基于CRISPR/Cas9技术建立敲除OSBPL2基因的HeLa细胞株

目的:利用CRISPR/Cas9技术构建OSBPL2基因敲除的稳定HeLa细胞株?方法:设计3个单导向RNA(single-guide RNA,sgRNA),分别靶向OSBPL2基因的第2?3和5外显子,以PGK1.1为载体,构建出3个重组真核表达载体?分别转染HeLa细胞后,使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,CruiserTM敲除检测实验和测序共同检验载体靶向效率?选出靶向效率最高的质粒转染HeLa细胞,进行单克隆细胞培养,最后用Western blot 鉴定敲除效果?结果:sgRNA正确插入到PGK1.1载体,靶向第2外显子的重组载体转染HeLa细胞并筛选单克隆后,细胞未检测出OSBPL2蛋白的表达?结论:敲除OSBPL2基因的稳定HeLa细胞株构建成功?     

信息动态

角膜内皮细胞(corneal endothelial cells,CECs)解剖形态的完整及生理功能的健全是临床评价角膜功能的主要指标[1-2].研究发现,猪角膜与人角膜在生物学方面有许多相似之处[3],且相比于人CECs,猪CECs具备良好的增生能力,因此通过培养猪CECs并观察其形态特点,了解其生长特性具有重要的意义.目前国内外对猪CECs培养的研究较少,本研究拟对猪CECs的获取、分离和纯化方法进行改良,研究CECs的生长特点.     

无创机械通气治疗慢性阻塞性肺疾病合并Ⅱ型呼吸衰竭的疗效观察

目的 探讨无创机械通气对慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并Ⅱ型呼吸衰竭的临床疗效.方法 对42例符合诊断标准的COPD合并Ⅱ型呼吸衰竭的患者给予无创机械通气(BiPAP)治疗,观察治疗前,上机后4 h、24 h、48 h的动脉血气分析中的pH值、PaCO2、PaO2、SO2的变化.结果 经过无创机械通气治疗后,患者临床症状有明显缓解,治疗后血气分析中的 pH值、PaO2、SO2、PaCO2较治疗前有明显改善(P<0.05).结论 无创机械通气对COPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者的治疗效果显著,在临床上可推广应用.     

穿戴式老年人跌倒防护气囊系统设计

正跌倒已经成为影响人类特别是老年人生命健康的重要诱因[1],在中国每年约有4 000万65岁以上的老年人意外跌倒,而跌倒会造成严重的肢体和心理伤害,若伤及髋骨,有可能丧命[2]。在现有的跌倒检测系统中,绝大部分为跌倒后的检测,然后通过声光报警、通话与定位通知外界进行协助与救护,并没有从根本上对老年人的跌倒进行防护。     

老年心血管疾病的肺功能改变

目的 为了解老年心血管疾病对肺功能的影响。方法 对156例老年高血压病、冠心病患者进行肺功能检测。结果 检测发现被检查者的肺活量(VC)、用力肺活量(FVC)、1s用力呼气容积(FEW1)、1s用力呼气容积占用力肺活量百分(FEW1％)的均值在正常范围；而主要反映小气道功能的最大通气中段流量(MMF)、25％、50％肺活量位的最大呼气流量(V25、V50)均值有不同程度降低；反映通气效果的最大通气量(MVV)均值也轻度减退。其改变与年龄、性别及病程无关。结论 心血管疾病主要影响肺小气道的通气功能，并有呼吸肌的耐力下降。     

黄酮类化合物抗鼻咽癌作用的研究进展

黄酮类化合物是一类提取于植物中的多酚化合物,具有许多潜在的药用价值,其中抗鼻咽癌的作用是近年来的研究热点。黄酮类化合物抗鼻咽癌作用主要表现在抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、抑制细胞迁移和侵袭、增加放化疗敏感等,但是部分黄酮类化合物对鼻咽癌细胞可能表现出双重作用。     

PTN shRNA腺病毒载体的构建及其对大鼠DRGn神经突起的影响

目的：构建特异性shRNA腺病毒载体，使之干扰神经轴突过度生长因子（PTN）在胰腺癌细胞中的表达，探讨其对SD大鼠背根神经节神经元（DRGn）神经轴突的影响。方法：设计并合成4对靶向PTN单链寡核苷酸（ss oligo），经变性退火为双链寡核苷酸（ds oligo）插入穿梭质粒pENTR／U6载体，测序正确后经脂质体介导转染胰腺癌细胞，通过RT-PCR方法筛选对PTN沉默效果最佳的穿梭质粒pENTR／U6shRNA，然后与腺病毒骨架质粒进行同源重组，筛选出正确重组子，用HEK293A细胞包装出表达shRNA-PTN的重组腺病毒并测定其病毒滴度，通过Western blot方法对腺病毒沉默PTN效果予以检测。shRNA-PTN腺病毒构建成功后感染胰腺癌PC-2细胞，然后和DRGn共培养，观察DRGn生长分化和形态特征。结果：测序结果提示所构建的pENTR／U6-shRNA质粒正确，并从4对ds oligos筛选出对PTN沉默效果最佳的穿梭质粒pENTR／U6-shRNA，经同源重组后成功构建了介导shRNA-PTN复制缺陷型重组腺病毒。转染胰腺癌细胞后，Western blot检测显示shRNA-PTN腺病毒感染胰腺癌细胞后对PTN蛋白的沉默效果7d后达最佳效果。感染shRNA—PTN腺病毒的胰腺癌PC-2细胞和DRGn共培养，DRGn神经轴突的生长和延长受抑制，以第7天最为明显。结论：成功地构建介导shRNA—PTN复制缺陷型重组腺病毒；感染shRNA—PTN腺病毒的胰腺癌PC-2细胞和SD鼠DRGn共培养可以抑制DRGn神经轴突的生长。     

249例大肠癌内镜诊断与病理分析

近年来 ,我国大肠癌发病率呈逐年上升趋势 ,早期发现、早期诊断是改善大肠癌预后的关键。本院 1990年 1月～ 1999年底共作了 4 5 4 5例结肠镜检查 ,发现大肠癌 2 4 9例 ,检出率为 5 .0 4 %。现具体分析如下。1　资料与方法1.1　一般资料　 2 4 9例大肠癌中 ,男 142例 ,女 10 7例 ,男女比例为 1.33:1,平均年龄 5 7.4 8岁。高发年龄5 5～ 6 5岁 ,共 16 5例 (6 6 .2 7% ) ,30岁以下青年患者 2 2例 (8.84 % )。症状表现为 :血便 10 2例 (41.4 6 % ) ,腹痛 5 5例 (2 2 .36 % ) ,腹泻 32例 (13.0 % ) ,腹胀 19例(7.72 % ) ,包块 15例 (6 .10 % ) ,…