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71.
目前,抗体治疗已成为肿瘤治疗的一线治疗策略。截至2013年,美国FDA已批准了针对EGFR的西妥昔单抗(cetuximab)、针对HER2的曲妥珠单抗(trastuzumab)、针对CD20的利妥昔单抗(rituximab)、针对VEGF的贝伐单抗(bevacizumab)以及针对CTLA-4的伊匹单抗(ipilimumab)等抗体药物用于肿瘤的临床治疗。同时,随着新型抗体不断研发,例如针对PD-1分子的MDX-1106和BMS-936558均已进入临床试验阶段,使得抗体治疗成为目前肿瘤治疗的研究热点,也是转化医学最成功的范例之一。本文以FDA批准的针对HER2、CD20、VEGF以及CTLA-4的抗体,并结合目前处于临床试验阶段的抗体为例,介绍用于肿瘤治疗的治疗性抗体在临床转化中的研究进展。 相似文献
72.
目的:构建汉坦病毒(Hantavirus, HV)单链抗体/鱼精蛋白片段融合蛋白1A8 ScFv/Cκ/P基因的原核表达载体,蛋白经表达后纯化并进行1A8 ScFv/Cκ/P融合蛋白的功能活性鉴定.方法:采用PCR的方法,扩增单链抗体基因1A8 ScFv和1A8 ScFv/Cκ,将鱼精蛋白片段的编码序列设计入扩增引物,获得HV单链抗体/鱼精蛋白片段的融合蛋白基因1A8 ScFv/Cκ/P. 将获得的重组基因克隆入原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌BL21中表达. 表达产物经SDS-PAGE和Western Blot鉴定,用Ni-NTA螯合层析介质进行纯化. 采用ELISA方法分析1A8 ScFv/Cκ/P融合蛋白与HV抗原的结合活性,凝胶迁移阻滞实验检测1A8 ScFv/Cκ/P融合蛋白与质粒DNA的结合活性. 结果:成功构建了HV 1A8 scFv/Cκ/P融合蛋白基因的表达载体,在大肠杆菌中实现了可溶性表达. 通过功能活性测定,纯化的1A8 scFv/Cκ/P融合蛋白既保持了与HV抗原的结合能力,同时又具有与核酸的结合活性. 结论:构建和表达的HV 1A8 scFv/Cκ/P融合蛋白具有HV抗原结合活性和DNA结合的活性. 相似文献
73.
人截短型凋亡诱导因子AIF△1-480的表达对HeLa细胞的促凋亡作用 总被引:2,自引:0,他引:2
目的: 观察人截短型AIF(AIF△1-480)基因的表达对HeLa细胞的促凋亡作用. 方法: 在人截短型AIF(AIF△1-120)基因克隆成功的基础上,进一步改造,构建截去AIF基因线粒体定位信号、FAD结合结构域和NADH结合结构域(1-480位氨基酸)编码序列的人截短型AIF(AIF△1-480)基因.将其克隆入pIRES2-EGFP绿色荧光蛋白(EGFP)共表达载体,用脂质体法转染HeLa细胞,通过荧光显微镜观察、电镜观察等方法,检测目的基因在转染细胞中的表达以及对转染细胞形态的影响.结果: 成功构建了人截短型AIF(AIF△1-480)基因的真核表达载体.转染细胞后,可检测到人截短型AIF(AIF△1-480)分子的表达.转染后48 h,可观察到表达人截短型AIF(AIF△1-480)分子的细胞呈现典型的凋亡特征.结论: 人截短型AIF(AIF△1-480)基因的表达可诱导HeLa细胞凋亡. 相似文献
74.
目的: 构建人抗HBsAg单链抗体-Tat蛋白转导结构域(ScFv-Tat)融合基因,在大肠杆菌中进行表达,并分析ScFv-Tat融合蛋白的活性及内化情况. 方法: 设计引物扩增人抗HBsAg单链抗体基因,克隆入含有蛋白转导结构域Tat序列的原核表达载体pTAT-HA,在大肠杆菌BL2l(DE3)LysS内诱导融合蛋白表达. 表达产物用SDS-PAGE及Western blot鉴定,用亲和层析柱纯化. 间接ELISA和ELISA竞争抑制实验分析ScFv-Tat融合蛋白的亲和活性,将纯化蛋白与HBsAg阳性或阴性肝癌细胞共孵育后,免疫细胞化学染色分析ScFv-Tat融合蛋白的结合及内化情况. 结果: 成功地构建了人抗HBsAg单链抗体-Tat融合蛋白的原核表达载体,在IPTG诱导下获得了表达,表达的ScFv-Tat融合蛋白具有与HBsAg结合的活性,并且能够特异性内化入HBsAg阳性肝癌细胞. 结论: 单链抗体与Tat蛋白转导结构域融合后,实现了ScFv-Tat融合蛋白的特异性内化,为该单链抗体的进一步应用奠定了基础. 相似文献
75.
作者首次报道将聚合酶链反应(PCR)技术用于检测非核酸物质-胃癌相关抗原,建立了免疫-PCR技术。首先制备胃癌单抗及重组DNA的嵌合体即MG7—pXJ19,以将抗原抗体反应的专一性同PCR技术的高敏感性相结合,构建一种集ABC及PCR一体的双重放大系统。利用这种技术检测胃印戒细胞癌株KATOⅢ肿瘤相关抗原,并与ELISA法比较其敏感性。结果表明应用免疫-ICR技术KATOⅢ细胞数目在20个时即可出现阳性结果,敏感性较ELISA法高出104倍。若以0.25%戊二醛固定相同数量(2×106/ml)KATOⅢ细胞后加入不同浓度的MG7-pXJ19嵌合体,则免疫-PCR检测结果呈阳性时所需MG7-pXJ19为3.8×1O-14mol,而ELISA法需3.0×10-11mol。研究结果表明,免疫-PCR技术可用于肿瘤相关抗原的检测,具有高敏感性,高特异性,结果稳定且重复性满意。 相似文献
76.
survivin基因的RNA干涉抑制人乳腺癌SKBr-3细胞体外增殖的作用 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:研究RNA干涉(RNAinterference,RNAi)抑制survivin基因表达后对人乳腺癌SKBr3细胞体外增殖能力的影响。方法:通过RTPCR和间接免疫荧光检测转染survivin靶向的小干涉RNA表达载体pSUPERS1后SKBr3细胞中survivin基因的表达;集落形成实验、MTT比色法检测细胞体外增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期。结果:转染pSUPERS1后,SKBr3细胞中survivin的mRNA和蛋白表达水平明显降低;克隆形成率(38±16.70)%比对照组(90.3±4.04)%显著降低;细胞增殖减慢,主要阻滞于G1期(74.03±8.91)%。结论:RNA干涉沉寂survivin基因表达后明显抑制了人乳腺癌SKBr3细胞的体外增殖能力。 相似文献
77.
Hsp701A基因的RNA干涉对HepG2细胞化疗敏感性的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:研究Hsp701A基因靶向siRNA表达载体对肿瘤细胞化疗药物敏感性的影响。方法:构建Hsp701A靶向小干涉RNA(siRNA)的真核表达载体,并转染HepG2细胞,以证实siRNA真核表达载体RNAi的有效性。用四唑蓝(MTT)比色法检测HepG2细胞对白藜芦醇、顺铂的敏感性。结果:以构建的Hsp701A基因靶向siRNA的真核表达载体稳定转染HepG2细胞后,两种RNAi组细胞中Hsp701ARNA和蛋白的表达水平均明显下降。Hsp701A基因靶向siRNA真核表达载体转染后,HepG2细胞对不同化疗药物的敏感性有不同程度的增加(P〈0.05)。结论:Hsp701A基因的RNA干涉可增强HepG2细胞对化疗药物的敏感性。 相似文献
78.
目的 :探讨具有自发活性的caspase 3分子对乳腺癌肿瘤细胞凋亡的诱导作用。方法 :重构型caspase 3转染SKBr 3细胞后 ,以观察细胞的形态、进行细胞计数和及流式细胞仪分析等方法 ,验证caspase 3大、小亚基顺序颠倒的重构型caspase 3分子的促凋亡活性。将重组真核表达载体 pcDNA3 revcas pase 3直接注射荷瘤裸鼠研究其对肿瘤生长的抑制作用 ,间接免疫荧光染色法检测肿瘤组织中重构型caspase 3基因表达情况 ,用TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡。结果 :重构型cas pase 3基因转染后 ,可诱导SKBr 3细胞凋亡 ,将 pcDNA3 revcaspase 3重组质粒直接注射荷SKBr 3瘤裸小鼠后 ,肿瘤的生长明显受到抑制 ,免疫组化染色可检出重构型caspase 3蛋白的表达 ;TUNEL法检测证实肿瘤细胞发生凋亡。结论 :重构型caspase 3基因的体内表达可诱导SKBr 3细胞凋亡 相似文献
79.
肿瘤患者伴发抑郁、焦虑症状的临床治疗 总被引:12,自引:0,他引:12
目的:验证帕罗西汀对肿瘤患者伴发的抑郁焦虑症状的治疗作用。方法:采用焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表(SDS)选取伴焦虑、抑郁症状的肿瘤患者93例,随机分为二组。治疗组:每日口服帕罗西汀10-20mg,共4周,于治疗后进行SAS、SDS测评,并与对照组进行对照。结果:帕罗西汀治疗肿瘤患者伴发的抑郁焦虑症状有效率分别为:77.8%和71.1%,明显高于对照组。结论:帕罗西汀对肿瘤患者的抑郁、焦虑症状均有明显治疗作用。 相似文献
80.
抗人精浆蛋白单抗κ链基因的克隆及其在HeLa细胞的表达 总被引:1,自引:1,他引:1
目的 获得鼠抗人精浆蛋白单抗(mAb)κ链基因,并将其转染到HeLa细胞进行表达。方法 从分泌抗人精浆蛋白mAb的杂交瘤细胞系E4B7中提取总RNA,用RT-PCR法获取κ链cDNA。将其克隆入真核表达载体pcDNA3,用脂质体转染法转染HeLa细胞,并用免疫荧光染色法检测κ链的表达。结果从分泌抗人精浆蛋白的鼠mAb杂交瘤细胞系E4B7中克隆了κ链基因。序列测定表明,Vκ属于鼠免疫球蛋白XⅢ家族。以含κ链基因的真核表达载体pcDNA3-E4B7κ转染HeLa细胞后,在HeLa细胞中检测到了κ链的表达。结论 获得了序列正确的κ链基因,并在HeLa细胞中成功地表达,为进一步构建和表达Fab段打下了良好基础。 相似文献