能诱导产生抗感染免疫保护力,致弱尾蚴疫苗的免疫保护力高于Sjc97DNA。两疫苗诱导的抗感染     

日本血吸虫大陆株副肌球蛋白部分基因的表达

为了表达日本血吸虫大陆株副肌球蛋白部分基因，作者用PCR方法从日本血吸虫基因组DNA扩增出这一副肌球蛋白部分基因，然后将该基因重组于质粒体pBV220中，使其在大肠杆菌中表达。结果获得一32kDa的表达蛋白。免疫印迹分析表明感染兔血清可识别这一表达蛋白。该蛋白的纯化将有利于血吸虫病疫苗的进一步研究。     

虫源性代谢产物对日本血吸虫感染小鼠免疫应答的影响

在感染日本血吸虫的小鼠脾淋巴细胞与可溶性虫卵抗原的培养中加入童虫代谢产物后,应答能力有很大增强,而在上述培养中加入成虫代谢产物时,各周的应答能力受到不同程度的抑制,提示虫源性代谢产物在日本血吸虫感染小鼠的增生应答中起着免疫调节作用。这种调节作用与不同发育期的血吸虫所分泌的因子有关.     

日本血吸虫大陆株副肌球蛋白全基因核酸疫苗诱生免疫应答的实验研究

目的初步研究日本血吸虫大陆株副肌球蛋白核酸疫苗在C57BL／6小鼠诱生的免疫应答特征。方法利用TRIzol方法抽提日本血吸虫大陆株成虫总RNA，并通过逆转录聚合酶链反应；扩增编码日本血吸虫大陆株副肌球蛋白（SjC97）的全基因cDNA，将其克隆入质粒表达载体（pcDNA／Amp）构建成日本血吸虫大陆株副肌球蛋白全基因核酸疫苗（pCMV－SjC97）；将其通过后腿胫前肌免疫C57BL／6小鼠，共免疫3次，每次间隔3周；利用酶联免疫吸附试验（ELISA）分析pCMV－SjC97免疫所诱生的特异性抗体IgG及IgG亚类，以及特异性抗体IgM及IgE。并初步分析了pCMV－SjC97免疫C57BL／6小鼠脾淋巴细胞抗原特异性体外增殖能力。结果pCMV－SjC97免疫能够诱生特异性抗体IgG及IgM；pCMV－SjC97诱生的抗体滴度与注射的DNA间存在一定的量-效关系；IgG亚类分析显示，pCMV-SjC97免疫主要诱生IgG2a和IgG2b亚类，未测到IgG1及IgG3亚类。PCMV-SjC97免疫能够诱导小鼠Th细胞激活。结论pCMV-SjC97核酸疫苗能够在C57BL／6小鼠诱生较强的体液免疫应答；pCMV-SjC97免疫主要诱生Th1型细胞免疫应答。     

日本血吸虫Sjc97 DNA疫苗免疫小鼠攻击感染后的组织细胞反应

目的观察日本血吸虫副肌球蛋白核酸疫苗(Sjc97DNA)免疫宿主攻击感染后的皮肤及肺组织反应。方法105只C57BL/6小鼠,随机分成Sjc97DNA疫苗组、空质粒对照组和感染对照组。前两组分别以Sjc97DNA核酸疫苗、空质粒经后腿胫前肌免疫C57BL/6小鼠共2次,每次间隔3周。末次免疫后3周攻击感染,3组小鼠经腹部皮肤攻击感染日本血吸虫尾蚴(800±50)条。于攻击感染后6、18、24、48、72、96、120h,每组分别剖杀5只小鼠,取腹部皮肤及/或肺组织作病理观察。结果Sjc97DNA疫苗免疫小鼠攻击感染血吸虫尾蚴后,皮肤炎症反应出现早,炎症细胞杀童虫现象明显,炎症反应强烈,且持续时间长,嗜酸性粒细胞浸润百分比高;而空质粒对照组和感染对照组皮肤炎症轻,持续时间短,杀虫现象不明显。Sjc97DNA疫苗免疫鼠攻击感染后肺部出血斑点出现时间(72h)迟于空质粒对照组和感染对照组(48h)。72~120h,Sjc97DNA疫苗组小鼠肺部局灶性炎症明显,肉芽肿样结节形成,但肺泡壁多正常;而空质粒组和感染对照组小鼠肺组织炎症轻,但肺泡壁水肿有较多红细胞渗入。结论Sjc97DNA疫苗免疫增强了小鼠皮肤及肺组织的细胞反应及其杀童虫作用。     

谷胱甘肽-S-转移酶多克隆抗体免疫金测定法检测日本血吸虫循环抗原的研究

目的探讨谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ｒＳｊ２６ＧＳＴ）多克隆抗体诊断日本血吸虫病的应用价值。方法以抗ｒＳｊ２６ＧＳＴ多克隆抗体力捕获并检测抗体，建立双抗体夹心斑点免疫金测定技术，用于检测日本血吸虫循环抗原，并以斑点免疫金测定法和ＥＬＩＳＡ检测抗体作对照。结果３种方法检测急性血吸虫病的敏感性均为１００％；对慢性血吸虫病的敏感性分别为７６．４％、９８．１％和９６．２％；特异性分别为９５．０％、９８．０％和９６．０％。结论ｒＳｊ２６ＧＳＴ抗原对日本血吸虫病具有诊断价值，可望有较好的应用前景。     

重组Sj26(rSj26)抗原免疫酶测定新方法诊断日本血吸虫病的研究

将日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)和重组Sj26(rSj26)抗原致敏的硝酸纤维素膜片(NCD)用于膜片免疫酶测定(D-IEA),分别检测同批日本血吸虫病人、卫氏并殖吸虫病人、华支睾吸虫病人和健康人血清104例的特异性抗体,同时用目测及光密度(OD)值测定两种方法判断反应结果。结果显示,分别采用上述两种抗原检测所获的阳性率或假阳性率间无显著性差异。此结果首次提示rSj26抗原的血清诊断效果与目前血吸虫病血清学方法常用抗原SEA相似。本文报告的免疫酶测定新方法,可同时采用两种方法判断结果,迄今尚未见到类似报道。试验结果均表明用D-IEA检测时显示高度的敏感性(92.1％—94.7％)和特异性(0.0％—2.9％),具有实用价值。     

曼氏血吸虫尾蚴中与人α-1抗胰蛋白酶形成复合物的组分

将人α-1抗胰蛋白酶(α_1-AT)与曼氏血吸虫尾蚴抽提物或与猪的胰弹性蛋白酶培育后经免疫电泳和免疫印渍试验分析,发现一种可与曼氏血吸虫尾蚴组分形成复合物的抑制物。复合物形成的方式与抗胰蛋白酶和胰弹性蛋白酶复合物的形成相同。在曼氏血吸虫存活机制中蛋白水解酶起重要作用,它可