组织工程血管基质的制备及保存

背景:为构建全生物化组织工程血管,制备及保存脱细胞血管基质.目的:制备组织工程血管基质,观察其保存于液氮中的可行性.方法:采用胰蛋白酶、低渗溶液、化学除垢剂法处理兔胸主动脉来制备组织工程血管基质,标本作大体、光镜及扫描电镜、透射电镜观察,并将制备的血管基质放入液氮中保存,3个月后取出作扫描电镜观察.结果与结论:经该法处理的兔血管细胞全部脱除,胶原纤维、弹性纤维无断裂,细胞外基质保持完好,液氮保存3个月后扫描电镜观察与新鲜基质无明显差别.提示酶、低渗溶液、化学除垢剂联合法是制备组织工程血管基质的较好方法,制备的血管基质可放入液氮中进行短期保存.     

猪主动脉脱细胞血管基质制备及保存

目的探讨脱细胞血管基质的制备和保存方法。方法采用酶、低渗溶液、化学除垢剂联合法处理猪胸主动脉制备脱细胞血管基质,标本行苏木精-伊红染色,大体、光镜及扫描电镜、透射电镜观察。并将标本放入液氮中保存,于保存1、2、3月分别取标本用20g/L戊二醛固定,扫描电镜观察。结果经该法处理的猪血管细胞全部脱除,胶原纤维、弹性纤维无断裂,细胞外基质保持完好。液氮保存后1、2、3月扫描电镜观察与新鲜标本无明显差别。结论酶、低渗溶液、化学除垢剂联合法是制备脱细胞血管基质的较好方法,制得的脱细胞血管基质可放入液氮中保存。     

不同细胞浓度种植于脱细胞血管基质上的细胞生长方式*☆

背景：对于组织工程血管而言,如何在平滑肌细胞层上成功获得致密的内皮细胞层是最为关键的。 目的：探索不同细胞种植浓度对构建全生物化组织工程血管的影响。 方法：先将不同浓度(5×105,5×107 L-1)猪血管平滑肌细胞种植在猪脱细胞血管基质上,培养3 d后再将不同浓度(5×105,5×107 L-1)内皮祖细胞接种在平滑肌细胞-血管基质复合体上,构建片状全生物化组织工程材料。 结果与结论：高浓度与低浓度平滑肌细胞在脱细胞血管基质上的细胞生长曲线相似,并且种植在孔板上和在脱细胞基质上的生长曲线亦相似,但低浓度组增殖较慢,覆盖率较低。细胞覆盖率由高到低的顺序为：高浓度内皮祖细胞+含高浓度平滑肌细胞的脱细胞基质>高浓度内皮祖细胞+含低浓度平滑肌细胞的脱细胞基质>低浓度内皮祖细胞+含高浓度平滑肌细胞的脱细胞基质>低浓度内皮祖细胞+含低浓度平滑肌细胞的脱细胞基质,且高浓度内皮祖细胞在脱细胞基质上可形成较为致密的细胞层,呈现出铺路石样生长方式。说明提高细胞接种浓度有利于其在材料表面快速形成致密的细胞层。     

酸性复灌液对家兔未成熟心肌保护作用的研究

目的 :观察不同pH值HEPES KH复灌液对未成熟心肌的影响。方法 :采用Langendorff离体灌注模型 ,分为 3组 :正常对照组 (NC ,n =8) ,仅灌注pH 7 4HEPES KH液 90min ;缺血 再灌 (I R ,n =8) ,灌流 2 0min后缺血 6 0min ,用pH 7 4HEPES KH液恢复灌注 30min ;酸性灌注组 (E ,n =8) ,缺血 6 0min后 ,先用pH 6 8HEPES KH液灌注 5min ,然后换成pH 7 1灌注 5min ,最后恢复pH 7 4灌注 2 0min。以左室功能恢复、心肌含水量、血清肌酸激酶 (CK)和乳酸脱氢酶 (LDH)漏出率、心肌组织ATP和丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶 (SOD)活性作为观察指标。结果 :E组在左室功能恢复、ATP含量、SOD活性方面均优于I R组 (P <0 0 5 ) ,在心肌含水量、MDA含量、CK、LDH漏出率方面均低于I R组 (P <0 0 5 )。结论 :pH反常是I R损伤的重要发病机制 ,复灌初期应用梯度酸性复灌液有助于未成熟心肌的保护     

双下肢缺血预处理对未成熟心肌细胞凋亡和相关凋亡蛋白表达的影响

目的　探讨双下肢缺血预处理对未成熟心肌细胞凋亡和 B淋巴细胞瘤 /白血病 2蛋白 (bcl- 2 )、bcl- 2家族 bax蛋白、神经生长因子 fas蛋白表达的影响。方法　采用兔离体心脏灌注 (L angendorff)模型 ,2 4只幼兔随机分为 3组 ,对照组 (C,n=8) :仅灌注重碳酸氢盐缓冲液 (KH) 180 min,然后取标本 ;缺血 /再灌组 (I/ R,n=8) :灌注 2 0 min后 ,停灌 4 5 min,复灌 12 0 min;双下肢缺血预处理组 (DL IP,n=8) ,反复 3次阻断双下肢血流 5 m in/放开 5 min,建立L angendorff模型 ,然后重复 I/ R组缺血 /再灌方法。以凋亡细胞原位标记与半定量分析、琼脂糖凝胶电泳检测 DNA片段梯及 bcl- 2、bax、fas基因蛋白的表达作为检查指标。结果　凋亡细胞原位标记与半定量分析 :DL IP组与 I/ R组比较 ,心肌细胞凋亡率明显减少 ;琼脂糖凝胶电泳检测 DNA片段梯 :DL IP组与 I/ R组比较 ,光密度明显增强 ;DL IP组与 I/ R组比较 ,bcl- 2表达明显增多 ,bax、fas表达明显减少。结论　 DL IP通过影响 bcl- 2、bax、fas基因蛋白的表达减少心肌细胞凋亡。     

热休克蛋白70对离体大鼠供心的保护作用

目前,心脏移植仍然是治疗终末期心脏病的有效方法,因此,对供心的保护一直受到临床的关注.热休克蛋白(HSP)是一组由热休克基因所编码合成的高度保守的、伴随细胞的蛋白,所有的细胞都能在应激情况下产生HSP,其能对抗严重的应激损伤.研究发现,在多种因素~([1])刺激下均可产生HSP.     

线粒体三磷酸腺苷敏感性钾通道在未成熟心肌缺血预处理中的作用

目的探讨线粒体三磷酸腺苷敏感性钾通道（mitoKATP）在未成熟心肌预处理保护中的作用,为未成熟心肌的保护提供依据。方法采用Langendorff离体心脏灌注模型,将24只新生（出生14～21d）日本长耳大白兔按随机数字表法分为4组：缺血／再灌注组（I／R组）,心脏缺血预处理组（E1组）,mitoKATP阻滞剂5-hydroxydecanoate（5-HD）＋心脏缺血预处理（E2组）,mitoKATP通道开放剂Diazoxide（Diaz）预处理组（E3组）;检测心脏功能恢复率、心肌含水量、血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶漏出率、三磷酸腺苷（ATP）含量、超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量、心肌细胞内Ca^2＋含量、心肌线粒体Ca^2＋含量、心肌线粒体Ca^2＋-三磷酸腺苷酶活性（Ca^2＋-ATPase）、心肌线粒体合成ATP的能力;电子显微镜观察心肌超微结构。结果E1组、E3组心功能恢复优于I／R组和E2组,心肌含水量低于I／R组和E2组（P〈0．05）;E1组、E3组三磷酸腺苷含量、超氧化物歧化酶活性、心肌线粒体Ca^2＋-ATPase活性、心肌线粒体合成ATP的能力均优于I／R组和E2组（P〈0．05）,丙二醛含量、血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶漏出率、心肌细胞内Ca^2＋含量、心肌线粒体Ca^2＋含量低于I／R组、E2组（P〈0．05）;E1组、E3组心肌超微结构损伤较I／R组和E2组明显减轻。结论心肌缺血预处理对未成熟心肌具有明显的保护作用,其机制可能是通过mitoKATP通道的开放起作用。     

三种不同手术方式行同种异体血管主动脉根部置换的临床效果

目的　比较 3种应用低温保存的同种异体带瓣管道行主动脉根部重建术式的近期和远期效果。　方法　85例主动脉瓣膜疾病患者采用同种异体带瓣管道行主动脉根部重建 ,其中 Freehand手术 16例 ,Miniroot手术 4 4例 ,Total aortic root手术 2 5例。　结果　 3种术式患者灌注时间、主动脉阻断时间、呼吸机辅助时间和住 ICU时间差别均无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ;随访 38.9± 13.2个月 ,Miniroot手术患者主动脉瓣膜中度反流发生率低于其他 2种术式 (P<0 .0 5 )。　结论　用同种异体带瓣管道行主动脉根部重建术治疗主动脉瓣膜疾病 ,3种手术方式均有效 ,其中Miniroot手术术后瓣膜反流的发生率低于其它 2种术式。     

猪供心不同时间热缺血移植后细胞凋亡的变化

目的研究供心常温不同时间热缺血后细胞凋亡的变化。方法利用猪原位心脏移植实施方法,18只猪随机分为3组,对照组(C,n=6)灌注低温保护液后切取供心,4℃保存4h;热缺血1组(E1,n=6)常温阻断主动脉缺血5min后灌注低温保护液后切取供心;热缺血2组(E2,n=6)常温阻断主动脉缺血10min后,灌注低温保护液后切取供心。三组低温保存供心4h后分别行原位心脏移植。供心移植2h后取左心室心肌检测心肌细胞凋亡的变化。结果供心移植2h后,E1、E2组心肌细胞凋亡明显高于C组(P<0.01),E2组心肌细胞凋亡明显高于El组(P<0.01)。结论供心热缺血时间的延长增加移植后的心肌细胞凋亡的发生。     

肾缺血预处理和双下肢缺血预处理对未成熟心肌作用的比较研究

目的：比较肾缺血预处理和双下肢缺血预处理对未成熟心肌的作用。方法：采用经典心脏缺血预处理（IP），肾缺血预处理（RIP）及双下肢缺血预处理（DLIP）兔Langendorff灌注模型比较3种方法对缺血／再灌（I／R）未成熟心肌损伤的效应，分成5组：正常对照（NC，n=6)：离体心脏仅灌注KH液70分钟；缺血／再灌（I／R,n=6)离体心脏灌注15分钟转为工作心15分钟后停灌45分钟，恢复灌注15分钟改为工作心30分钟，IP组（n=6)，离体心脏灌注15分钟转为工作心15分钟后反复2次缺血5分钟／再灌5分钟，然后重复I／R组缺血／再灌注方法；RIP组（n=6)，反复3次阻断左肾动脉5分钟，放开5分钟，然后重复I／R方法，DLIP组（n=6)；反复3次捆扎双下肢5分钟，松开5分钟，然后重复I／R组方法，以左心室功能恢复，心肌含水量，血清肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）漏出率，心肌组织ATP和丙二醛（MDA）含量，超氧化物歧化酶（SOD）活性作为观察指标，结果：IP，RIP及DLIP组在左心室功能恢复优于I／R组（P＜0．05），在ATP含量，SOD活性方面均优于I／R组（P＜0．01），在心肌含量低于IR／组（P＜0．05），在MDA含量，CK，LDH漏出方面均低于I／R组（P＜0．01），结论：肾缺血预处理与双下肢缺血预处理可诱发同等的心肌保护作用。