生脉液拮抗乳酸盐腹膜透析液对人腹膜间皮细胞的损伤

目的研究生脉液对乳酸盐腹膜透析液(L-PDS)致腹膜间皮细胞增殖及损伤作用的影响.方法采用胰蛋白酶-EDTA消化法,从人腹膜组织中分离间皮细胞,并建立体外人腹膜间皮细胞(HPMC)培养模型.以四甲基偶氮多胍(MTT)法测定HPMC增殖程度,采用自动生化分析仪检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平示细胞损伤程度.以不同内容的培养液及不同时间进行观察,分为单纯培养液对照、不同浓度葡萄糖L-PDS、不同浓度生脉液加L-PDS.结果与单纯培养液对照组相比,L-PDS致HPMC培养液中LDH水平明显增高,并显著降低MTT渗入量(P＜0.01);而3种浓度(1.5%、2.5%和4.25%)葡萄糖腹膜透析液(腹透液)间差异无显著性意义.在与2.5%L-PDS作用45 min后,1 mg/ml浓度的生脉液能显著降低LDH水平[(7.21±1.32)U/L对(15.87±4.16)U/L,P＜0.05],提高MTI渗入量(吸光度A值0.201±0.053对0.123±0.036,P＜0.01);而100μg/ml浓度生脉液只能显著降低LDH水平[(8.16±2.05)U/L对(15.87±4.16)U/L,P＜0.001],对MTT渗入量无明显改变.上述作用240 min后,两种浓度生脉液引起LDH水平及MTI渗入量的变化差异均无显著性意义.结论生脉液能拮抗乳酸盐腹透液对HPMC的损伤及抑制作用.     

一种简便快速构建基因突变体的有效方法

目的 介绍一种简便、快速、准确构建定点诱导突变体的新技术。方法 设计3条引物，一条突变引物，另外两条引物位于突变引物的两侧，并带上合适的酶切位点，以供突变片段构建完成以后可以克隆进入合适载体。然后以突变引物与其附近的反向引物一起扩增带突变位点的片段，再以此PCR产物片段为引物与剩下的另一条引物一起扩增，扩增出的片段带有合适的酶切位点可以克隆进入合适载体。结果 用该方法成功地在Parkin基因的7196bp处C→T和913bp处C→T构建成两种突变。结论 该方法简便、快速、准确，确保100％的突变率，可在任何基因上构建所需的点突变，且不需要购买任何试剂盒。     

心脏圆锥干畸形TBX1基因多态性研究

心脏圆锥干畸形(Conotruncal Heart Malformation,MIM217095)是一类较常见的先天性心脏病,占先天性心脏病的1/4～1/3,常见有法乐氏四联症,肺动脉瓣畸形,大动脉转位和右室双出口等.1988年,Pirepont等发现圆锥干畸形有较强的复发倾向,是一种遗传性疾病[1];1997年Chieffo等在22q11.2克隆了TBX1基因,并认为心脏圆锥干畸形发病与TBX1基因有关,但突变检测未发现有意义的突变[2].     

遗传性共济失调致病基因研究进展

本文从临床表现、家系来源、遗传特点、基因定位等角度综述了遗传性共济失调包括ＳＣＡ１，ＳＣＡ２，ＳＣＡ３／ＭＪＤ，ＳＣＡ４，ＳＣＡ５，ＳＣＡ７，ＦＰＣＡ，ＤＲＰＬＡ，Ｆｒｉｅｄｒｅｉｃｈ氏共济失调，ＡＴ，ＡＶＥＤ，ＩＯＳＣＡ的基因研究进展，显示了共济失调极大的遗传异质性。致病基因的研究将为该病的准确分型提供依据。     

人类间隙连接蛋白CX58基因的克隆

目的 利用同源性分析，克隆定位新的人类间隙连接蛋白基因，并探讨该基因和遗传性耳聋的关系。方法 将小鼠Cx57基因的编码区与美国国家生物信息中心（National Center for Biotechnology Information,NCBI)的表达序列标签数据库（database of expressed sequence tags,dbEST)进行BLAST（basic local alignment search tool）分析，在得到的代表人类新基因的EST序列构建重叠群上设计引物CX58F1/CX58F2和CX58R1／CX58R2，分别与cDNA文库及Ready cDNA载体臂上引物行巢式聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR)、cDNA末端快速扩增（rapid amplification of cDNA ends,RACE),获得cDNA后与大规模测序结果比较，定位该基因，并在常染色体显性遗传性耳聋家系中进行突变分析。结果 将利用同源性分析得到的9个人类新的EST，构建重叠群设计引物行巢式PCR、RACE，在肝、肾的Ready cDNA和胎盘cDNA文库中得到1个全长cDNA并命名为CX58。通过与大规模测序结果比较，将该基因定位于1p32.3-p34.1。12个常染色体显性遗传性耳聋家系中未检测到突变。结论 通过同源性分析，我们克隆定位了1个新的人类间隙连接蛋白基因CX58。该基因突变可能不是引起常染色体显性遗传性耳聋的常见原因或与该病无关。     

一个中国耳聋家系的SLC26A4基因分析

目的 确定一个非综合征型耳聋家系的致病基因。方法 应用聚合酶链反应-直接测序方法，对溶质转运蛋白家族26，成员4（solute carrier family 26，member 4；SLC26A4）基因的所有外显子及其与内含子交界处进行测序寻找突变。结果 在该家系先证者发现SLC26A4基因的N392Y、S448X复合杂合突变，其父亲为S448X的杂合突变，其母亲为N392Y的杂合突变。结论 SLC26A4基因的N392Y、S448X复合杂合突变是导致该先证者耳聋发生的原因。     

TBX5基因在中国人心手综合征患者中的突变分析

目的 检测中国心手综合征患者ＴＢＸ５基因突变。方法 利用单链构象多态性分析和测序方法,对７个心手综合征患者家系进行ＴＢＸ５基因突变检测。结果 发现３个家系患者有单链构象多态性改变,经测证实为３个新位点基因突变：１个心手综合征家系患者为ＴＢＸ５基因单个碱基缺失引起移码突变,２个心手综合征家系为ＴＢＸ５基因碱基替换引起错义突变。结论中国人ＴＢＸ５基因突变可引起心手综合征。     

心脏圆锥干畸形患者Tbx1基因杂合性缺失研究

目的 检测心脏圆锥干畸形Tbx1基因杂合性缺失情况。方法以Tbx1基因部分片段为探针，用分子细胞遗传学的荧光原位杂交技术检测了22例心脏圆锥干畸形患者，其中综合征型5例，孤立型17例。结果 5例综合征型患者中有2例存在22q11．2位点上的Tbx1基因的杂合性缺失，其余患者中无此现象。另外，Northern杂交表明人Tbx1基因在胎心、胎肾以及成人的睾丸、骨骼肌中表达。结论 Tbx1基因可能为上述综合征中某一发育异常的致病基因，与心脏圆锥干畸形致病基因的关系有待于无杂合性缺失患者的突变检测。     

利用PLGA细胞支架再生人关节软骨的实验研究

目的：研究人关节软骨细胞在PLCA三维支架上的贴附和生长情况，利用组织工程技术培养工程化关节软骨。方法：制作PLGA三维细胞支架。分离培养成人关节软骨细胞，体外扩增后种植到PLGA支架中。在体外和裸鼠体内分别培养软骨细胞一支架复合物，分期终止培养，进行组织学染色、扫描电镜、Ⅱ型胶原免疫组织化学及cDNA探针原位杂交检测。结果：体外培养发现，软骨细胞支架材料内贴附生长良好，长期培养仍保持软骨细胞特性，棵鼠体内培养8周后可形成软骨样组织。结论：PLGA三维支架适合软骨细胞贴附生长和分泌软骨外基质，可作为软骨组织工程的细胞载体。利用组织工程的方法可获得适于移植的工程化关节软骨。