叶酸修饰麦角甾酮脂质体的制备及体外评价和药动学研究

 目的 研究叶酸修饰的麦角甾-4, 6, 8, 22-四烯-3-酮脂质体的制备工艺,考察其体外释放行为、对肿瘤细胞的毒性和靶向性,并进行体内药动学研究。方法 采用薄膜分散-超声法制备了叶酸偶联麦角甾酮脂质体;用透射电镜、粒径分析仪和高效液相色谱法(HPLC)对其进行表征;以动态透析法测定其体外释药特性及血浆对释放行为的影响;四甲基偶氮唑盐（MTT）法考察叶酸偶联麦角甾酮脂质体对宫颈癌细胞（HeLa）的体外毒性作用,并结合肿瘤细胞摄取实验考察其经叶酸受体介导的靶向性;HPLC测定灌胃后大鼠血药浓度,采用DAS2.0软件计算药动学参数,并进行统计分析。结果 叶酸偶联麦角甾酮脂质体形态呈球形,粒径分布窄,均匀圆整,平均粒径为112 nm,药物包封率达73%;体外释放介质中,药物释放曲线符合Higuchi方程,具有长效缓释性能;在与HeLa的相互作用中,麦角甾-4, 6, 8, 22-四烯-3-酮、麦角甾酮脂质体、叶酸偶联麦角甾酮脂质体的IC₅₀值分别为10,14,5 μg·mL^-1;脂质体剂型显著增加了麦角甾-4, 6, 8, 22-四烯-3-酮的AUC,延长了其在血液循环中的时间。结论 叶酸作为导向分子提高了叶酸偶联麦角甾酮脂质体的靶向性,使叶酸偶联麦角甾酮脂质体主动靶向作用于宫颈癌细胞（HeLa）,降低了给药浓度,制成叶酸偶联麦角甾酮脂质体显著提高了麦角甾-4, 6, 8, 22-四烯-3-酮的生物利用度,可望用于肿瘤的靶向治疗。     

NF-κBp65对食管鳞癌细胞上皮间质转化的影响*

目的:探讨NF-κ Bp65对食管鳞癌细胞EC9706上皮间质转化的影响。方法:NF-κ Bp65反义寡核苷酸（NF-κBp65-ASODN ）转染食管鳞癌细胞EC9706,采用RT-PCR、免疫细胞化学及流式细胞术检测NF-κ Bp65-ASODN 转染前后EC9706细胞中NF-κ Bp65、上皮性标志物E-cadherin 及间质性标志物Vimentin mRNA 及蛋白表达的变化,观察转染前后细胞形态学的改变,细胞划痕实验检测转染前后细胞运动能力的变化。结果:转染NF-κ Bp65-ASODN 的EC9706细胞,其NF-κ Bp65mRNA（0.14±0.06）及蛋白（免疫细胞化学:11.33± 1.40% ,流式细胞术:11.78%）的表达低于转染前（mRNA :0.45± 0.05;蛋白:免疫细胞化学:17.17± 1.66% ,流式细胞术:15.76%）（P<0.05）,上皮性标志物E-cadherin mRNA（0.36± 0.08）及蛋白（免疫细胞化学:17.58± 1.86% ,流式细胞术:14.98%）的表达高于转染前（mRNA :0.22± 0.06;蛋白:免疫细胞化学:14.42± 1.63% ,流式细胞术:12.22%）（P<0.05）,间质性标志物Vimentin mRNA（0.75± 0.07）及蛋白（免疫细胞化学:16.00± 1.41% ,流式细胞术:12.90%）的表达低于转染前（mRNA :0.89± 0.09;蛋白:免疫细胞化学:19.50± 0.89% ,流式细胞术:17.76%）（P<0.05）。 转染NF-κ Bp65-ASODN 后,EC9706细胞形态发生改变,细胞迁移距离（0.45± 0.08）较转染前（0.81± 0.11）明显缩短（P<0.05）。 结论:NF-κ Bp65可能参与食管鳞状细胞癌的上皮转化。NF-κ Bp65-ASODN 转染可抑制食管鳞癌细胞上皮间质转化,上皮性标志物E-Cadherin 表达上调、间质性标志物Vimentin 表达下调,且细胞形态发生改变、细胞运动能力降低。      

siRNA阻断Stat3信号促进食管鳞癌细胞株凋亡

目的：研究RNA干扰技术沉默Stat3基因对食管鳞癌细胞（EC9706）中持续性激活Stat3信号的阻断作用及对细胞凋亡的影响。方法：将化学合成的100nM的Stat3 siRNA转染EC9706细胞,RT-PCR检测转染前后Stat3 mRNA的表达,Western blot检测转染前后细胞中Bcl-2、Stat3及磷酸化Stat3（p-Stat3）蛋白的表达,凝胶电泳迁移率（EMSA）检测转染前后活化Stat3蛋白的DNA结合活性,流式细胞术检测转染前后细胞凋亡的改变情况。结果：Stat3 siRNA转染细胞48h后细胞形态发生明显的改变,RT-PCR及Western blot结果显示Stat3 siRNA干扰后Stat3mRNA及蛋白表达均受到明显抑制, Stat3信号的激活被阻断,活化Stat3蛋白的核结合活性显著下降。转染后细胞中Bcl-2蛋白的表达明显减少。流式细胞术结果证明Stat3 siRNA可明显促进细胞凋亡。结论：Stat3 siRNA能够特异地阻断食管鳞癌细胞中Stat3 信号的持续性激活并促进肿瘤细胞凋亡。     

距骨骨折的手术治疗及疗效分析

目的 探讨距骨骨折手术治疗的方法及疗效.方法 本院手术治疗距骨骨折53例,其中45例获得随访.其中男39例,女6例;年龄7 ～53(38.71±10.16)岁.克氏针固定5例,空心螺钉固定23例,可吸收螺钉固定17例.距骨头骨折6例,距骨颈骨折28例,距骨体骨折11例.结果 45例患者随访时间12 ～51(21.65 ±8.37)个月,AOFAS评分56～99(85.69±17.34)分.优14例,良20例,可8例,差3例,优良率为75.6％.克氏针固定组优良率(40.0％)低于空心螺钉(78.3％)、可吸收螺钉固定组(82.4％),距骨头组优良率(100％)高于距骨颈(71.4％)、距骨体组(72.7％),但差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 距骨骨折选择合理的手术入路,认真评估软组织损伤情况,选择恰当的内固定方法,可以有效提高患者愈后功能,降低距骨术后坏死率.     

血清FS及CA125用于卵巢癌诊断的比较研究

目的比较卵泡抑素(Follistatin,FS)及CA125在卵巢癌患者血清中的水平变化及其临床意义。方法分别采用ELISA法和电化学发光法检测卵巢癌、卵巢囊肿患者及健康对照者血清FS及CA125水平,ROC曲线分析二者用于卵巢癌诊断的准确性。结果卵巢癌患者血清FS水平明显高于健康对照组,统计学比较差异显著,P<0.01。以健康对照组血清FS及CA125水平的95%可信区间判断卵巢癌患者血清FS水平,显示血清FS用于卵巢癌诊断时灵敏度为53.3%,特异性为97%;血清CA125的诊断灵敏度为77.8%,特异性为84%;血清FS用于卵巢癌诊断时ROC曲线下面积为0.902,略大于CA125的ROC曲线下面积(0.886)。结论卵巢癌患者血清FS水平升高,与血清CA125水平具有相关性,其用于卵巢癌诊断时准确性与CA125相近,特异性优于CA125。FS是一个很有应用前景的卵巢癌血清诊断标记物,与CA125联合应用有助于降低卵巢癌的误诊率。     

A／E大肠杆菌LEE致病鸟

致病岛 (ｐａｔｈｏｇｅｎｅｃｉｔｙｉｓｌａｎｄ)是细菌染色体上编码毒力相关基因的特殊区域 ,是在细菌学领域对致病性细菌致病机理的研究中出现的一个新概念 ,是某些致病性细菌在进化过程中适应环境的变化而获得的毒力基因。人们发现在许多病原性细菌中都存在着致病岛 ,致病岛通常具有以下特点〔1〕:(1)致病岛是一组编码细菌毒力因子的基因簇 ,是染色体上一个分子量较大的片段 ;(2 )致病岛两端通常具有重复序列 (ＲＳ)或插入元件 (ＩＳ) ;(3)Ｇ Ｃ含量与宿主菌染色体Ｇ Ｃ含量有明显差异 ;(4 )不稳定 ,含有潜在的可移动元件 ;(5 )通常…     

四川资阳地区猪链球菌2型检测及其特性比较研究

目的对从四川省资阳及附近猪链球菌2型感染疫区采集的病料进行病原菌分离和特性比较研究。方法首先利用病原菌分离技术、多重定性PCR检测和荧光定量PCR检测技术进行病原菌的分离和鉴定;然后选取5株主要疫点代表菌株与1株国外参考菌株进行细菌药敏试验和实验动物腹腔接种感染试验;此外还对猪链球菌2型分离株基因组中的溶原性噬菌体进行了初步研究。结果(1)从采集的病料中分离到11株猪链球菌2型菌,都具有胞外因子(EF)和溶菌酶释放蛋白(MRP)两个特征性毒力因子;(2)6株试验菌株对氨苄青霉素、先锋必素、头胞克肟、乙酰螺旋霉素、万古霉素、复方新诺明和利福平等7种抗生素高度敏感。与国外参考菌株相比,资阳分离株具有链霉素抗性;(3)试验菌株对BALB/c鼠均具有一定的毒力,但毒力程度上有差异。资阳分离株449-1和国外参考株6#对鼠具有相同的强致死性(3/3死亡),资阳458分离株致死性较弱(0/3死亡),其它菌株具有中等强度的致死性。利用449-1、458和6#分离株进行家兔感染实验,各菌株均可引起家兔感染发病,死亡率分别是1/2、2/2和2/2;(4)国内首次获得了猪链球菌2型流行菌株匿藏着溶原性噬菌体的证据,该噬菌体与细菌毒力和适应性的关系有待深入研究。结论通过对资阳及附近地区猪链球菌2型分离株与国外分离株特性的比较研究,明确了流行菌株间在毒力和药物敏感性上存在着差异,细菌毒力差异表现为对动物种属的嗜性,并筛选出了猪链球菌病防治的可选择性药物。为进一步研究猪链球菌2型菌株的致病机理以及猪链球菌病的防治奠定了基础。     

神经导航下SEEG在儿童难治性癫痫术前评估中的应用

目的研究神经导航下颅内深部电极置入方法的安全性及可行性。方法 21例儿童难治性癫痫患者,年龄3岁至16岁。在美敦力S7影像处理系统上进行患者脑部影像及脑表面血管的三维重建,根据术前计划,设计合适的电极靶点、入点,利用美敦力S7神经导航系统置入立体定向电极。结果 2016年3月至2017年5月应用上述系统及方法完成21例立体定向电极置入手术,共置入电极139根,平均6.6根。最小年龄3岁,最低体重13.3KG,置入区域覆盖全脑叶,颅内电极最长保留时间21天,平均单根电极置入操作时间10分钟。21例患者无一例出现出血感染等并发症,其中1例行二次手术补置电极1根,亦无并发症出现。术后癫痫Engle评分为Ⅰ级20例,Ⅱ级1例。结论应用美敦力S7神经导航系统可以在儿童难治性癫痫患者中开展立体定向脑电图技术,其方法安全可靠。     

髋周骨内脂肪瘤的影像学表现及诊断价值

目的探讨髋周骨内脂肪瘤的影像学表现及其诊断价值。资料与方法结合文献复习,回顾性阅读病理证实的5例髋周骨内脂肪瘤的X线平片和CT片,分析其征象。结果5例均为单发病灶,其中1个病灶位于股骨颈,4个位于髋臼。X线平片表现为边界清或不清的不规则形透光区,可伴硬化缘。CT上病灶为类椭圆形或不规则形的脂肪密度区,CT值为-60～-120HU,最大径为1．0～3．5cm。病灶边缘不规整,伴有厚薄不等的硬化边,其中3个病灶中心和边缘可见小结节状钙化。结论髋周骨内脂肪瘤和其他部位骨内脂肪瘤的影像学表现相似,CT能对其作出正确诊断,可避免不必要的穿刺活检或MRI检查。     

丙泊酚对心肌细胞Bcl-2蛋白表达的影响

目的观察丙泊酚对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,从而从另外一个角度说明丙泊酚对心肌的保护作用。方法培养的心肌细胞随机分为五组:阿霉素(ADR)损伤组(A组),25μmol/L丙泊酚(PR) ADR组(B组),50μmol/L PR ADR组(C组),100μmol/L PR ADR组(D组)和正常对照组(E组),每组10个样本。通过电镜观察以及免疫组化方法检测Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果Bcl-2蛋白表达水平A、B、C、D组高于E组(P<0.05或P<0.01);B、C、D组亦明显高于A组(P<0.05或P<0.01),Bax蛋白的表达A、B、C、D组明显高于E组(P<0.05或P<0.01),B、C、D组亦明显低于A组(P<0.05)。结论从Bcl-2蛋白表达的变化可以看到丙泊酚的心肌保护作用。