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111.
112.
生脉液拮抗乳酸盐腹膜透析液对人腹膜间皮细胞的损伤 总被引:5,自引:1,他引:4
目的研究生脉液对乳酸盐腹膜透析液(L-PDS)致腹膜间皮细胞增殖及损伤作用的影响.方法采用胰蛋白酶-EDTA消化法,从人腹膜组织中分离间皮细胞,并建立体外人腹膜间皮细胞(HPMC)培养模型.以四甲基偶氮多胍(MTT)法测定HPMC增殖程度,采用自动生化分析仪检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平示细胞损伤程度.以不同内容的培养液及不同时间进行观察,分为单纯培养液对照、不同浓度葡萄糖L-PDS、不同浓度生脉液加L-PDS.结果与单纯培养液对照组相比,L-PDS致HPMC培养液中LDH水平明显增高,并显著降低MTT渗入量(P<0.01);而3种浓度(1.5%、2.5%和4.25%)葡萄糖腹膜透析液(腹透液)间差异无显著性意义.在与2.5%L-PDS作用45 min后,1 mg/ml浓度的生脉液能显著降低LDH水平[(7.21±1.32)U/L对(15.87±4.16)U/L,P<0.05],提高MTI渗入量(吸光度A值0.201±0.053对0.123±0.036,P<0.01);而100μg/ml浓度生脉液只能显著降低LDH水平[(8.16±2.05)U/L对(15.87±4.16)U/L,P<0.001],对MTT渗入量无明显改变.上述作用240 min后,两种浓度生脉液引起LDH水平及MTI渗入量的变化差异均无显著性意义.结论生脉液能拮抗乳酸盐腹透液对HPMC的损伤及抑制作用. 相似文献
113.
细菌毒素和肿瘤坏死因子-α对人腹膜间皮细胞白细胞介素8和纤连蛋白分泌的影响 总被引:14,自引:2,他引:12
目的:研究细菌毒素和肿瘤坏死因子(TNF)-α对人腹膜间皮细胞分泌白细胞介素(IL)-8和纤连蛋白(FN)的影响。方法:分离人腹膜间皮细胞(HPMC)做体外培养,采用酶联免疫双抗夹心法和逆转录聚合酶链反应,检测细胞产生IL-8和FN水平的情况。采用Lowry方法检测培养液中细胞内总蛋白。结果:脂多糖(10μg/ml)、金黄色葡萄球菌肠毒素(10μg/ml)和TNF-α(1000U/ml)分别刺激HPMC后,培养液内IL-8和FN蛋白质水平显著增高(P<0.01),并上调IL-8和FN的mRNA表达。结论:细菌毒素和TNF-α可引起人腹膜间皮细胞IL-8和FN蛋白水平增加,并上调HPMC IL-8和FN mRNA表达;FN合成增加可能是导致腹膜纤维化原因之一。 相似文献
114.
夏科-马里-图思病Cx32、MPZ和PMP22基因点突变的特点 总被引:2,自引:0,他引:2
目的研究我国夏科马里图思病(CMT)Cx32、MPZ和PMP22基因点突变的特点。方法应用聚合酶链反应单链构象多态性(PCRSSCP)结合DNA序列分析检测30个CMT家系的患者及50名非血缘关系的正常对照的Cx32、MPZ和PMP22基因的编码外显子。结果4个家系(3个为X连锁隐性遗传)有4种不同的Cx32基因点突变(13.3%),其中1个家系为188位的苏氨酸被丙氨酸置换是未见报道的新突变。1个家系(3.3%)有MPZ基因点突变,未发现PMP22基因的点突变。结论Cx32、MPZ和PMP22基因的点突变占CMT致病原因的16.7%。我国也存在不少X连锁遗传的家系(>10.0%),对可疑的家系(家系中患者无男传男的现象)应首先进行Cx32基因的点突变检测。我国的CMT发病率低可能与其基因突变特点有关。 相似文献
115.
TBX5基因在中国人心手综合征患者中的突变分析 总被引:5,自引:0,他引:5
目的 检测中国心手综合征患者TBX5基因突变。方法 利用单链构象多态性分析和测序方法,对7个心手综合征患者家系进行TBX5基因突变检测。结果 发现3个家系患者有单链构象多态性改变,经测证实为3个新位点基因突变:1个心手综合征家系患者为TBX5基因单个碱基缺失引起移码突变,2个心手综合征家系为TBX5基因碱基替换引起错义突变。结论中国人TBX5基因突变可引起心手综合征。 相似文献
116.
117.
目的研究从胎儿附属物中分离培养及冻存细胞的较佳方法,以期为组织工程、细胞治疗和基因治疗提供种子细胞。方法取足月产胎儿脐带和胎盘,用酶消化法获得细胞,用相应培养液进行培养传代。将胎盘、脐带组织块冻存,检测加入不同浓度抗冻剂二甲亚砜的组织复苏后的活细胞率,透射电镜下观察其超微结构,并与新鲜组织进行比较;冻存培养所得人脐带血管周细胞和胎膜贴壁细胞的原代细胞,用免疫化学法检测冻存前后各自免疫表型的表达。结果新鲜脐带组织活细胞率为67.0%,抗冻剂体积分数为5%、10%、15%、20%时,冻存复苏脐带组织的活细胞率分别为23.4%、55.5%、48.8%、31.8%。抗冻剂体积分数为10%时,冻存复苏组织与新鲜组织活细胞率最接近(P〉0.05),体积分数为5%和20%时与新鲜组织该指标比较,差异均有统计学意义(P〈0.01);透射电镜观察结果与之吻合。胎盘组织与脐带组织的情况类同。细胞冻存后免疫表型无明显变化。结论本方法可以从胎儿附属物中分离培养出大量种子细胞,冻存复苏后细胞免疫表型未发生改变,抗冻剂体积分数为10%时效果最好。 相似文献
118.
目的 :为了确定我国汉族人群遗传多态性片段大小范围与法国人群的差异 ,更好的进行基因组扫描和个体识别等方面研究。方法 :4 0 0个微卫星位点分别在 32个反应管中进行扩增。在 5 μl反应体系中加 6~ 17对PCR引物 ,多个微卫星位点同时扩增 ,产物在ABI377XLDNA测序仪上进行电泳。结果 :4 0 0个微卫星位点共有 30 6个有满意的结果 ,其中 12 4个微卫星位点与法国CEPH家系存在片段范围的差异。结论 :遗传多态性片段大小范围在种族间存在较大差异 ;在对中国汉族人群进行基因分型时 ,应在Genethon提供的范围基础上向两侧各扩大 10bp。 相似文献
119.
TGF-β1对人腹膜间皮细胞分泌细胞外基质和bFGF的影响 总被引:9,自引:2,他引:7
目的 :研究TGF - β1对人腹膜间皮细胞分泌细胞外基质和bFGF的影响。方法 :人腹膜间皮细胞(HPMC)作体外培养 ,在第三代 ,将细胞转板至细胞融合后 ,将其分为对照组 (F12 )和TGF - β1刺激组两组(F12 TGF - β15ng/ml) ,分别在 2 4 ,4 8h采用ELISA法检测上清液中纤维连接蛋白 (FN)和纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI- 1)的含量 ;采用半定量逆转录多原酶链反应 (RT -PCR)检测HPMC细胞内FN ,PAI - 1和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)mRNA的表达。结果 :HPMC表达FN ,PAI - 1和bFGF ;HPMC在 5ng/mlTGF - β1刺激下分泌FN及PAI - 1明显的增加 ,与对照组比较差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;HPMC经TGF- β1作用 12h后 ,FNmRNA ,PAI- 1mRNA和bFGFmRNA半定量结果与对照组相比 ,其表达量分别上调18.5 4 % ,8.6 %和 6 6 .9%。结论 :TGF - β1可促进HPMC合成与分泌细胞外基质和bFGF。 相似文献
120.
目的 :构建能表达人Endostatin的真核表达质粒。方法 :设计引物从成人肝cDNA文库中通过PCR扩增到EndostatincDNA ,并在 5′端融合编码人胰岛素信号肽序列 ,经测序证实后连接到真核表达载体pcDNA3.1(- )中。将携带基因的真核表达载体质粒pcDNA3.1(- ) SEND转染HT10 80细胞后用G4 18筛选获得克隆 ,采用RT PCR和West ern blot检测Endostatin的表达。结果 :测序结果表明克隆的人EndostatincDNA完全正确 ,并且在其 5′端融合编码人胰岛素信号肽序列 ;RT PCR显示转染后的HT10 80细胞可以有效地转录EndostatinmRNA ;Western blot检测到转染后的HT10 80细胞上清有相应的蛋白质 ,大小为 2 0kD左右。结论 :含有人胰岛素信号肽序列的人EndostatincDNA重组质粒pcDNA3.1(- ) SEND转染HT10 80细胞后可以有效的表达目的蛋白并能分泌到细胞外 ,本研究为Endostatin的功能研究及应用于基因治疗提供基础 相似文献