用ELISA检测流行性出血热特异性免疫复合物的初步研究

为检测流行性出血热特异性循环免疫复合物,建立了抗原特异性双抗体夹心ELISA技术。以兔抗EHF IgG包被反应板,使待检标本内循环免疫复合物通过暴露的EHF病毒抗原位点而被结合到固相上,再以辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG进行示踪,从而检出EHF’特异性循环免疫复合物。在228份EHF患者血清中,用胶因素ELISA检出非特异性循环免疫复合物183份,抗原特异性ELISA检出特异性循环免疫复合物188份。本方法特异性强,重复性及稳定性较好,可应用于临床检测。     

中国旱獭IL-10分子的克隆和序列分析

目的克隆旱獭白细胞介素-10(IL-10)全长cDNA序列进行序列分析,为IL-10分子的表达和在土拨鼠肝炎病毒(woodchuckhepatitisvirus,WHV)感染中的应用奠定基础。方法根据Genbank的土拨鼠IL-10cDNA序列,在5′非编码区和3′非编码区设计特异性引物,提取旱獭脾组织总RNA作为模板,RT-PCR扩增旱獭IL-10cDNA。PCR产物纯化后连接至T载体(pMD18-T),构建重组质粒pMD18-T-cmIL-10。对重组质粒进行酶切鉴定,选择阳性克隆测序。对所获得的序列应用分析软件进行分析。结果RT-PCR扩增产物为685bp。重组质粒pMD18-T-cmIL-10经EcoRⅠ与PstⅠ双酶切提示含目的基因片段。序列分析提示旱獭IL-10的编码序列为537bp,与土拨鼠IL-10的同源性为100%。结论成功克隆旱獭IL-10分子,并构建重组质粒pMD18-T-cmIL-10。     

用免疫转印技术检测流行性出血热病人特异性抗体的探讨

采用免疫转印技术检测了147份临床诊断为EHF病人血清中的特异性IgG抗体,结果133份血清可检出针对分子量在68和66kd左右两种病毒多肽的抗体,检出率为90.4％,略高于免疫荧光试验(88.4％),两种抗特异性多肽抗体的几何平均滴度分别为荧光法的4倍和2.1倍。本法具有特异性强、敏感性高和重复性较好等特点,并能检出针对不同抗原亚基成份的抗体,可作为EHF特异性诊断的方法之一。     

SPA菌体协同ELISA及其在检测血清抗HCV·IgM中的初步应用

采用HCV_1合成抗原多肽,SPA 菌体及酶标记抗人IgM 等建立血清抗HCV.IgM 检测SPA菌体协同ELISA(SPA-ELISA)。以多重替代试验、阻断试验及其2-巯基乙醇破坏试验证实其方法的特异性.将其用于一组临床标本的检测,并对该法检测血清抗HCV-IgM 的优点进行了探讨。     

流行性出血热病毒抗原及其免疫复合物在发病机理中的作用

流行性出血热(EHF)是一种严重危害我国劳动人民身体健康的急性传染病,但至今其发病机理尚未完全阐明。同济医科大学附属同济医院临床免疫研究室自1986～1992年围绕EHF病毒抗原组份     

武汉地区献血员血清TTV等几种肝炎相关病毒的基因检测

了解武汉地区不同献血员血清ＴＴＶ感染特点及其与其它几种肝炎相关病毒感染之间的关系。方法采用ＰＣＲ及巢式ＰＣＲ对５４例武汉市城区义务献血员及７４例既往乡村献血者分别进行血清ＴＴＶ ＤＮＡ,ＨＣＶ ＲＮＡ及ＨＧＶ ＲＮＡ等检测。结果：ＴＴＶ ＤＮＡ、ＨＣＶ ＲＮＡ及ＨＧＶ ＲＮＡ指标阳性率在既 往乡村个体献血员为４３．２％、２３．０％与２．７％,城区义务献血员为５．６％、１．９％与１．９％,前者ＴＴＶ     

维持性血液透析及肾移植患者乙型及丙型肝炎病毒感染调查

目的 了解维持性血液透析及肾移植患者乙型及丙型肝炎病毒感染状况。方法 采用ELISA及PCR法测定HBVm、抗—HCV、HCVRNA，型特异性HCV亚基因探针杂交分型。结果长期血透者HCV阳性率为37．24％，肾移植术后再透析者达47．57％，且与透析时间、输血次数、受血量正相关；HCV基因型以混合型为主，占63．64％。结论 本组患者HBV、HCV感染率与输血次数、输血量及透析时间密切相关。     

血清抗－HCV与HCV RNA检测结果比较

采用逆转录一套式－聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅ－ＰＣＲ）及ＥＬＩＳＡ（Ａｂｂｏｔｔ）对一组经第二代抗－ＨＣＶＥＬＩＳＡ（上海科华生物技术有限公司，科华）试剂筛选的抗－ＨＣＶ阳性血清及抗－ＨＣＶ阴性的非甲非乙型肝炎患者血清，进行了ＨＣＶＲＮＡ与抗－ＨＣＶ检测。对两者检测结果及相互关系进行了分析与比较。结果显示：Ａｂｂｏｔｔ与科华ＥＬＩＳＡ试剂两者抗－ＨＣＶ检测的阳性符合率及总符合率为７７．７％及７９．８％。两者与ＨＣＶＲＮＡ检测阳性结果的符合率分别为４９，７％及５６．３％。２０８份血清中ＨＣＶＲＮＡ阳性１０９份，其中抗－ＨＣＶ阳性组ＨＣＶＲＮＡ阳性率为６０．２％，较之抗－ＨＣＶ阴性之非甲非乙型肝炎ＨＣＶＲＮＡ阳性率（５０．０％）为高，其在ＰＣＲ试验中呈阳性与强阳性反应者的比率，前者亦显著高于后者（８５．２％与２５．ｏ％，Ｐ＜０．０１）。     

丙型肝炎病毒感染的分子和临床流行病学研究

1.在国内较早地建立了巢式多聚酶链式反应(nested—PCR)用于检测HCV RNA,并采用特异性探针和特异性引物两种方法对我国的HCV基因型别、构成特征及其流行病学意义进行了研究、发现我国HCV基因型构成特征是多种基因型共存,但以K1/1b和K2a/2a 型为主,混合型感染亦较多见。急性肝炎、慢活肝、重症肝炎、肝硬化、肝细胞肝癌和肾衰透析者HCV其因型以K1型为主,而慢迁肝者以K2型较多见。提示不同基因型别与疾病的发展和结局有一定关系。     

429例急慢性肝病病因的血清学研究

已知病毒性肝炎至少可由5种不同的肝炎病毒引起，即甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、丁肝病毒和戊肝病毒。所有这5种病毒均可可起急性肝炎，但只有3种（乙肝、丙肝、丁肝病毒）能导致慢性肝炎。我国病毒性肝炎的发病率较高，弄清其病因分布是预防和治疗的关键，为此我们对各型肝病患者进行血清甲、乙、丙、丁型肝炎病毒感染指标的检测，结果如下。1材料和方法1.1标本来源：429份血清标本来自429例因肝病住院的患者。其中包括：急性肝炎（AH）125例，慢性迁延性肝炎（CPH）92例，慢性活动性肝炎（CAH）170例，肝硬化（CI）35例，肝细胞癌…