皮肤瘢痕癌的临床治疗与修复(附16例报告)

目的探讨瘢痕癌的治疗方法和早期预防措施。方法通过对2012年1月~2017年8月,在我科就诊的16例瘢痕癌病例的治疗方法和修复效果进行回顾性分析,总结瘢痕癌治疗经验。结果 16例均实施手术治疗。全部为体力劳动者,长期暴露户外阳光照射下,在瘢痕基础上出现溃疡。病变位于头面部4例,四肢8例,躯干3例,臀部1例。病变面积最大为20cm×25cm,最小为7cm×8cm。15例为鳞状细胞癌(12例高分化鳞状细胞癌,3例为高-中分化鳞癌),1例基底细胞癌。14例中厚皮片植皮覆盖创面,2例通过局部皮瓣转移。随访(6~24)个月内未发现复发情况。结论皮肤瘢痕癌首选手术治疗,早发现、早治疗预后越好。瘢痕形成后避免瘢痕受长期刺激和反复损伤,减少阳光照射,发生溃疡后应及时就诊。     

Immune Cell SR对冻存PBMNC诱导培养CIK的效果研究

目的:探讨Immune Cell SR(血清替代物)在冻存复苏后PBMNC诱导CIK细胞培养过程中的效果,为免疫细胞的工业化生产提供一个新的策略。方法:提取健康志愿者外周血单个核细胞,经短期冻存后复苏并诱导培养CIK细胞,采用台盼蓝拒染法检测细胞活率,流式细胞术分析免疫细胞亚群,并用Calcein-AM/PI双染法检测其杀伤活性;结果:冻存后PBMNC中在对照组未能正常扩增,与新鲜组相比,2%SR组细胞扩增倍数较低,且差异显著(P0.05),5%SR组、10%AP组与新鲜组比较,差异均无统计学意义(P0.05);冻存前后CD3~+、CD3~+CD8~+、CD3~+ CD56~+细胞亚群比较均无明显差异(P0.05);细胞培养后,各组间CD3~+、CD3~+CD4~+、CD3~+CD8+、CD3~+CD56~+、CD3~-CD56~+亚群及体外杀伤活性比较均无明显差异(P0.05);结论:采用5%SR替代自体血浆可以很好地诱导冻存的PBMNC培养CIK细胞,且无外源性蛋白,安全可靠,为免疫细胞冻存技术在细胞治疗中的应用提供条件。     

冠状动脉影像学与心电图检查诊断老年冠心病价值的对比研究

目的：比较冠状动脉CT血管造影（CTA）与心电图对老年冠心病（CHD）患者的诊断价值。方法选择拟诊冠心病的老年住院患者148例,分别行冠状动脉CTA和心电图检查。其中有96例同时行冠状动脉造影检查。按冠状动脉造影结果分析冠状动脉CTA及心电图诊断冠心病的敏感度（阳性率）、特异度（阴性率）。结果冠状动脉CTA的敏感度为90.1%、特异度为88.1%、符合率为88.8%。心电图诊断CHD的敏感度为72.0%、特异度为57.1%、符合率为68.8%。冠状动脉造影狭窄程度≥90%的病变,心电图的敏感度最高,假阴性率最低;狭窄程度＜90%者与≥90%者比较,心电图敏感度较低,差异显著（均P＜0.01）。结论冠状动脉CTA发现有意义血管狭窄的敏感度、特异度较高,可作为老年冠心病诊断的有效方法;心电图对老年患者严重冠脉狭窄有一定的诊断价值。     

黏膜免疫壳聚糖-多胺转运蛋白D(PotD)DNA纳米微粒对小鼠鼻咽部肺炎链球菌定植的保护作用研究

目的 探讨以壳聚糖包裹的PotD DNA(Chitosan-potD)纳米微粒经鼻黏膜免疫小鼠对肺炎链球菌鼻咽部定植的保护作用.方法 将制备的Chitosan-potD微粒、裸pVAX1-potD重组质粒(裸potD)及pVAX1分别鼻腔免疫小鼠,收集黏膜和血清标本用以检测特异性抗体水平;分离并培养脾淋巴细胞,检测IL-17A、IL-4及IFN-γ的分泌水平;于免疫小鼠鼻腔进行肺炎链球菌攻击,通过菌落计数评估各免疫组对小鼠肺炎链球菌鼻咽部定植的保护作用.结果 Chilosan-potD纳米微粒在小鼠体内诱导产生的抗PotD特异性血清IgG、IgG1、IgG2a、黏膜IgA抗体水平及IL-17A、IL-4、IFN-γ水平与裸potD组及pVAX1组相比均明显升高,且差异具有统计学意义(P<0.05);菌落计数结果 显示,Chitosan-potD微粒组在鼻咽部定植的肺炎链球菌数量显著减少(P<0.05).结论 壳聚糖包裹PotD DNA微粒对肺炎链球菌鼻咽部定植具有免疫保护作用.     

黏膜免疫壳聚糖-多胺转运蛋白D(PotD)DNA纳米微粒对小鼠鼻咽部肺炎链球菌定植的保护作用研究

Objective To prepare the chitosan-potD nanoparticles and to evaluate its protective efficacy against pneumococcal nasopharyngeal colonization. Methods potD gene was amplificated from pneumococcal genome and was inserted into pVAX1 expression vectors to construct pVAX1-potD recombinant plasmid which was then transfected into 293T cell using LipofectAMINE 2000 to analyze transient potD gene expression in vitro by RT-PCR and Western blot. Chitosan-potD nanoparticles were freshly prepared by coacervation methods at each time and the characterizations of the nanoparticles were then evaluated. BALB/c mice were immunized with chitosan-potD, naked potD DNA or pVAX1 for 4 times at two-week intervals. Anti-PotD IgG, IgG1 and IgG2a levels in serum and IgA levels in nasal washes, bronchoalveolar lavage fluids (BALF) and middle ear lavages(MEL) were detected by indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). IL-17A, IL-4 and IFN-γ levels in splenocytes were determined by double sandwich ELISA. Mice were intrannsally challenged with Streptococcus pneumoniae ATCC6303, and Pneumococci were recovered from the nasopharyngeal niche at the fifth day after challenge. Results potD gene was successfully amplificated by PCR and the sequence was confimed to be consistent with that in the Genbank. The pVAX1-potD recombinant plasmid was successfully constructed and was expressed in eukaryocytes in vitro. The mean size and zeta potential of chitosan-potD nanoparticles was 430 nm and + 20.5 mv, respectively. Chitosan-potD nanoparticles were not digested by DNase Ⅰ , while naked potD DNA was completely digested. The levels of antibodies inculding IgG, IgG1, IgG2a, IgA and cytokines including IL-17A, IL-4 and IFN-γ were significantly higher in mice immunized with chitosan-potD nanoparticles than mice with naked potD or pVAX1 ( P <0.05) only. More importantly, much less Pneumococci were recovered from mice immunized with chitosan-potD nanoparticles than the other groups(P <0.05). Conclusion Chitosan-potD nanoparticles significantly enhanced the immunogenicity and protection efficacy of DNA vaccines by intranasal immunization and could be used as a potential mucosal vaccine to prevent pneumococcal infection.     

黄芪多糖缓解急性脑缺血再灌注损伤的氧化应激反应和免疫功能紊乱

目的:探索黄芪多糖(AP)对急性脑缺血再灌注损伤的氧化应激反应和免疫功能紊乱的影响。方法:采用大脑中动脉线栓法建立缺血再灌注损伤模型。苏木素伊红(HE)染色分析组织病理学变化。Tunel染色检测病变组织细胞凋亡。试剂盒检测组织中氧化应激相关指标的含量; ELISA检测血清中炎症因子的含量。蛋白印迹检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、BAX、炎性复合体隐热蛋白(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、cl-caspase-1的表达。结果:模型组与对照组相比,脑缺血再灌注大鼠脑组织出现严重病变,细胞凋亡明显增加,同时Bcl-2表达显著下调,BAX表达显著上调;组织中SOD的活力明显下降,GSH的浓度显著降低,MDA的浓度显著上升;血液中IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-18的含量显著上升;脑组织中NLRP3、ASC、cl-caspase-1的表达显著下调(P0. 01)。加药组与模型组相比较,急性脑缺血再灌注大鼠脑组织病变减弱,细胞凋亡明显减少,Bcl-2蛋白水平显著上调,BAX蛋白水平显著下调;组织中SOD的活力和GSH的浓度显著上升,MDA的浓度显著下降;血液中IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-18的含量显著降低;脑组织中NLRP3、ASC、cl-caspase-1的表达显著下调(P0. 01);且随着黄芪多糖加药浓度的增加,效果越明显。结论:黄芪多糖通过影响细胞自噬和免疫相关蛋白的水平,缓解急性脑缺血再灌注损伤的氧化应激反应和免疫功能紊乱。     

PRAME基因在成人急性白血病的表达及其与预后的相关性

本研究探讨黑色素瘤特异性抗原（preferentially expressed antigen of melanoma，PRAME）基因在成人急性白血病中的表达及其与预后的相关性。应用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测73例初发、3例复发成人急性白血病患者、7例特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者和8例正常人骨髓单个核细胞（BMMNC）以及K562和U937二个白血病细胞株PRAME mRNA的表达水平，分析其在成人急性白血病中的表达规律及其在判断疗效及预后、监测微小残留病（MRO）和在特异性免疫治疗中的意义。结果表明：PRAME基因在成人急性白血病中的表达率为36．8％（n=28），急性髓系白血病（AML）为42．9％（n=24），急性淋巴细胞白血病（ALL）为20％（n=4）。AML的表达率显著高于ALL（P〈0．01）。在K562和U937细胞都有PRAME基因表达，它们的表达水平分别为0．57和0．46。在15例对照（正常人、ITP患者）未检出PRAME基因表达。AML各亚型之间（除去病例数为0例的M7，M1及M6各1例）、ALL各亚型（L1，L2）之间PRAME mRNA的表达水平无显著性差异。患者的年龄、初诊或者复发时白细胞计数、血红蛋白、血小板计数、骨髓中原始细胞、幼稚细胞比例以及脾脏厚度对PRAME mRNA的表达无相关性。完全缓解组PRAME mRNA的表达水平与部分缓解组和死亡组有显著性差异，并且随着PRAME mRNA的表达水平升高，治疗效果越好。对1例病人动态监测发现，在复发之前PRAMEmRNA的表达会升高。结论：PRAME基因在成人急性白血病中存在高表达，其表达水平与预后密切相关，并可以作为监测MRD的标志基因。PRAME在白血病特异性免疫治疗中是潜在的靶抗原。     

牙龈卟啉单胞菌感染对大鼠血管平滑肌细胞细胞间黏附分子-1表达的影响

目的 观察牙龈卟啉单胞菌ATCC 33277感染对大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达的影响。方法 建立体外牙龈卟啉单胞菌感染大鼠VSMC模型,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测ICAM-1基因的表达。结果 牙龈卟啉单胞菌感染VSMC 8、16、24 h后,ICAM-1表达明显增多,与空白对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。感染16 h达高峰,感染8 h与感染16、24 h比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 牙龈卟啉单胞菌感染可引起VSMC ICAM-1高表达,这提示牙周致病菌可能参与血管壁的炎症反应,在动脉粥样硬化的发生、发展中有重要的意义。     

肿瘤抑制蛋白 FBW7在口腔鳞状细胞癌中表达的研究

目的检查肿瘤抑制蛋白FBW7在鳞状细胞癌（ OSCC）中的表达,初步探究FBW7表达与OS-CC细胞克隆形成能力的关系。方法收集19例OSCC患者的癌巢组织及对应癌旁组织,应用免疫组化染色与Real time RT-PCR技术检测FBW7在癌巢及对应癌旁组织中的表达情况。 Western blot 和Real time RT-PCR技术比较口腔鳞状细胞癌细胞系KV、CTST-1、CTST-2以及正常颊黏膜上皮细胞中FBW7蛋白和mRNA表达水平,分析FBW7表达与口腔鳞状细胞癌细胞系克隆形成能力的关系。结果免疫组化和Real time RT-PCR结果显示,FBW7蛋白及mRNA在对应癌旁组织中的表达水平明显高于癌巢组织（P＜0.05）,West-ern blot及Real time RT-PCR结果显示,FBW7蛋白和mRNA在口腔鳞癌细胞系中的表达水平明显低于正常口腔黏膜上皮细胞（ P＜0.05）。克隆形成实验结果表明, FBW7表达较高的舌癌细胞株的克隆形成数目较少,克隆形成能力较弱。结论 FBW7在口腔鳞状细胞癌组织和细胞系中表达显著降低,与口腔癌细胞系的克隆形成能力呈负相关。     

房树人测验用于评估青少年抑郁的应用研究

目的探索将绘画测验用于评估青少年抑郁的价值。方法运用整群抽样法对755名初中生进行儿童抑郁量表测验和房树人绘画测验,选取儿童抑郁量表得分阳性者148人为抑郁组,同等数量正常者的房树人图画为正常组,对两组绘画特征检测结果进行比较,并对儿童抑郁量表得分主要风险因素进行logistic回归分析。结果在抑郁组和正常组间共有31项房树人绘画特征有统计学差异(P<0.05或P<0.01),其中有20项特征差异特别显著(P均<0.01)。对儿童抑郁量表得分主要风险因素进行logistic回归分析显示,共有11项绘画特征纳入方程,分别为:房树人描绘简单、三者有距离、台阶和通道、房子小、颤抖型屋顶、树木左倾、树冠压扁、没有人、人小、人物位于底端、人物背面。模型检验结果显示,χ2=251.402,P=0.000,表明模型有效,阳性一致率为86.5%,阴性一致率为87.8%,总体正确率为87.2%。并且Nagelkerke R2=0.763,拟合度良好。其中"颤抖型屋顶"的OR值小于1,该特征不能作为解释抑郁的有效凭证。结论房树人绘画测验用于青少年抑郁的评估和鉴别具有很好的应用价值。