真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1/PAK-1的构建及其在结直肠癌SW480细胞内的表达

目的:构建重组p21-activated kinase-1(PAK1)基因绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1/PAK1,并转染入结直肠癌细胞SW480中表达.方法:在南方医科大学附属南方医院消化研究所实验室,从人类结直肠癌细胞株SW620细胞提取总RNA,经逆转录聚合酶链式反应获得人PAK1 cDNA片段,经过限制性内切酶进行酶切,T4连接酶进行连接,将目的基因克隆至真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1上,然后转染结直肠癌细胞株SW480,观察其在细胞中表达.结果:重组载体经限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列分析验证,显示插入载体的序列与目的基因一致,而且该重组载体能够在SW480细胞中表达.结论:成功构建了真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1/PAK1,为研究PAK1在结直肠癌中的生物学功能奠定了基础.     

PI3K p85α在大肠癌侵袭转移过程中的表达及意义

目的研究PI3K p85α在大肠癌侵袭和转移过程中的表达及意义。方法用免疫组织化学二步法检测试剂盒检测123例大肠病变组织标本中PI3K p85α的表达情况,用等级相关的秩和检验分析PI3K p85α在大肠病变组织中表达的意义及其与临床病理特征间的关系;培养已成功沉默PI3K p85α表达的大肠癌Lovo细胞(PI3K p85α/RNAi-Lovo)及Lovo对照组细胞,肿瘤细胞侵袭实验(transwell)和划痕愈合实验观察PI3K p85α对lovo细胞的侵袭和转移能力的影响,明胶酶谱检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达。结果 PI3K p85α蛋白在大肠癌癌变过程中表达阳性率呈递增趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。PI3K p85α/RNAi-Lovo细胞组侵袭和转移能力明显低于对照组;MMP-2表达量及活性显著降低。结论 PI3K p85α蛋白可能在大肠癌的侵袭和转移中起重要作用,沉默PI3K p85α基因可以显著抑制其侵袭、转移和基质金属蛋白酶的分泌及活性,因而PI3K p85α影响lovo细胞的侵袭和转移可能与调控基质金属蛋白酶分泌密切相关。     

PcDNA3.1(+)-MCP-1和PcDNA3.1(+)-Groα真核表达质粒的构建及鉴定

目的:构建并鉴定真核表达质粒pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Groα.方法:据GeneBank中大鼠MCP-1和GroαcDNA序列设计并合成引物,提取急性胰腺炎模型大鼠总RNA,RT-PCR扩增,并将扩增产物TA克隆至pGEM-T easy载体,然后分别双酶切pGEM-MCP-1和pGEM-Groα回收目的片段再克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+).结果:pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Groα真核表达质粒构建完成后,用限制性内切酶、PCR及DNA序列分析等多种方法进行鉴定,证实其构建成功.结论:pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Groα真核表达质粒构建成功,为进一步研究该真核表达质粒的免疫保护效果及制备急性胰腺炎pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Gro DNA疫苗奠定了基础.     

三叶因子2基因治疗对实验性大鼠胃溃疡愈合影响的研究

目的探讨三叶因子2(TFF2)基因治疗对实验性大鼠胃溃疡的疗效及其机制。方法2005-06-10—2006-03-15南方医科大学南方医院消化病研究所将48只雄性Wistar大鼠随机分为2组,治疗组24只,对照组24只。治疗组每只应用pcDNA3.1g TFF2100μg,对照组每只应用等容积pcDNA3.1g TFF2100μg,均在造模时经胃壁浆膜下注入。用药后分别在第3、7、14天处死动物,测量大鼠胃溃疡指数、胃总酸度及黏液糖蛋白量的变化。结果在应用pcDNA3.1g TFF2的第3天,治疗组和对照组比较,各项指标差异无统计学意义(P>0.05);第7天,治疗组的黏液糖蛋白量显著增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。第14天,治疗组的溃疡面积显著缩小,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);治疗组黏液糖蛋白量有所下降,不过与对照组比较差异也有统计学意义(P<0.05);而治疗组的胃总酸度变化不大,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论TFF2基因治疗对实验性大鼠胃溃疡愈合有促进作用,增加胃黏液糖蛋白的分泌是其促进溃疡愈合的机制之一,而与抑制胃酸分泌无关。     

四君子汤治疗实验脾虚证对胃肠粘膜细胞增殖动力学的影响

引言长期以来，氚标记的胸腺嘧啶（３ＨＴｄＲ）常用于细胞动力学的研究，但由于３ＨＴｄＲ有放射性，限制了它的应用．５溴脱氧尿嘧啶核苷（ＢｒｄＵ）与胸腺嘧啶具有结构的相似性，能代替胸腺嘧啶掺入Ｓ期细胞新合成的ＤＮＡ链内．近年来进一步证实，３ＨＴｄＲ...     

幽门螺杆菌相关性十二指肠溃疡患者血清、胃窦粘膜组织中胃泌素、生长抑素水平变化

目的：探讨幽门螺杆菌相关性胃窦炎症病理变化程度对血清、胃窦部粘膜组织中胃泌素水平的影响。方法：对Hp阳性的活动性DU患者30例、Hp阴性的活动性DU患者10例、Hp阴性且病理表现仅有轻度浅表性胃炎的10例正常对照患者进行内镜、胃粘膜组织学、幽门螺杆菌和血清、胃粘膜组织胃泌素水平检测，并分析其相互关系。结果：幽门螺力阳性患者血清、胃粘膜组织中胃泌素水平较幽门螺杆菌阴性患者显著升高（P＜0．01）。胃窦组织中生长抑素水平明显降低（P＜0．01）。结论：幽门螺杆菌感染后胃泌素、生长抑菌变化与DU的发生关系密切，并在疾病的发生发展中起一定作用。     

非溃疡性消化不良与胃肠激素关系的研究概况

非溃疡性消化不良 (ＮＵＤ)亦称功能性消化不良 ,是临床常见的一种综合征。根据临床表现可分为五种亚型 :运动障碍样消化不良、溃疡样消化不良、反流样消化不良、吞气症和特发性消化不良。ＮＵＤ的病因和发病机制尚不明确。自从190 2年Ｂａｙｌｉｓｓ和Ｓｔａｒｌｉｎｇ发现促胰液素以来 ,至今陆续发现的胃肠激素已达 40余种。胃肠激素可以通过内分泌、神经分泌和旁分泌等方式 ,调节消化系统的运动、分泌、吸收及细胞营养功能。许多胃肠激素还存在于中枢神经系统 ,故又将这些肽类激素称为“脑肠肽” ,它们可在中枢水平直接参与对摄食、睡眠…     

脾虚证与体液胃泌素及生长抑素关系的实验研究

目的，探讨胃泌素(Gas)、生长抑素(SST)与脾虚证发生的美系．方法：观察实验脾虚证发生过程中体液Gas、SST含量的变化，并用四君子汤反证．结果：脾虚时体液中Gas含量低下，SST含量增高．经四君子汤预防和治疗的脾虚大鼠，Gas、SST水平得到明显的改善，明显优于脾虚自然恢复大鼠。结论：本研究结果韧步表明，脾虚时体液Gas、SST水平紊乱是导致脾失健运的主要原因之一。     

血浆及乙状结肠粘膜中CCK、MOT的含量与肠易激综合征的关系

应用放射免疫分析法检测正常对照组２４例及肠易综合征组（ＩＢＳ）２６例受检者血浆及乙状结肠粘膜中胆囊收缩素（ＣＣＫ）和胃动素（ＭＯＴ）的含量，旨在探讨ＩＢＳ患者血浆及乙状结肠粘膜中ＣＣＫ和ＭＯＴ有无变化，以及它们在ＩＢＳ疾病过程中的可能作用和临床意义。结果：ＩＢＳ组血浆中ＣＣＫ、ＭＯＴ的含量明显高于正常对照组（Ｐ＜０．０５）；乙状结肠粘膜中ＣＣＫ的含量两组无显著差别（Ｐ＞０．２），ＭＯＴ的含量两组均为零。提示血浆中ＣＣＫ和ＭＯＴ可能在ＩＢＳ的疾病过程中起有一定作用，建议在临床实验诊断中验证它们作为ＩＢＳ诊断标志的可能性。