流式细胞分选术和Rho123在分离MHCC97肿瘤干细胞中的应用

目的:肝癌组织中可能存在具有表型和功能特殊的肝癌细胞,分离和鉴定这群细胞是否具有干细胞特征对阐明肝癌发病机制、揭示肝癌复发和转移具有重要的意义。寻求分离MHCC97肿瘤干细胞的有效方法,探讨角蛋白(CK-19)在不同肝癌细胞亚群中的表达差异。方法:实验于2006-11/2007-05在解放军第四军医大学免疫实验室和肝胆外科实验室完成。细胞来源:MHCC97肝癌细胞(人高转移肝癌细胞系)由上海复旦大学中山医院肝癌研究所提供。实验方法:MHCC97细胞常规消化,HBSS洗涤,制备成单细胞悬液,细胞密度为1×109L-1。每份取1×106个细胞,参考Rho123对线粒体膜电位测定的0.1mg/L质量浓度,分别做0.1mg/L和0.05mg/L两个质量浓度细胞梯度染色,对照组加入维拉帕米(终浓度50mmol/L),以未加Rho123作为阴性对照。实验评估:采用免疫细胞化学方法观察细胞角蛋白19在0.05mg/LRho123细胞及0.1mg/LRho123两组中的表达和含量。结果:单纯加入Rho123组有一低荧光拖尾,而维拉帕米拮抗组无此区域,即0.05mg/LRho123细胞占总数的2.1%,其余为0.1mg/LRho123组细胞。两组细胞内均有细胞角蛋白19阳性表达,阳性反应为显示位于细胞质的棕黄色颗粒,两组比较有统计学差异(P<0.05)结论:细胞角蛋白19在肝癌细胞亚群中表达有差异,强阳性多数分布在0.05mg/LRho123组中,Rho123结合流式细胞分选术可以有效地分选出癌细胞中的肿瘤干细胞。     

融合IL2的慢病毒实现对T细胞的高效基因转导

目的 制备融合IL2的慢病毒以提高对人原代T淋巴细胞的转导效率.方法 将白细胞介素-2(IL2)基因定向克隆至水疱性口炎病毒G蛋白(VSV-G)编码基因5′端,构建新型慢病毒包装辅助质粒pMD2.IL2-G.使用不同剂量pMD2.IL2-G进行慢病毒包装,应用免疫印迹和ELISA比较病毒滴度,流式细胞术检测病毒对T细胞...     

HER2高表达的人乳腺癌原代细胞模型的建立

目的:探讨人乳腺癌恶性胸水肿瘤细胞的分离、纯化、培养与肿瘤细胞的鉴定,为HER2阳性的人乳腺癌的研究提供肿瘤原代细胞模型.方法:利用淋巴细胞分离液及密度梯度离心法分离、纯化恶性胸水肿瘤细胞,分离得到的细胞培养并传至第5代,通过流式细胞仪分选肿瘤细胞、Q-PCR技术、Western blot技术验证细胞HER2分子的表达水平、通过裸鼠荷瘤实验检测细胞的成瘤能力.结果:淋巴细胞分离液及密度梯度离心法分离得到乳腺癌原代细胞;流式细胞分选结果显示未分选出HER2高表达的肿瘤细胞;Q-PCR及Western blot检测发现分离得到的细胞在mRNA及蛋白水平HER2的表达水平高于乳腺癌MCF-7细胞;裸鼠荷瘤实验结果显示分离得到的细胞可以成功荷瘤.结论:胸水中分离得到的细胞为HER2阳性的乳腺癌原代细胞;对于原代细胞的鉴定需要采用不同的方法加以论证.     

PSCA特异性MR分子探针的构建及其免疫活性检测

目的应用纳米金磁微粒标记抗人前列腺干细胞抗原(PSCA)单抗7F5,构建PSCA特异性MR分子探针7F5@GoldMag,检测其理化性质和免疫活性。方法将金磁微粒作为MR对比剂标记7F5,应用非共价键偶联方法构建PSCA特异性MR分子探针7F5@GoldMag,计算偶联效率;采用激光共聚焦显微镜观察、流式细胞术、透射电镜观察等方法,检测探针与前列腺癌PC-3细胞结合的特异性。结果成功构建了PSCA特异性MR分子探针7F5@GoldMag。流式细胞术检测结果:7F5@GoldMag与PC-3细胞结合率为92.1%;激光共聚焦显微镜观察见PC-3细胞与7F5@GoldMag有特异性结合,红色荧光位于细胞膜;透射电镜观察PC-3近细胞膜处可见多个团块状致密电子密度颗粒聚集。结论 PSCA特异性MR分子探针7F5@GoldMag可与前列腺癌PC-3细胞特异性结合。     

治疗性抗体用于肿瘤治疗的临床转化研究现状

目前,抗体治疗已成为肿瘤治疗的一线治疗策略。截至2013年,美国FDA已批准了针对EGFR的西妥昔单抗（cetuximab）、针对HER2的曲妥珠单抗（trastuzumab）、针对CD20的利妥昔单抗（rituximab）、针对VEGF的贝伐单抗（bevacizumab）以及针对CTLA-4的伊匹单抗（ipilimumab）等抗体药物用于肿瘤的临床治疗。同时,随着新型抗体不断研发,例如针对PD-1分子的MDX-1106和BMS-936558均已进入临床试验阶段,使得抗体治疗成为目前肿瘤治疗的研究热点,也是转化医学最成功的范例之一。本文以FDA批准的针对HER2、CD20、VEGF以及CTLA-4的抗体,并结合目前处于临床试验阶段的抗体为例,介绍用于肿瘤治疗的治疗性抗体在临床转化中的研究进展。     

2011年诺贝尔生理学或医学奖的启示——源头创新与执着追求

10月3日,2011年诺贝尔生理学或医学奖尘埃落定——瑞典卡罗林斯卡医学院诺贝尔生理学或医学奖评审委员会宣布,美国科学家布鲁斯·博伊特勒（BruceA．Beutler）、生于卢森堡的法国籍科学家朱尔斯·霍夫曼（JulesA．Hoffmann）和加拿大科学家拉尔夫·斯坦曼（RalphM．Steinman）因在免疫学领域的杰出贡献共同分享这一殊荣。     

人源抗HER2单链抗体/鱼精蛋白截短体融合蛋白的表达、纯化及鉴定

在人类乳腺癌组织中人类表皮生长因子受体2 (HER2)和受体趋化因子4(CXCR4)的表达成正相关,由于HER2与CXCR4/CXCL-12轴在乳腺癌骨转移中的重要作用,使其成为可供选择的肿瘤治疗靶点.本研究将HER2单链抗体(ScFv)与鱼精蛋白截短体(tP)融合,以期获得同时具有抗原与核酸结合活性的ScFv-tP融合蛋白,核酸与该融合蛋白结合后,有望实现小分子干扰RNA( siRNA)的靶向递送,对HER2与CXCR4/CXCL-12轴进行RNA干扰(RNAi),为新型抗肿瘤药物应用于临床提供资料.     

转运结构域的研究进展

利用非病毒载体转运目的基因时 ,具有转运结构域的蛋白质或多肽片段可以有效地促进外源效应分子进入细胞浆 ,发挥其效应。这些转运结构域广泛的存在于毒素蛋白、病毒蛋白、转录因子、同源结构域及合成肽当中。     

前列腺干细胞抗原特异性MR分子探针体外成像实验研究

目的 探讨本实验室构建的前列腺干细胞抗原（PSCA）特异性MR分了探针7F5@GoldMag用于体外前列腺癌细胞MR成像的可行性。方法利用3．0T磁共振扫描仪建立MR扫描序列,观察不同浓度的金磁微粒MR成像情况,探讨MR可分辨的最低浓度;培养人前列腺癌细胞系PC-3和人肝癌细胞系SMMC-7721（后者为对照组）,将这两种细胞分别与7F5@GoldMag、无关抗体@GoldMag交叉配对,37℃孵育1h;对各组细胞进行T2WI扫描并分别测量其信号强度,采用单因素方差分析比较各组之间信号强度的差异。结果GoldMagTM-CS稀释至1：640与1％琼脂糖凝胶相比,T2WI序列信号强度差异有统计学意义;7F5@GoldMag标记不同细胞系行MR扫描结果提示,7F5@GoldMag可显著降低PC-3细胞T2WI信号,而对SMMC-7721MR信号无显著影响。非特异抗体偶联的GoldMag对两种细胞MR信号均无显著影响。结论本实验室构建的以PSCA为靶向分子的MR探针7F5@GoldMag可特异性降低PC-3细胞的T2WI信号,从而为下一步体内MR成像实验奠定了基础。