云南省成人与青少年HIV/AIDS患者抗病毒治疗10年结果分析

目的回顾和总结云南省成人和青少年AIDS抗病毒治疗10年结果,讨论取得的成绩和存在的问题。方法利用《艾滋病综合防治系统——抗病毒治疗管理》数据库的数据进行统计分析。结果云南省的治疗人数和覆盖率都有了显著增长,在50 241例进行过抗病毒治疗的患者中,截至2013年12月底仍然继续治疗的占82.3%;感染途径为静脉吸毒患者的失访、停药和病死率显著高于性途径感染者;患者的治疗基线CD4+T淋巴细胞计数越低,治疗期间的病死率越高;1年的治疗队列中,基线CD4+T淋巴细胞计数<350个/mm3患者的终止治疗率低于CD4+T淋巴细胞计数≥350个/mm3的患者;治疗第1年的患者治疗保持情况不佳,停药、失访和病死率较后期的高;治疗6个月以上的患者有82.9%达到病毒检测不到水平;耐药率低于5%;接受治疗患者的病死率逐年下降,已经低于2%。结论云南省抗病毒治疗取得了一定的成绩,但在扩大治疗的策略和目前情况下仍然面临着挑战。     

云南省接受艾滋病抗病毒治疗成人患者期望寿命研究

目的 了解云南省接受艾滋病ART的HIV感染者期望寿命及其变化.方法 对在云南接受ART成人患者编制2020年简略现时寿命表计算期望寿命,分析不同特征患者期望寿命的差别,对比全部患者和治疗6个月仍存活患者的期望寿命.分析历年来不同基线CD4细胞水平的20、30、40、50岁ART患者期望寿命的变化趋势.结果 13627...     

视蛋白基因启动子-绿色荧光蛋白融合基因转基因小鼠模型的建立

目的：从小鼠基因组中克隆小鼠视蛋白基因启动子（ROP）并建立ROP－绿色荧光蛋白（GFP）融合基因转基因小鼠模型。方法：用PCR法从基因组内扩增ROP，通过基因重组的方法构建pmROP-EGFP表达载体，并用限制性内切酶消化和DNA测序进行鉴定。纯化的pMOP-EGFP表达质粒经Not I酶切线性化后，用原核显微注射的方法将其注射入小鼠受精卵雄原核，制作转基因小鼠。新生鼠通过PCR检测在基因组水平筛选首建小鼠，基因组表达阳性的小鼠与正常小鼠交配传化后，取眼球进行冰冻切片，在荧光显微镜下观察视网膜下GFP的表达。结果：从基因组内扩增出了2.1kb的小鼠ROP，成功构建了小鼠ROP－GFP融合基因表达载体pmROP-EGFP。获得了3只转基因小鼠首建，分别命名为C57－TgN(mROP-EGFP)SMMU21,C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU26,C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU27。结论：成功建立了视网膜表达GFP蛋白的C57－TgN(mROP-EGFP)SMMU转基因小鼠，它们可用于研究脑和视网膜发育以及视网膜病变机制，还可为进行视网膜移植实验提供哺乳类动物模型。     

人nestin第二内含子荧光素酶报告基因载体的构建及鉴定

目的构建含有人nestin第二内含子的荧光素酶报告基因并检测其活性。方法从NCBI数据库获得nestin的DNA全长序列（NC₀00001）,用vectorNTI软件分析找到其第二内含子位置,通过PCR的方法从人血全基因组DNA中钓取nestin的第二内含子全长片段,克隆到报告基因pGL3-promoter载体上,将报告基因载体转染至293T细胞,采用双荧光素酶报告基因系统评估第二内含子的活性。结果成功钓取nestin第二内含子片段,长度为1688bp,测定其DNA序列正确。瞬时转染293T细胞,经双荧光报告实验显示转染了pGL3-nes-promoter载体的细胞其相对荧光素酶活性相比于空载组,大约提高了3.39倍,差异有统计学意义（P<0.001）。结论成功构建了含有nestin第二内含子的荧光素酶报告载体,为进一步研究nestin的调控机制奠定基础。     

医学发育生物学教材与课程建设的设想

发育生物学是研究有机体从胚胎发生、生长发育至衰老死亡的生命过程中所发生的变化和规律的科学 ,是传统胚胎学的深入和发展 ,其研究范围主要涉及胚胎发育的遗传物质基础、胚胎细胞、组织的分子构成和生理生化及形态表型如何以遗传为基础进行演变 ,来源于亲代的基因库如何在发育过程中按一定的时空顺序予以表达、基因型和表型间的因果关系等 ,因而它已成为当今胚胎学最重要的分支学科。发育生物学又是实验胚胎学、分子胚胎学、细胞生物学、分子遗传学和分子生物学等学科相互渗透而发展建立起来的一门交叉学科 ,其内容涉及多个学科 ,即应用各…     

Sca-1,CD24和Muc1在雌性大鼠静止期乳腺中的表达

目的 研究干细胞抗原(Sca-1),CD24和Muc1在静止期乳腺中的表达.方法 用Western免疫印迹法检测Sca-1和CD24在6周龄和9周龄大鼠乳腺中的含量变化,制备6周龄、9周龄SD雌性大鼠乳腺标本,切片(4 μm),运用免疫组化酶标和免疫组化荧光法对乳腺中Sca-1,CD24,Muc1进行标记.结果 Sca-1,CD24在6周龄的大鼠乳腺中的含量略低于9周龄大鼠;Sca-1在乳腺叶间导管、分支导管及腺泡周围表达;CD24在分支导管、乳脂垫及腺泡周围中表达;Muc1在分支导管和叶间导管中表达.结论 Sca-1阳性细胞可能代表一类乳腺祖细胞,CD24阳性细胞代表一类乳腺干细胞,而Muc1阳性细胞代表成熟腺上皮细胞.本实验为上述细胞的鉴定提供了一些形态学证据,但需要细胞移植实验进一步实证.     

NucleofectorTM电转仪转染外源基因至骨髓基质细胞优化方案

目的用Nucleofector^TM电转仪介导真核表达载体pEGFP-C1及pEGFP-C1-PDX-1转染大鼠骨髓来源细胞，并对其转染条件进行优化以获得较高效率。方法将已构建好的重组载体以Nacleofector^TM电转仪转染不同方法获得的骨髓来源细胞，改变DNA的量、转染后血清浓度，在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率；转染后48h进行逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测目的基因的表达情况。结果相同条件下转染骨髓来源的神经干细胞（NSC）较转染骨髓基质细胞（MSC）可获得更高的转染效率；质粒2～10雌获得最佳的转染效率；提高转染后培养基的血清浓度可提高转染后细胞存活率及转染效率；RT-PCR检测转染后骨髓来源nestin＋细胞有PDX-1表达。结论通过优化转染条件提高了pEGFP-C1-PDX-1转染大鼠骨髓来源nestin＋细胞的效率，为成为组织工程的种子细胞提供了实验依据。     

上皮组织特异性表达N-LMP1和CR2转基因猪胚胎成纤维细胞的构建与鉴定

目的构建上皮组织特异性表达鼻咽癌来源潜伏膜蛋白1(N-LMP1)和人补体受体2(CR2)真核表达载体,转染猪胚胎成纤维细胞并筛选整合有N-LMP1和CR2基因的细胞克隆,为构建与EBV感染相关的猪鼻咽癌模型奠定基础。方法通过直接合成ED-L2启动子和N-LMP1,从人B淋巴细胞中的RNA经RT-PCR扩增出CR2,将上述3个片段逐个连接到真核表达载体pN1上,构建上皮组织特异性表达N-LMP1和CR2的载体pN1-EDL2-N-LMP1-CR2;用脂质体转染猪胚胎成纤维细胞,经药物G418筛选和PCR鉴定阳性克隆。结果成功构建上皮组织特异性表达N-LMP1和CR2的真核表达载体pN1-ED-L2-N-LMP1-CR2,并成功整合到猪胚胎成纤维细胞的基因组中,获得了整合有目的基因N-LMP1和CR2的猪胚胎成纤维细胞克隆。结论获得了上皮组织特异性表达N-LMP1和CR2的猪胚胎成纤维细胞克隆,为通过细胞核移植方法获得表达N-LMP1和CR2转基因猪提供了供体细胞。