抗迟缓爱德华菌独特型单克隆抗体重链可变区基因的克隆及序列分析

目的克隆并分析迟缓爱德华菌抗独特型单克隆抗体(mAb)VH基因。方法从分泌迟缓爱德华菌抗独特型mAb的杂交瘤细胞株(1E11)中提取总RNA,利用RT-PCR技术,扩增迟缓爱德华菌抗独特型抗体VH基因,并将其克隆到PBS-Tvector中进行序列分析。结果VH基因的全长序列为339bp,编码113个氨基酸。通过NCBI/BLAST/N和IMGT数据库(Lefrance,2001)分析表明,VH基因符合小鼠IgGV区基因的特征含有4个框架区(FR),3个抗原互补决定区(CDR)及两个抗体特征性的半胱氨酸。结论成功地克隆了迟缓爱德华菌抗独特型mAbVH基因,为进一步构建迟缓爱德华菌抗独特型抗体基因工程疫苗奠定了基础。     

医学免疫学本科生理论课教学探讨

医学免疫学是医学本科生必修的一门医学基础课程,学科本身具有概念抽象、各部分内容联系密切、在细胞和分子水平发展迅速等特点,如何根据医学免疫学自身的特点和教学中存在的问题,有针对性地选择适合本学科的教学方式和手段,对于学员理解和掌握医学免疫学课程,提高教学效果至关重要,根据几年来的教学经验,就本科生的理论课教学谈几点体会。     

人生长抑素受体-2和大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶共表达细胞系的建立及其对5-氟胞嘧啶杀伤的敏感性

目的建立共表达人生长抑素受体2(SSTR2)和大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)的细胞系,为"自杀基因"/前体药物系统联合SSTR2介导的放射性免疫杀伤和显像治疗肿瘤提供细胞模型.方法应用反转录PCR方法从人胚肾293细胞中克隆人sstr2基因,通过基因重叠延伸拼接(SOE)结合PCR方法将CD、内部核糖体进入位点(IRES2)和sstr2连接,并构建表达载体.体外转染人乳腺癌SKBr3细胞并筛选,通过间接免疫荧光检测SSTR2的表达,并研究前体药物5-氟胞嘧啶(5-FC)对上述细胞的杀伤作用.结果成功克隆了人sstr2基因,并构建了CD和sstr2基因的双顺反子表达载体,进一步建立了稳定转染上述表达载体的SKBr3细胞系,间接免疫荧光证实了SSTR2的表达,同时建系细胞能够被前体药物5-FC高效杀伤.结论本研究建立的人乳腺癌细胞系可以共表达sstr2和CD基因,为在体内研究放射性核素标记的SSTR2配体显像和免疫杀伤,并协同CD/5-FC治疗肿瘤奠定基础.     

人源性抗HBsAg抗体Fab段噬菌体呈现文库的构建、筛选及阳性克隆核苷酸序列测定

目的:构建一个经HBsAg主动免疫的人lgG1抗体噬菌体展示文库,通过特异的淘筛(panning)获得与HBsAg有较高亲和力的Fab抗体,并测定其编码序列。方法:从一经乙肝疫苗免疫的自愿者的外周血分离淋巴细胞提取RNA,逆转录合成cDNA。PCR扩增重链Fd和κ轻链cDNA。依次将PCR产物克隆进载体pComb3H相应的位点,构建成噬菌体呈现库,并以HBsAg包被的96孔板对抗体库进行3轮淘筛,将所获克隆分别与HBsAg进行ELISA反应,挑取显色大于对照20倍以上的阳性克隆进行DNA测序。结果:lgG1的Fd段和κ轻链cDNA得到扩增,构建了一实际库容量为1.8×10⁵的噬菌体呈现文库。通过特异性淘筛,获得与HBsAg有较高新合力的3株Fab抗体并测定其编码序列。DNA序列测定结果表明,3株抗体中两株的Fd段完全一样,且3株的轻链完全一样。结论:成功构建了一个经HBsAg抗原免疫的人源抗体Fab段噬菌体抗体库,筛选得到了3株特异性抗体的Fab片段。     

Notch1及其下游靶分子Hes1在肾细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的检测Notch1及其下游靶分子Hes1在肾细胞癌组织中的表达情况,并分析Notch1的表达与临床病理特征的相关性。方法利用免疫组织化学染色,Western blot法和实时定量PCR(qRT-PCR)分别检测肾细胞癌组织及对应的癌旁正常肾组织中Notch1的表达,用qRT-PCR检测Notch下游靶分子Hes1的表达,并用SPSS17.0软件分析Notch1的表达水平与临床病理特征的相关性。结果免疫组织化学染色,Western blot法和qRT-PCR结果均显示Notch1在肾细胞癌组织中的表达低于正常肾组织,qRT-PCR结果显示Hes1在肾细胞癌组织中的表达低于正常肾组织,且Notch1的表达与肿瘤Fuhrman分级和AJCC分期呈负相关。结论 Notch1及其下游靶分子Hes1在肾细胞癌的发生发展过程中可能具有肿瘤抑制基因的作用。     

Bmi1调节肿瘤细胞生长及放化疗敏感性的研究进展

Bmi1是多梳(PcG)蛋白家族的重要成员,它在维持造血干细胞的自我更新、胸腺细胞的发育及Th2细胞的分化中发挥重要作用。研究表明,Bmi1可通过多种机制调节肿瘤细胞的增殖和分化,也参与肿瘤细胞放化疗敏感性的调节。由于Bmi1与肿瘤的发生、发展和复发,肿瘤干细胞(CSC)的自我更新及肿瘤的放化疗敏感性密切相关,Bmi1可能是一个重要的肿瘤治疗靶点。本文综述了Bmi1在肿瘤细胞中的生物学作用,以及其与CSC和放化疗敏感性关系的研究进展。     

依达拉奉治疗急性脑出血的效果

目的:观察依达拉奉治疗急性脑出血的临床效果。方法:选取80例急性脑出血患者,按照随机数字法将其分为观察组与对照组各40例。对照组给予常规治疗,观察组在对照组基础上联合依达拉奉治疗。检测并比较两组治疗前后的血清内皮素(ET)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)水平,比较两组治疗前后的神经功能缺损情况(NIHSS)和日常生活能力(ADL),比较两组治疗效果及不良反应发生率。结果:治疗后观察组ET、NSE、IL-6和TNF-ɑ水平均显著低于对照组(P<0.05),NIHSS评分、ADL评分和治疗有效率均明显优于对照组(P<0.05),两组均未发生不良反应。结论:在常规治疗基础上,依达拉奉治疗急性脑出血的临床效果优于单纯常规治疗效果。     

复方新诺明片联合复方玄驹胶囊治疗慢性前列腺炎80例分析

目的:观察复方新诺明片联合复方玄驹胶囊治疗慢性前列腺炎疗效。方法:将160例慢性前列腺炎患者分为治疗组与对照组,每组80例。两组均给予复方新诺明片0.96 g,2次/d,口服,治疗组加用复方玄驹胶囊3粒,3次/d,口服,均4周为1个疗程。结果:治疗4周后,治疗组总有效率高于对照组总有效率(P<0.05)。结论:复方新诺明片联合复方玄驹胶囊治疗慢性前列腺炎疗效好。     

hTERT siRNA表达载体的构建及对转染的HeLa细胞生长抑制作用

目的:通过RNA干涉技术抑制肿瘤细胞端粒酶表达,探讨干涉后对肿瘤细胞生长的抑制作用. 方法:根据人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA编码序列,设计RNA干涉靶点,构建siRNA(small interferencing RNA)表达载体,并转染HeLa细胞,通过RT-PCR法观察重组质粒转染肿瘤细胞后端粒酶mRNA、蛋白含量及细胞生长情况. 结果:构建的siRNA表达载体可以使HeLa细胞端粒酶逆转录酶mRNA及其蛋白含量降低,转染质粒的细胞生长增殖速度减慢. 结论:成功构建了针对人端粒酶逆转录酶的siRNA表达载体,通过转染HeLa细胞,可有效抑制细胞中端粒酶的表达,并引起细胞生长抑制.