金属硫蛋白对离体缺血再灌注未成熟心肌细胞功能的影响

背景：实验已证实金属硫蛋白对成熟心肌有保护作用,但对于未成熟心肌的保护作用尚缺乏实验证据.目的：探讨诱导金属硫蛋白在未成熟心肌中的表达及对缺血再灌注未成熟心肌细胞功能的影响,为未成熟心肌的保护提供有效的方法.设计：完全随机分组设计,对照实验.单位：青岛大学医学院附属青岛市立医院妇产科和心脏外科,华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科.材料：实验于2001-10/2002-09在华中科技大学同济医学院药理实验室（安全级别一级）完成.选用出生14～21 d日本长耳大白兔27只,雌雄不拘.随机将兔分为4组：对照组9只,腹腔注射ZnSO4 12,24,48 h组各6只.方法：①对照组：腹腔注射蒸馏水0.3 mL,按注射后12,24和48 h取离体心脏,灌注重碳酸氢盐缓冲液15 min转为工作心15 min,全心停灌45 min,恢复灌注15 min改为工作心30 min.腹腔注射Zn-SO412,24,48 h组：分别按腹腔注射36 g/L ZnSO4 12,24和48 h后取离体心脏,余方法同对照组.②计算心肌肌酸激酶和乳酸脱氧酶15 min漏出率=心肌肌酸激酶（乳酸脱氢酶）（IU/L）&;#215;15 min漏出液（L）/[1000&;#215;心肌湿重（g）].③采用荧光素酶法心肌组织三磷酸腺苷含量.④心肌线粒体Ca^2＋-三磷酸腺苷酶活性按Jones方法在Shimadzu UV-1200型紫外分光光度计上测定.⑤在电感耦合等离子体原子发射光谱仪上测定线粒体Ca2＋含量.⑥取制备的心肌线粒体悬液按Nayler法测定线粒体合成三磷酸腺苷能力.⑦采用109Cd-血红素饱和法测定心肌组织中金属硫蛋白含量.组间计量资料差异比较采用t检验.主要观察指标：各组兔心肌细胞中金属硫蛋白含量、肌酸激酶和乳酸脱氢酶漏出率、三磷酸腺苷含量、心肌细胞内Ca^2＋含量、心肌线粒体Ca^2＋-三磷酸腺苷酶活性及线粒体Ca^2＋含量、心肌线粒体合成三磷酸腺苷能力比较.结果：日本长耳大白兔27只均进入结果分析.①乳酸脱氧酶漏出率、肌酸激酶漏出率、心肌Ca^2＋含量、线粒体Ca^2＋含量：腹腔注射ZnSO424,48h组明显低于对照组和腹腔注射ZnSO412 h组（P＜0.01）;.②心肌三磷酸腺苷含量、心肌线粒体Ca^2＋-三磷酸腺苷酶活性、心肌线粒体合成三磷酸腺苷能力、心肌金属硫蛋白含量：腹腔注射ZnSO4 24,48 h组明显高对照组和腹腔注射ZnSO4 12 h组（P＜0.05～0.01）.结论：腹腔注射ZnSO4可诱导心肌金属硫蛋白长时间表达,金属硫蛋白可减轻未成熟心肌细胞缺血再灌注损伤.     

热休克蛋白70表达对未成熟心肌保护作用的实验研究

目的探讨热休克蛋白70（HSP70）在未成熟心肌中的表达规律和对未成熟心肌的影响。方法健康新生长耳大白兔30只随机分为5组。对照组：腹腔注射生理盐水0．4ml 24h后取离体心脏，建立Langendorff离体心脏灌注模型；E4h、E12h、E24h、E48h组，腹腔注射去甲肾上腺素，4、12，24、48h后分别取离体心脏，方法同对照组。测定心肌细胞中HSP70含量、血流动力学指标、生化指标，并观察心肌超微结构。结果HSP70含量如。组明显高于其他各组，血流动力学、生化指标均优于其他各组（P〈0．01），心肌超微结构损伤较其他各组明显减轻。结论腹腔注射去甲肾上腺素24h后可诱导未成熟心肌HSP70高表达，一定量的HSP70表达可明显减轻未成熟心肌缺血再灌注损伤。     

酸性HEPES-KH液对未成熟心肌和心肌间质的保护作用

目的 观察不同pH值N-2-羟乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸(N-2-hydroxyethyl piperazine-N′-2-ethanesulfonic acid,HEPES)-重碳酸盐缓冲液(Krebs-Henseleit, KH)复灌液对缺血-再灌注未成熟心肌和心肌间质的影响. 方法采用Langendorff离体灌注模型将24只大白兔分为3组,对照组(n=8)、缺血-再灌注组(n=8)和酸性灌注组(n=8),观察其左心室功能恢复率、心肌含水量(MWC)、血清肌酸激酶(CK) 、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,心肌组织三磷酸腺苷(ATP)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,心肌羟脯氨酸(HP)和血清内皮素(ET)含量等指标.结果酸性灌注组在左心室功能恢复率、ATP含量、SOD活性、HP含量等方面均优于缺血-再灌注组(P＜0.05),在MWC、MDA含量、CK、LDH漏出率和ET含量等均低于缺血-再灌注组(P＜0.05). 结论 pH反常是缺血-再灌注损伤的重要原因,复灌初期应用梯度酸性HEPES-KH液有助于未成熟心肌和心肌间质的保护.     

热缺血后低温保存对供心心肌细胞凋亡的影响

原位心脏移植是治疗终末期心脏疾患的有效方法.供心质量的好坏是决定手术效果的重要因素.本研究采用猪原位心脏移植模型,观察短暂常温热缺血后低温保存对供心心肌细胞凋亡的影响,为进一步改进供心保护提供理论依据.     

急诊冠状动脉旁路移植手术22例经验总结

目的:总结我院急诊冠状动脉旁路移植术(E-CABG)病例的治疗经验。方法:回顾性分析2004年11月至2007年1月在我院进行的22例E-CABG术病例,3例仅有前降支病变的患者采用off-pump CABG术,其余19例采用on-pump CABG术,心肌保护方式采用顺灌结合经冠状静脉逆灌心肌保护方式,统计围手术期临床资料,并与同期择期手术组对照。结果:急诊手术组1例急性透壁性心肌梗死合并室间隔穿孔患者术后2d死于顽固性低心排出量综合征,严重并发症6例,择期手术组仅有2例严重并发症。结论:急诊冠状动脉搭桥术可以有效提高危重冠心病患者的生存率。     

65例心脏直视术后呼吸机相关肺炎临床分析

目的探讨心脏直视术后发生呼吸机相关肺炎（VAP）的相关因素。方法回顾性分析本院心脏直视术后进行机械通气的65例VAP患者的临床资料、致病菌及相应的治疗对策。结果本组病例VAP发生率为7％,死亡率为23．1％,其主要致病菌为革兰氏阴性（G-）杆菌,占73．73％,铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、大肠埃希菌是主要的致病菌;革兰氏阳性（G＋）球菌,占22．03％,主要是金黄色葡萄球菌;真菌占4．24％,主要是白色念珠菌。结论心脏术后VAP的发生率高,死亡率也较高,必须针对相关因素采取积极的防治措施,根据病原学和药敏结果合理应用抗生素,才能提高心脏术后VAP患者的生存质量,降低死亡率。     

降低高龄冠状动脉旁路移植手术风险的研究

目的探讨降低高龄病人冠状动脉旁路移植术（CABG）风险的方法。方法回顾分析2004年11月～2006年11月在我院行CABG的41例年龄大于70岁病人的临床资料，其中行On—pump手术32例，Off-pump手术9例。On—pump手术采用顺逆灌冷氧合血心肌保护法。40例术中使用左侧乳内动脉与大隐静脉做旁路移植材料，行乳内动脉与前降支吻合、大隐静脉与其余病变冠状动脉吻合。围手术期应用预防性治疗方案。结果1例病人术后2周突发腹膜后出血，经抢救无效死亡。余均治愈出院，术后心绞痛缓解。术后哮喘发作2例，房颤4例，上消化道大出血1例，脑栓塞致左侧肢体偏瘫1例。结论综合性治疗措施可有效降低高龄冠CABG手术风险。     

去甲肾上腺素预处理对大鼠供心肌细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响

目的 探讨去甲肾上腺素预处理是否可诱导心肌热休克蛋白70（HSP70）的合成,并进一步研究其对大鼠供心缺血再灌注后心肌细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠18只,随机分为2组：对照组（n=9）,腹腔注射生理盐水0.5 ml,24 h后取离体心脏灌注HTK心肌保护液,4℃保存3 h.然后行Langendorff离体心脏灌注,灌注Krebs-Henseleit（K-H）液2 h.实验组（n=9）,腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素（溶于生理盐水中）3.1 μmol/kg（0.53 mg/kg）,腹腔注射24 h后取离体心脏,处理方法同对照组.心脏灌流结束后取材测定各组心肌HSP70表达,TUNEL法测定心肌细胞凋亡率,免疫组化法测定凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达,并对相关指标做统计学处理比较.观察心肌细胞光镜结构和电镜下的超微结构.结果 实验组心肌组织HSP70表达明显高于[（17.78±1.82）%]对照组[（5.22±1.05）%],心肌细胞凋亡率明显低于[（5.57±1.05）%]对照组[（9.44±1.27）%],凋亡相关蛋白Bcl-2明显高于[（41.88±5.09）%]对照组[（31.36±3.27）%],Bax明显低于[（22.61±3.49）%]对照组[（40.52±4.17）%].实验组心肌组织光镜下结构以及电镜下超微结构的损伤较对照组明显减轻.结论 去甲肾上腺素预处理能诱导心肌组织HSP70高表达,HSP70对离体大鼠心脏经过缺血再灌注后具有明显的保护效应,去甲肾上腺素预处理能够明显保护心肌的结构和功能,抑制心肌细胞凋亡.     

同种异体带瓣主动脉行主动脉根部替换85例随访结果

目的:随访应用低温保存的同种异体带瓣主动脉行主动脉根部替换术的临床效果.方法:85例主动脉根部或瓣膜病变的患者行同种异体带瓣主动脉根部替换手术,术后随访1.5～91个月观察临床结果.结果:随访1.5～91(38.9±13.2)个月.术后早期病死率1.2%(1/85),远期病死率5.9%(5/85);与术前比较心功能明显改善(P＜0.01);术后随访心内膜炎发生率2.4%(2/85);生存者中瓣膜无或有轻度反流84%(66/79),中度反流16%(13/79).结论:同种异体带瓣主动脉根部重建手术效果可靠,成功率高且并发症低,尤适于治疗心内膜炎造成的瓣膜病.     

蛋白激酶C和线粒体ATP敏感性钾通道在未成熟心肌预处理中的作用

目的探讨蛋白激酶C(PKC)和线粒体三磷酸腺苷敏感性钾通道(mitoKATP)在未成熟心肌预处理保护中的作用。方法采用Langendorff离体心脏灌注模型,30只新生日本长耳大白兔分为5组:缺血/再灌注组(I/R组),心脏缺血预处理组(E1组),蛋白激酶C(PKC)阻滞剂chelerythrine(CLT) 心脏缺血预处理(E2组),mitoKATP阻滞剂5-hydroxydecanoate(5-HD) 心脏缺血预处理(E3组),mitoKATP通道开放剂Diazoxide(Diaz)预处理组(E4组)。以血流动力学、生化指标、心肌超微结构等作为观察指标。结果E1和E4组心功能恢复、心肌含水量优于I/R、E2和E4组(P<0.05),三磷酸腺苷含量、超氧化物歧化酶活性、心肌线粒体Ca2 -ATPase活性、心肌线粒体合成三磷酸腺苷(ATP)的能力优于I/R、E2和E4组(P<0.01),丙二醛含量、血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶漏出率、心肌细胞内Ca2 含量、心肌线粒体Ca2 含量低于I/R、E2和E4组(P< 0.01),心肌超微结构损伤较I/R、E2和E4组明显减轻。结论心肌缺血预处理对未成熟心肌具有明显的保护作用,其机制可能是通过PKC的激活和mitoKATP通道的开放起作用。