线粒体分裂融合基因在氧化应激诱导宫颈癌Hela细胞损伤中的作用

目的:利用维生素K3(VitaminK3,Vk3)复制子宫颈癌Hela细胞损伤模型,观察线粒体融合分裂基因的变化,探讨线粒体融合分裂基因在Vk3诱导Hela细胞凋亡过程中的作用。方法:MTT法检测各组Hela细胞存活率,Hoechst33258染色观察细胞凋亡,RT-PCR方法检测各组Hela细胞中线粒体融合基因Mfn1、Mfn2和Opa1及线粒体分裂基因Drp1、Fist1和MTP18mRNA表达。结果:Vk3能够降低Hela细胞存活率,并且Hoechst33258染色结果显示细胞呈现凋亡形态变化,凋亡率增加,Mfn1、Opa1、和MTP18mRNA表达量明显下降(P<0.05);而与Vk3单独作用组比较,Vk3+NAC联合作用组Hela细胞存活率增加(P<0.05),凋亡率降低,Mfn1、Opa1、和MTP18mRNA表达量明显增加(P<0.05)。结论:线粒体融合和分裂基因表达的降低都有可能参与了氧化应激诱导的细胞损伤作用。     

林蛙卵油灌胃对于雄激素预处理大鼠妇科内分泌的影响

目的研究初生大鼠注射雄激素后,在成年期给予林蛙卵油灌胃,对于妇科内分泌激素水平的影响。方法乙醇萃取法提取林蛙卵精油,初生期给予雄激素制造动物模型,分为四组:高剂量组、中剂量组、低剂量组和模型组,同时设置正常对照。成年后给予治疗组林蛙卵油灌胃后处死大鼠,子宫和卵巢称重,血清放免法检测各组雌二醇、FSH、孕酮水平。结果模型组子宫及卵巢重量明显低于正常组(P0.01),而林蛙卵油各剂量均可明显增加子宫及卵巢的重量(P0.001),尤其以林蛙卵油高剂量组增加的最为明显。模型组卵巢体重之比明显低于正常组(P0.05),而林蛙卵油各剂量均可明显增加卵巢体重之比(P0.001),尤其以林蛙卵油高剂量组增加的最为明显。而林蛙卵油各剂量组对子宫体重之比没有明显影响。模型组大鼠血清中FSH、雌二醇、孕酮的含量与正常对照组相比明显降低(P0.05),而林蛙卵油各剂量组均能明显提高大鼠体内FSH、雌二醇的含量,其中林蛙卵油中剂量对体内FSH含量增加最明显,而林蛙卵油大剂量对体内雌二醇含量增加最为明显,林蛙卵油各剂量组对体内孕酮含量的改变不明显。结论初生期雄激素注射通过影响卵巢发育对于成年内分泌系统造成影响,林蛙卵油可以发挥保护卵巢的作用,进而调节妇科内分泌功能。     

Rh_2诱导PC-3M细胞凋亡及对新基因GRIM-19表达的影响

目的:研究人参单体皂甙Rh2对PC-3M细胞株(激素非依赖性人前列腺癌细胞)的致凋亡作用及对新基因GRIM-19表达的影响。方法:采用吖啶橙染色观察其对PC-3M胞的促凋亡作用;RT-PCR和Westernblot方法分别检测用药后PC-3M细胞GRIM-19mRNA和蛋白的表达。结果:不同剂量的Rh2作用于PC-3M细胞24h吖啶橙染色结果呈阳性;RT-PCR结果与Westernblot结果相一致,Rh2随浓度的增加GRIM-19mRNA和蛋白表达逐渐增强,Rh2中低剂量组与对照组比较差异显著(P<0.05),Rh2高剂量组GRIM-19表达与对照组比较差异十分显著(P<0.01)。结论:Rh2诱导PC-3M细胞凋亡与上调GRIM-19基因和蛋白表达有关,其表达强度呈剂量依赖性。     

参麦注射液对“双击”大鼠肝脏IkBmRNA表达的影响

目的探讨参麦注射液的抗休克作用及其机制.方法大鼠随机分为实验对照(Contro1)组、双击(HS+LPS)组、参麦注射液小剂量(HS+LPS+SML)组和参麦注射液大剂量(HS+LPS+SMH)组.大鼠动脉放血至平均动脉压40mmHg,维持10min.然后舌下静脉注射内毒素(1.5mg·kg-1),4h后检测血清NOS活性、NO含量和肝脏IκBmRNA的表达.结果HS+LPS+SML组和HS+LPS+SMH组血清NO含量、NOS活性明显低于HS+LPS组(P＜0.05),而IκBmRNA表达明显高于HS+LPS组(P＜0.05).结论参麦注射液通过上调IκBmRNA的表达,降低NO含量和NOS活性,对组织细胞具有保护作用.     

地塞米松予治疗对失血性休克犬过氧化脂质、SOD影响及对肺的保护作用

杂种犬10只,随机分为失血性休克组(HS)和失血性休克地塞米松予治疗组(HSD)。放血至血压降至并维持于40—50mmHg。结果表明,ASD组血清过氧化脂质含量逐渐降低,失血后4.5小时测定值显著地低于HS组(P<0.05);SOD活力,HSD组逐渐增高,失血后2小时HSD组酶活力高于HS组(P<0.05)。HSD组SOD活力与血清过氧化脂质含量呈明显负相关(r=-0.795,P<0.01),HS组无相关。肺过氧化脂质含量HSD组低于HS组(P<0.05)。PaO_2,HSD组高于HS组(P<0.05)。HS组失血后3小时呈浅而快呼吸,光镜观察发现弥漫性肺不张,HSD组显著地较HS组轻。     

“失血加LPS”大鼠肺脏IκBα和TLR4基因表达及参麦的肺脏保护作用

目的： 探讨参麦注射液的抗休克效果及其作用机制。 方法： 大鼠随机分为单纯失血性休克（HS）组、失血加脂多糖（HS+LPS）组、地塞米松（HS+LPS+Dex）组和参麦注射液（HS+LPS+SM）组。HS+LPS组大鼠模型复制：首先，大鼠放血至MAP 40 mmHg,维持10 min（失血性休克），然后舌下静脉注射LPS（1.5 mg/kg）。4h后留取肺脏组织,RT-PCR法测定IκBα和TLR4 mRNA表达、ELISA法测TNF-α含量，并进行肺脏组织电镜观察。 结果： HS+LPS+SM组TLR4 mRNA表达明显低于HS+LPS组（P<0.05）；HS+LPS+SM组IκBα mRNA表达明显高于HS+LPS组（P<0.05）；HS+LPS+SM组肺脏组织匀浆TNF-α含量明显低于HS+LPS组（P<0.05）；HS+LPS+SM组肺组织病理损伤显著轻于HS+LPS组。 结论： 参麦注射液能够下调肺脏组织中TLR4 mRNA表达，同时上调IκBα的表达，进而抑制促炎介质TNF-α释放，提示参麦注射液可能通过调节NF-κB信号转导途径抑制炎症反应而对机体细胞起保护作用。     

人参花蕾皂甙对失血性休克犬心、肝、肺组织SOD及五种金属元素含量的影响

杂种犬１６只，按体重随机分为失血性休克（ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃｓｈｏｃｋ，ＨＳ）组（８只），失血性休克（ＨＳ）人参花蕾皂甙（ｇｉｎｓｅｎｇｆｌｏｗｅｒｂｕｄｓａｐｏｎｉｎ）预治疗（ＨＳＧ）组（８只）。通过调整血容量使动脉血压维持于５．３～６．７ｋＰａ５ｈ，放血后５ｈ处死动物取心肌、肝、肺组织测微量元素铜（Ｃｕ）、锌（Ｚｎ）铁（Ｆｅ）及宏量元素钙（Ｃａ）、镁（Ｍｇ）及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的含量。结果显示：ＨＳＧ与ＨＳ组比较肺组织Ｚｎ含量明显减少（Ｐ＜０．０１），心肌、肺和肝组织Ｃａ含量显著减少（Ｐ＜０．０５），而心肌、肺和肝组织ＳＯＤ含量明显增多（Ｐ＜０．００１，Ｐ＜０．００１，Ｐ＜０．０１）。作者对这些结果的意义进行了探讨。     

线粒体氯通道蛋白在过氧化氢诱导C6细胞损伤中的作用

目的：利用过氧化氢(H₂O₂)复制神经胶质瘤C6细胞损伤模型，探讨线粒体氯通道蛋白/CLIC4的变化。方法:应用MTT法检测H₂O₂作用的C6细胞生存率；紫外分光光度法检测培养液上清LDH释放率；RT-PCR检测CLIC4的mRNA表达；Western blotting方法检测CLIC4的蛋白水平。结果:500 μmol/L H₂O₂作用C6细胞存活率与对照组相比未见明显差异；LDH释放率高于对照组；CLIC4蛋白水平明显强于对照组。而1000 μmol/L H2O2作用的C6细胞存活率明显低于对照组；LDH释放率明显高于对照组；CLIC4蛋白水平强于对照组。结论:CLIC4可能参与H₂O₂诱导神经胶质瘤细胞损伤的机制。     

人参二醇组皂苷（PDS）抑制NOS和p38减轻LPS休克脑损伤

目的：探讨人参二醇组皂苷（PDS）对LPS诱导休克脑的保护机制。方法：将大鼠随机分为对照组、LPS组、LPS＋地塞米松组及LPS＋人参二醇皂苷组。大鼠静脉注射LPS（4 mg/kg）4 h后，测定大脑皮质中NOS的活性、NO的含量及磷酸化p38 蛋白的表达。结果：LPS组脑皮质中NOS活性、NO含量及p38的蛋白表达水平明显高于control组，而LPS+Dex组和LPS+PDS组脑皮质中NOS活性、NO含量及p38的蛋白表达水平明显低于LPS组。结论：PDS减轻LPS脑损伤与降低脑皮质中NOS活性、NO含量有关，可能涉及p38MAPKs信号转导通路。     

ATRA联合IFN-α对PC-3细胞株的生长抑制作用以及对GRIM-19和STAT 3基因表达的影响

目的:研究ATRA联合IFN-α对人激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞株的生长抑制作用及对凋亡相关基因GRIM-19和原癌基因STAT3表达的影响。方法:采用MTT比色法筛选ATRA和IFN-α联合应用的最佳时间和剂量;相差显微镜及吖啶橙染色观察其对PC-3细胞的促凋亡作用;DNA ladder提取试剂盒检测用药后细胞凋亡;RT-PCR方法观察用药后PC-3细胞GRIM-19 mRNA的表达;Western blot分别检测GRIM-19、STAT3的蛋白表达。结果:ATRA 1μmol/L联合IFN-α1 000 U/mL作用72 h对PC-3细胞有显著的增殖抑制作用,与溶媒对照组、ATRA或IFN-α单独应用组比较,差异显著(P<0.05)。形态学观察两药合用后PC-3细胞呈现典型的凋亡征象。DNA电泳图谱在ATRA和IFN-α两药合用组可见较AT-RA单独应用组更为明显的DNA ladder,IFN-α单独用药组及对照组没有出现DNA降解。RT-PCR结果表明,ATRA和IFN-α两药合用GRIM-19 mRNA表达增强,与对照组和ATRA、IFN-α组比较,差异显著(P<0.05)。Western blot结果显示,两药合用组GRIM-19蛋白表达增强,STAT3蛋白表达减弱,与对照组、ATRA、IFN-α组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论:ATRA和IFN-α联合应用可抑制PC-3细胞的增殖并诱导凋亡,其机制之一可能是通过上调GRIM-19基因表达,进而下调原癌基因STAT3表达实现的。