硼替佐米对小鼠急性移植物抗宿主病的抑制作用

目的 探讨硼替佐米对小鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)的抑制作用及其可能机制.方法 以C57BL/6小鼠为供鼠,获取骨髓细胞及脾细胞.以Balb/c小鼠为受鼠,共分为5组:空白对照组(n=17)小鼠不予任何处理;单纯照射组(n=17)小鼠仅接受7.0 Gy X射线全身照射(TBI);药物对照组(n=17)小鼠也接受TBI,并且由尾静脉注射硼替佐米;aGVHD组(n=8)小鼠TBI后注射供鼠骨髓细胞及脾细胞;实验组(n=8)小鼠TBI后输注供鼠骨髓细胞及脾细胞,并予以硼替佐米.观察各组小鼠aGVHD的发生情况、存活时间及嵌合状态,蛋白印迹法测定空白对照组、单纯照射组和药物对照组小鼠肝脏及小肠组织细胞核中核因子κB(NF-κB)p65的表达.结果 aGVHD组和实验组的临床aGVHD评分分别为7.37±0.32和5.85±0.40,实验组明显低于aGVHD组(P＜0.05).aGVHD组受鼠肝脏、小肠及皮肤组织为Thomas GVHD病理分级Ⅲ～Ⅳ级改变.实验组受鼠肝脏、小肠及皮肤组织为Ⅰ～Ⅲ级GVHD改变,较aGVHD组有所减轻.实验组存活时间长于aGVHD组(P＜0.05).aGVHD组和实验组小鼠移植后12 d时外周血细胞中H-2Kb分子阳性细胞的百分率均＞90%.药物对照组肝脏及小肠组织细胞核内NF-κB p65表达均高于单纯照射组(P＜0.05).结论 硼替佐米可能通过在一定程度上抑制照射预处理损伤所致肝脏及小肠组织中NF-κB的激活起到减轻aGVHD的作用.

Abstract：

Objective To observe the effect of bortezomib on acute graft-versus-host disease (aGVHD) in an aGVHD model of mice and investigate the related mechanism. Methods Male C57BL/6( H-2Kb)mice were used as donors and female Balb/c (H-2Kd) mice used as recipients. Balb/c mice received total body irradiation (TBI) by 7.0 Gy X-radiation, and randomly divided into five groups. normal (group A), TBI (group B), TBI + bortezomib (group C), TBI + bone marrow cells (BMC) + spleen cells (SC) (group D) and TBI + bortezomib + BMC + SC (group E). The physical signs and the pathological damage of aGVHD, mean survival time, and chimerism were observed in recipients. The NF-κB p65 levels in nuclei of the liver and small intestine tissues of groups A,B and C were analyzed by Western blot. Results ( 1 ) The clinical aGVHD score in group D was (7.37±0. 32), significantly higher than in group E (5.85 ± 0.40) (P＜0. 05). Histopathology of the gut, liver and skin illuminated that the Ⅲ-Ⅳ degree GVHD occurred in group D. The occurrence of aGVHD in group E was later than in group D. The symptoms and the pathological damage of aGVHD in group E were milder than in group D. The average survival time in group E was significantly longer than that in group D (P＜0.05). The percentage of donor-derived cells in recipient mice was above 90% at day 12 after transplantation; (2) NF-κB p65 levels in nuclei of the liver and small intestine tissues in group B was significantly higher than in group C on the day 1,3 and 5 (P＜0. 05). Conclusion Bortezomib can inhibit the activation and expression of NF-κB,which may be the underlying mechanism for it to relieve aGVHD.     

综合康复护理对神经源性膀胱功能重建的临床价值

目的探讨综合康复护理对神经源性膀胱功能重建的临床价值。方法选取本院2011年3月～2012年5月收治的神经源性膀胱功能重建患者83例,随机分为两组,41例患者采用常规护理为对照组,42例患者采用综合康复护理为观察组。比较两组患者护理干预后的膀胱容量、残余尿量、并发症情况。结果拔管时,观察组膀胱容量明显大于对照组,残余尿量明显小于对照组。间歇性导尿1个月后,观察组膀胱容量明显大于对照组,残余尿量明显小于对照组,两组的膀胱容量均明显升高,残余尿量均明显减小。观察组并发症发生率（11．9％）明显低于对照组（34．1％）,两组间比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论综合康复护理可以有效改善神经源性膀胱功能重建患者的临床指征,增加膀胱容量,减少残余尿量,并发症的发生率较低,在改善患者生存质量方面具有显著的临床价值。     

硼替佐米对小鼠急性移植物抗宿主病作用及其机制研究

目的 探讨硼替佐米(Bortezomib)对小鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)的预防作用及其机制.方法 建立小鼠aGVHD动物模型,将小鼠随机分3组,A:移植对照组;B:移植+早期输注硼替佐米组;C:移植+延期输注硼替佐米组.比较各组受鼠aGVHD临床及病理改变、生存率,流式细胞术检测移植后供鼠来源细胞(H-2b+)率.体外建立单向混合淋巴细胞培养(MLC)体系,植物血凝素刺激后,分别用0、2、4、8 nmol/L的硼替佐米作用于反应体系,在不同的时间点收集细胞,采用CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,ELISA法检测培养上清IL-2、IFN-γ、TNF-α含量.结果 移植对照组小鼠出现典型的aGVHD症状,3周内死于aGVHD,平均存活时间为16.1 d,移植加早期输注硼替佐米组小鼠aGVHD症状明显减轻,平均生存时间较移植对照组显著延长,60 d时生存率为70%,高于其他组(P<0.05),60 d时H-2b+细胞的百分率为(98.1±1.1)%.移植加延期输注硼替佐米组小鼠aGVHD症状明显较移植对照组加重,平均存活时间较A组缩短.硼替佐米对MLC体系细胞活性的抑制作用表现为剂量依赖关系,8 nmol/L硼替佐米作用24 h后细胞活性抑制率为(41.4±6.0)%;硼替佐米作用于细胞后12、24、36 h的凋亡率逐渐增加,8 nmol/L硼替佐米作用36 h后细胞凋亡率为(62.8±7.0)%;硼替佐米作用24 h后上清液中IL-2、IFN-γ、TNF-α浓度减少.结论 移植后早期输注硼替佐米可显著减轻小鼠异基因移植后的aGVHD、提高生存率,同时不影响骨髓植入;而移植后延期给予硼替佐米则加重aGVHD,导致受鼠死亡率增加.其机制可能是通过抑制淋巴细胞活性,诱导淋巴细胞凋亡,抑制同种反应性细胞分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α.     

尿液和痰标本中分离的粪肠球菌和屎肠球菌耐药性分析

目的了解近4年来粪肠球菌和屎肠球菌在尿液和痰标本中的分布情况及其对常用抗茵药物的耐药性,指导临床合理用药。方法采用Vitek32全自动细菌鉴定系统进行菌株鉴定,药敏试验采用检测最小抑菌浓度法,抗茵药物组合选用GPS-107。结果共检出粪肠球菌77株、屎肠球菌78株。临床标本分离肠球菌依次为痰液62．2％、尿液37．8％。药敏结果显示二者对高浓度的庆大霉素、链霉素、左旋氧氟沙星、环丙沙星和青霉素G的耐药率均较高,分别为88．4％、81．9％、70．9％、70．9％和63．2％;对呋喃妥因、四环素和氨苄西林耐药率较低,分别为40．0％、30．3％和21．8％;对万古霉素耐药率最低。检出2例耐万古霉素的屎肠球菌。结论肠球菌在,临床标本中的分离情况及耐药性明显不同,在治疗其引起的感染时应按药敏试验结果用药。临床已检出耐万古霉素的肠球菌,应引起重视。     

bcr-abl融合基因阳性原发性血小板增多症一例报道并文献复习

 目的 提高对bcr-abl融合基因阳性原发性血小板增多症（essential thrombocythemia,ET）的认识。方法 报告1例bcr-abl融合基因阳性ET（bcr-abl+ET）并进行文献复习。结果 bcr-abl+ ET具有女性多见、脾脏不大或仅轻度大、外周血白细胞大多＜40 ×109／L、嗜碱粒细胞常不增多,幼稚粒细胞少见、骨髓有核细胞增生以粒系和巨核系两系或单系巨核系增生为主、中性粒细胞碱性磷酸酶积分正常或增高等特点。结论 bcr-abl+ ET有别于经典的慢性粒细胞白血病及ET,可能是ET的一种新的变异型。     

急性白血病缓解期骨髓造血干/祖细胞体外增殖特征的研究

目的：探讨急性白血病缓解期骨髓造血干／祖细胞增殖特性及对其对不同细胞因子的反应。方法：分离骨髓的单个核细胞（MNC），在含有重组人FLT3配基（rhFL)、干细胞因子（rhSCF)、白细胞介素-3(rhIL-3)、粒－巨噬细胞刺激因子（rhGM-CSF)及促红细胞生成素（EPO）的不同组合下，选用甲基纤维素法半固体培养体系培养7－14d，观察其CFU－GM及BFU－E的集落产率。结果：急性白血病缓期患者骨髓造血干细胞对各种细胞因子增殖反应有所不同（以SCF、FL的作用尤为显著）。与对照组比较，差异有显著性（P＜0．05）。结论：急性白血病缓解期患者的造血干／祖细胞活性比对照组减低。     

HIV-1慢病毒载体的构建及结构改造

前很多基因治疗实验中选择造血干细胞 (HSC)等非分裂期细胞作为靶细胞。常用病毒性载体为逆转录病毒和腺病毒载体系统[1,2 ] 。逆转录病毒只能转导分裂期细胞 ,腺病毒载体在体内不能实现目的基因稳定的长期表达 ,且反复应用容易引起免疫反应。来源于人类免疫缺陷病毒 1(HIV 1)的慢病毒载体由于可以感染非分裂期细胞、容纳外源性目的基因片段大、免疫反应小等特点越来越受到人们的重视[3 ,4] 。我们成功构建了慢病毒载体的三质粒包装系统并重点对其中的转移质粒进行了改造 ,筛选出转导效率较高的慢病毒载体。材料和方法1　主要试剂　各种…     

报废血浆制备标准抗血清和室内质控物在血站中的应用

目前，随着无偿献血事业的不断深入发展，献血模式由计划无偿完全转变为自愿无偿，街头无偿献血已成为临床用血的主要来源，为满足和方便街头献血者的需要，采血模式也从以前初检合格后采血转变为快速初筛（包括ABO血型正定型、HBsAg金标法检测）合格后采血，致使血液报废情况比例呈上升趋势。我们对扬州市中心血站2004年1—12月44132例无偿献血血液报废情况进行回顾性分析，并对部分报废血浆进行标准抗血清及室内质控物自制并在实际中应用，取得了满意的效果，现报告如下。     

造血干细胞移植后巨细胞病毒感染临床分析

目的观察各种类型的造血干细胞移植（HSCT）后巨细胞病毒（CMV）感染的发生情况及疗效。方法选择我院59例异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）和自体造血干细胞移植（auto—HSCT）患者移植后不同时期血和尿标本，检测CMV—pp65抗原及（或）CMV—DNA（荧光定量PCR法）进行动态观察分析。CMV感染的预防采用更昔洛书（DHPC）5～10mg／kg，1次／12h，分别在移植前第8天至移植当天及当CMV血清学检测阳性或发生CMV病时应用2-4周，并可同时应用大剂量丙种球蛋白。结果CMV感染在allo—HSCT后好发，非亲缘性移植CMV感染率高，9例allo—HSCT出现CMV感染发生在移植后＋42-＋68天，其中5例均存在不同程度的移植物抗宿主病（GVHD），尤其是Ⅱ～Ⅳ度急性GVHD，2例进展为巨细胞间质性肺炎（CMV-1P）；多为既往CMV感染被激活，对CMV—DNA阳性而无症状者进行预防治疗可使CMV—DNA阴转，可降低CMV病的发生。结论CMV病是allo—HSCT的常见并发症及主要致死原因之一；因此积极防治GVHD的发生及发展、定期监测CMV血清学阳性患者、早期干预性治疗可以提高移植的成功率。