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构建抗人肝癌细胞单链抗体库 ,从中筛选与肝癌细胞特异结合的高亲和力单链抗体。从HepG2细胞免疫的BALB/c小鼠脾脏提取总RNA ,RT PCR扩增小鼠抗体重、轻链可变区基因 ,用 (Gly4Ser) 3 连接肽基因 ,经重叠延伸反应 ,在体外将VH 和VL 连接成单链抗体 (scFv)基因 ,并克隆入噬菌粒载体pCANTAB5E中 ,构建噬菌体单链抗体库。以HepG2细胞为抗原对抗体库进行淘选 ,ELISA法鉴定各单克隆与肝癌细胞的结合活性 ,并对阳性克隆进行表达。成功构建了库容为 1 1× 10 6抗肝癌细胞的噬菌体单链抗体库 ,经筛选得到了与HepG2细胞具有较强结合能力的单链抗体 ,实现了scFv在大肠杆菌中的可溶性表达。序列测定结果表明 ,VH 和VL 基因符合小鼠抗体可变区特征 ,scFv基因拼接正确 相似文献
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采用大鼠离体输精管制备研究了人参总皂甙对肾上腺素能神经末梢递质释放的影响.离桩输精管在Kreb's液中平衡30min.取出后用2ml含5uci[~3H]-7-NE37℃的Kreb's液再温孵30min让神经末梢充分摄取[~3H]-NE.然后用Kreb's液冲洗90min,进行实验.在整个实验过程中Kreb's液均通以足量的混合气(95%o_2,5%Co_2). 相似文献
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目的 建立龙血通络胶囊超高效液相色谱法(UPLC)特征图谱,并测定7,4′-二羟基黄酮、4,4′-二羟基-2,6-二甲氧基二氢查耳酮、龙血素A、龙血素B、紫檀芪5个成分的含量。方法 采用Agilent Infinity Lab Poroshell 120 EC-C18色谱柱(150 mm×3.0 mm,2.7 μm),以乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱,柱温为35 ℃,流速为0.5 mL·min–1,进样体积为2 μL,检测波长为280 nm。结果 建立了龙血通络胶囊UPLC特征图谱,标定了13批样品中的11个共有特征峰,相似度均大于0.95。5个成分在相应质量浓度范围内呈良好的线性关系(r>0.999 5),加样回收率为97.93%~107.33%,RSD均小于3.0%。结论 建立的UPLC操作简便、高效准确,可为龙血通络胶囊的质量控制提供参考。 相似文献
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目的比较分析5种甲基化年龄加速指标与生活方式和心血管代谢因素间的相关性。方法基于中国慢性病前瞻性研究中有基线外周血全基因组甲基化检测数据的研究对象980人, 计算Horvath时钟、Hannum时钟、DNAm PhenoAge、GrimAge和Li时钟5种甲基化年龄。根据甲基化年龄对实足年龄回归的残差值计算甲基化年龄加速。研究的生活方式因素包括吸烟、饮酒、饮食习惯、体力活动、经BMI和腰围联合定义的体型。心血管代谢因素包括血压、血糖和TC。利用一般线性模型分析生活方式和心血管代谢因素与各甲基化年龄加速指标的相关性[β值(95%CI)]。结果 GrimAge加速指标与吸烟、饮酒、体力活动水平及BMI存在关联。与不吸烟、不饮酒或BMI为18.5~23.9 kg/m2 者相比, 吸烟者(每天吸烟1~14、15~24、≥25支者对应的β值依次为0.71(95%CI:0.57~0.86)、0.88(95%CI:0.73~1.03)、0.99(95%CI:0.81~1.18)、重度饮酒者[每日纯乙醇量≥60 g:0.33(95%CI:0.11~0.55)]、BMI<18.5 kg/m2者[0... 相似文献
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目的:了解广州市海珠区儿童身高发育情况,分析其影响因素。方法:随机抽取海珠区904名3~12岁儿童进行体格测量,对家长进行问卷调查,获得儿童身高及其影响因素的相关数据。结果:3~5岁组男、女童,6~岁组男童,7~8岁组男、女童,9~岁组男童的身高均值均低于全国水平(P<0.05)。当前身高低于遗传身高的儿童占21.6%;与遗传身高一致占65%;高于遗传身高的占13.4%。母亲身高,体型是否肥胖,经常吃钙片、喝牛奶,慢性疾病史,每天运动时间为身高的影响因素(P<0.05)。结论:广州市海珠区儿童身高发育的整体水平较低,大部分儿童没有发挥身高的生长潜能,应重视环境因素对身高的影响,采取相应干预措施,促进儿童身高增长。 相似文献
47.
目的 探讨槐定碱对胰腺癌细胞增殖及自噬的影响,并分析其机制。方法 MTT法分析Sw1990细胞增殖, MDC染色法检测细胞自噬水平,western blot检测细胞自噬相关蛋白、PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达水平,运用自噬抑制剂(3 - MA)研究自噬对细胞增殖的影响;裸鼠成瘤实验检测体内胰腺癌细胞增殖情况,并分析瘤组织中LC3 II、p - mTOR蛋白水平。结果 槐定碱抑制胰腺癌Sw1990细胞的增长,促进自噬小泡的形成,上调LC3 II/ LC3 I、Beclin - 1水平,下调p - PI3K、p - AKT、p - mTOR水平(P<0.05);与槐定碱40 μmol/L组比较,槐定碱40 μmol/L + 3 - MA 5 μmol/L组细胞抑制率升高,LC3 II/ LC3 I降低,p - mTOR蛋白水平升高(P<0.05); 40 mg/kg槐定碱下调裸鼠瘤体体积、瘤体质量,上调LC3 II/ LC3 I水平,下调p - mTOR蛋白水平(P<0.05)。结论 槐定碱能抑制Sw1990细胞增殖,与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路影响自噬有关。 相似文献
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以瓜蒌、石斛、白芍、川芎、生地、元参、牛膝、五味子、菟丝子、枸杞子、车前子、覆盆子、益母草、泽兰、麦冬、当归组成的中药复方,其水提剂 11. 27,5. 64,2. 82 g/kg与雷公藤多着合用给大鼠ig,3个剂量均能不同程度地纠正雷公藤多苷所致的大鼠动情周期异常、子宫重量减轻及子宫肌层变薄,光镜下各试验组卵巢均无明显改变。 相似文献
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