人骨髓间充质干细胞的分离培养及表型分析

目的体外分离培养人骨髓间充质干细胞(MSCs)并研究其生物学特性,为进一步实验研究打下基础.方法通过密度梯度离心法及贴壁培养分离纯化人骨髓中的单个核细胞、体外培养传代、倒置相差显微镜观察细胞生长情况、瑞氏染色及透射电镜观察细胞形态及结构、绘制生长曲线、流式细胞仪检测细胞表面标记及增殖周期、免疫细胞化学及细胞化学染色对分离培养细胞进行鉴定.结果原代和传代培养的细胞以成纤维样为主,有较强的生长增殖能力;流式细胞仪检测细胞表面标记:CD29、CD105阳性,CD34阴性;细胞周期分析:90%以上的细胞处于G0/G1期;细胞CD106、纤维连接蛋白表达阳性,CD45、CD14及层连蛋白、胶原蛋白Ⅱ表达阴性,细胞糖原(PAS)染色强阳性,细胞碱性磷酸酶(ALP)染色阴性.表明细胞不是造血细胞且未向成纤维细胞、成骨细胞、软骨细胞分化,而是处于未分化阶段的间充质干细胞.结论通过密度梯度离心法及贴壁传代培养可以分离纯化MSCs以满足下一步实验研究,该细胞具有特殊的生物学特性.     

骨髓TPO及受体c-MPL表达变化在急性髓系白血病化疗中的意义

目的探讨急性髓系白血病化疗前后骨髓血小板生成素（Thrombopoietin,TPO）及受体c-MPL的变化及其意义。方法  采用ELISA法和流式细胞仪检测急性髓系白血病初治患者化疗前、化疗缓解后及复发患者骨髓TPO以及c-MPL的表达水平。结果  AML初治患者化疗前骨髓TPO及c-MPL的表达分别为（162.21±39.92）ng/ml、（6.04±4.072）%,明显低于复发组的（213.19±48.34）ng/ml、（11.23±5.225）%,化疗前及复发组均明显高于对照组的（122.14±25.75）ng/ml、（2.84±0.724）%;AML患者化疗缓解后TPO及c-MPL的表达分别为（115.82±22.32）ng/ml、（2.81±1.306）%,与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。各组骨髓TPO与c-MPL的表达呈正相关性。结论 （1）TPO及c-MPL的高表达对AML的诊断具有提示意义,化疗后TPO及c-MPL降至正常,可作为评判AML化疗效果及是否缓解的重要指标;（2）TPO及c-MPL在复发患者骨髓细胞中的表达较初发AML白血病患者明显增高,提示TPO/c-MPL信号通路的高表达可能与急性髓系白血病治疗后复发及难治相关。     

儿童急性骨髓纤维化一例报告并文献复习

患儿男,2岁4个月。患儿于2007年10月24习因不明原因发热在某三甲医院就诊,查血常规：WBC6．0×10^9／L,Hh91g／L,PLT 194×10^9／L,予以抗感染治疗后发热好转出院,但是贫血及面色苍白进行性加重。     

残留耐药Jurkat细胞培养及耐药机制的初步探讨

目的 培养残留耐柔红霉素(DNR)的Jurkat细胞,并对其耐药机制进行初步探讨.方法 体外分离培养初发急性淋巴细胞白血病患者骨髓基质细胞(BMSCs)以模拟骨髓造血微环境,在与Jurkat细胞长期共培养的过程中选用含50ng/ml DNR的培养液进行培养,随着培养时问的延长,绝大部分Jurkat细胞漂浮死亡.残留的Jurkat细胞逐渐恢复增殖活力,并逐渐获得抗药能力,可以在DNR终浓度为50ng/ml的培养液中存活、增殖,将该细胞记为Jurkat/DNR.绘制Jurkat细胞和Jurkat/DNR细胞的增殖曲线,并检测其细胞周期分布、对多种化疗药物的耐药系数、DNR摄药量以及MDRl、bcl-2、bax和MRP mRNA的表达.结果 嵌合于基质细胞层中的Jurkat细胞在DNR的持续刺激作用下逐步产生耐药性,获得残留耐DNR的Jurkat细胞.与Jurkat细胞相比,Jur-kat/DNR细胞中处于静止期的细胞比例增高、增殖速度缓慢、对多种化疗药物产生不同程度的耐药性、DNR摄药量减少,可以检测到MDR1基因表达,bax基因表达无显著差异,bc1-2及MRP基因表达水平升高.结论 骨髓基质细胞滋养层是残留白血病细胞生存和再生长的微环境,可增强白血病细胞的抗药能力;通过改造白血病患者造血微环境有可能抑制残留白血病的形成及减少复发.     

小鼠15%Ⅲ度烧伤时骨髓基质细胞对粒单系祖细胞生长的影响

目的 研究烧伤情况下骨髓造血基质细胞支持粒单系造血的功能变化。方法 采用体外小鼠骨髓基质细胞融合培养和粒单系祖细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ）培养的方法,动态观察１５％Ⅲ度烧伤时骨髓基质细胞对粒单系祖细胞生长的影响。结果 当在烧伤组基质细胞层上培养正常骨髓细胞的ＣＦＵ－ＧＭ时,其集落生成能力在伤后１,３,５,７,１０天均明显低于正常对照组,而同时培养的烧伤小鼠骨髓细胞ＣＦＵ－ＧＭ时,其集落生成能力在伤后１     

基质细胞在造血细胞体外扩增中的作用及其分子机制

造血干/祖细胞在细胞因子联合应用条件下,经体外扩增后其功能活性往往受到损伤,而一些研究表明造血基质细胞存在时,可促进或维持体外扩增造血细胞的功能活性,其作用的分子机制目前也已开始研究。基质细胞在造血细胞体外扩增中的作用及其分子机制的阐明,将推动造血细胞体外扩增技术研究及应用的进一步深入。     

急性白血病骨髓基质细胞表达SDF-1异常

白血病骨髓造血微环境异常对白血病细胞具有庇护及促增殖作用,其异常的持续存在可能是白血病细胞逃避药物杀伤形成微小残留病并增殖复发的根源[1,2].基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1, SDF-1)在白血病细胞的迁移定位、增殖及维持生存等方面发挥重要作用.为了解急性白血病患者骨髓微环境是否存在SDF-1异常及治疗后是否存在持续异常,我们检测了初诊及完全缓解的急性白血病患者骨髓基质细胞培养上清的SDF-1水平.     

自体造血干细胞移植治疗儿童恶性淋巴瘤的疗效评价

目的 总结分析自体造血干细胞移植治疗儿童恶性淋巴瘤的经验及疗效,以期更好地规范治疗、提高治疗效果.方法 对我科近3年收治的难治复发性儿童恶性淋巴瘤患儿行自体造血干细胞移植治疗的方法及疗效进行回顾性分析.结果 严格按照适应证选择行自体造血干细胞移植治疗儿童恶性淋巴瘤17例,其中HD 5例,NHL 12例,均成功出仓.随访6个月以上,17例患儿中有1例死于T细胞NHL早期复发,另1例死于放疗并发症,其余患儿均无病存活.结论 造血干细胞移植可提高难治复发淋巴瘤患儿的疗效,提高无病生存率.     

rhG-CSF联合rhTPO促进异基因造血干细胞移植后造血重建的临床研究

目的 探讨重组人粒细胞刺激因子(recombinant human-granulocyte colony stimulating factor,rhG-CSF)和重组人血小板生成素(recombinant human-thrombopoietin,rhTPO)促进异基因造血干细胞移植后造血功能重建的作用.方法 选取15例异基因造血干细胞移植患者,其中同胞间全相合移植6例,非血缘全相合移植7例,半相合移植2例,于移植后 1d予以rhG-CSF(300μg/d)和rhTPO(15 000u/d)治疗,观察患者造血重建的时间和相关并发症发生情况.结果 患者于移植 15d( 8～ 20d)N＞0.5×109/L,移植 19d( 11～ 23d)PLT＞30×109/L,提示造血功能重建.移植 30d复查短串联重复序列(STR)检测,均提示重建造血为供者造血.随访至今,所有患者造血稳定重建.15例患者中10例出现感染、发热;15例患者均出现不同程度的皮下出血,多表现为皮肤淤点淤斑,2例患者出现鼻出血;3例患者在造血重建前夕出现全身骨痛.3例出现Ⅱ度以下急性移植物抗宿主病(GVHD),2例患者出现轻度的慢性GVHD.结论 rhG-CSF联合rhTPO促进异基因造血干细胞移植后造血重建疗效肯定,减少移植感染、出血等并发症的发生率,缩短层流病房住院日,减少血小板、红细胞等血液制品的输入量,降低移植费用.     

基于网络教学平台的血液科实习教学与管理

基于网络教学平台的血液科实习教学与管理是以医学实习生为中心的个性化、人性化教学模式,是对传统教学的有力补充。文章结合实践,对其几个主要问题做了介绍,并指出网络教学在实习教学中的应用,可以促进学生主动学习、终身学习能力的提高和培养。