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目的 构建人类免疫缺陷病毒病毒 tat基因的重组分泌型真核表达载体并在真核细胞中表达,检测表达的重组蛋白活性。方法 聚合酶链反应(PCR)从重组质粒pcDNA3.1(+)/Tat中扩增tat基因,利用 HindⅢ和Bam HⅠ酶切位点分别将tat基因正向、反向插入分泌型载体pSecT ag ,获得正向插入克隆(pSecT at )和反向插入克隆(pSecTat-AS),经双酶切鉴定连接成功后,利用测序鉴定其序列和插入方向。将构建的重组质粒转染293细胞,利用Western blot法检测Tat蛋白的表达。进而将重组质粒与LTR-CAT报告质粒共转染293细胞和BCBL-1细胞,CAT-酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其细胞内CAT表达,从而检测Tat蛋白的活性。最后将转染重组质粒的293细胞与转染LTR-CAT报告质粒的BCBL-1细胞用Transwell培养系统共培养,CAT-ELISA检测分泌型Tat蛋白的旁分泌调控活性。结果 PCR扩增产物在10 g/L琼脂糖凝胶上约300 bp位置出现条带,与预期的324 bp大小相符;经HindⅢ和BamHⅠ分别酶切鉴定,获得2个正向克隆;正向克隆经测序,克隆的 tat基因序列与Gen-Bank中登记的HIV-1 tat基因100%同源。正向克隆质粒转染293细胞后,Western blot法检测观察到约19×10^3蛋白条带。正向克隆质粒与LTR-CAT报告质粒共转染293细胞和BCBL-1细胞CAT 表达量高于反向克隆质粒转染细胞(P<0.05)。与反向克隆对照相比,与正向克隆转染的293细胞共培养的BCBL-1细胞CAT表达量更高(P<0.05)。结论 成功构建 HIV-1 tat基因基因分泌型真核表达载体,该载体不但可在真核细胞内表达具有调控活性的T at蛋白,表达的Tat蛋白还可分泌至细胞外并具有调控活性。 相似文献
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<正> 要制作满意的症原虫血片染色标本和正确观察红细胞内期的各期形态,关键在了解影响染色及镜检的主要因素,现分述如下。一、染色在染色过程中,不能使染液干固,同时稀释染液和冲洗染片用水的酸硷度要适宜,最好用PH值6.8—7.2之间的缓冲蒸馏水,过酸过硷都会影响染色效果。染色时间应根据染液浓度和外界温度灵活掌握。染液较淡、气温较低,染色时间长,可使化学反应充分完成,染色效果就好。染液较浓,气温较高,虽染色快,但染剂与被染物表面的化学反应未能充分完成,各种细胞的着色粗糙,染色效果就差。染液的新旧,新配制的染液,因色素尚未充分溶解,着色力一般 相似文献
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目的探讨重组真核表达的HIV-1Nef蛋白对IL-6启动子活性的调节作用。方法将pNefF或pcI—neo与重组IL~6启动子虫荧光素酶报告质粒plL6-LUC共转染BcBL-1细胞,同时用TPA刺激同样转染的BCBL--1细胞,于转染后24h、48h、72h、96h收集细胞,用Bright—Glo虫荧光素酶检测系统进行虫荧光素酶活性检测。结果未经TPA刺激的BcBL-1细胞中,转染96h时pNefF和plL6-Luc共转染细胞中虫荧光素酶活性比pCI—neo和plL6-Luc共转染细胞增加了3.66倍。BcBL-1细胞经TPA刺激后,转染96h时,pNefF和plL6-Luc共转染细胞中虫荧光素酶下降1.72倍(P〈O.05)。结论Nef蛋白可在BCBL-1细胞内影响IL-6启动子活性。 相似文献
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目的了解百色市献血人群中卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)的流行状况。方法收集百色市部分无偿献血者肘静脉抗凝血474份,其中男259份,女215份,采用套式聚合酶链反应(n-PCR)方法对474例样本所提取的DNA进行KSHV特异性序列扩增,1.5%琼脂糖凝胶电泳,出现168bp条带为阳性结果。结果 474名献血者中9例阳性,阳性率1.90%;其中男性献血者中检出阳性者5例,阳性率为1.93%;女性献血者中检出4例,阳性率为1.86%。男女两组间阳性率采用χ2检验,差异无统计学意义(P>0.05)。结论百色市献血人群中存在KSHV的感染,不同性别献血者感染率差异无显著性。 相似文献
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医学微生物学与临床医学和感染性疾病联系密切,是一门医学生必须掌握的基础课.其内容繁杂、琐碎,各章节框架相似,缺乏新意.如不重视课堂授课内容的设计和充实,照本宣科,必将会影响教学效果,造成学生不重视、不爱学、学不懂等结果.为激发学生的学习兴趣,加强课堂与临床实际的沟通,在教学中,教员往往会结合一些临床病例进行讲解.恰当选择和合理应用病例,既加强了学生对学科重要性的认识,为今后临床课程的学习打下良好基础,又充实了教学内容,对教学起到画龙点睛的作用.反之,收效甚微[1].然而随着医学模式和教育观念的转变,教学内容不断膨胀,新课程不断增加,如何在有限的时间内,让学生以很大兴趣去获得知识,便是每个教育工作者和医学教育改革面临的课题[2]. 相似文献
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目的探讨苦丁茶对五种常见细菌的体外抑菌效果。方法用琼脂扩散法和试管稀释法测定苦丁茶汤剂对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、变形杆菌、白色念珠菌、新生隐球菌五种病原菌的体外抑菌作用。结果苦丁茶对所测病原菌的最小抑菌浓度(MIC)为:金黄色葡萄球菌100mg/ml,表皮葡萄球菌50mg/ml,变形杆菌100mg/ml,白色念珠菌、新生隐球菌均>100mg/ml。结论金黄色葡萄球菌对苦丁茶均呈中度敏感,表皮葡萄球菌对苦丁茶呈高度敏感,变形杆菌对苦丁茶呈低度敏感,白色念珠菌、新生隐球菌对苦丁茶均呈耐药。 相似文献
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目的:探讨基于信息—动机—行为技巧(IMB)模型的居家护理干预对乳腺癌化疗患者的康复作用。方法:选取2022年5月至2022年10月桂林市某三甲医院日间治疗专区120名乳腺癌化疗患者,随机分成对照组和观察组,每组60例。对照组采用常规居家护理,观察组在常规居家护理基础上采用基于IMB模型的居家护理干预。采用一般自我效能感量表(GSES)、诺丁汉健康量表(NHP)、抑郁自评量表(SDS)和焦虑自评量表(SAS)评估患者的健康情况。结果:与对照组相比,观察组抑郁和焦虑评分均低于对照组,一般自我效能感评分和生活质量评分均高于对照组。结论:基于IMB模型的居家护理干预能够提升乳腺癌化疗患者的自我效能和生活质量,减轻焦虑和抑郁。 相似文献
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黄芪总黄酮对人正常骨髓间充质细胞的抗辐射损伤作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨黄芪总黄酮(total flavonoids of Astragalus;TFA)对60Coγ射线照射后人正常骨髓间充质干细胞(human mes-enchymal stem cells hMSCs)的辐射防护作用。方法:用MTT法检测直接接受照射的hMSCs及照射前经不同浓度TFA预处理的hM-SCs细胞存活率。利用琼脂糖电泳半定量分析直接照射后hMSCs和照射前TFA预处理的hMSCs的DNA凋亡梯带形成情况。分别于照射后不同时间收集细胞,流式细胞仪定量分析细胞凋亡率。结果:TFA的剂量在0.05~0.20mg/ml范围内与hMSCs的存活率呈良好的剂量-效应关系;照射后62、4、48h,各TFA照射组hMSCs较单纯照射组hMSCs凋亡率均低;琼脂糖电泳结果与流式分析结果相吻合。结论:TFA对人正常骨髓间充质细胞60Coγ射线照射后具有防护作用,其作用在一定范围内与TFA浓度成正比。 相似文献
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目的:研究黄芪总黄酮(Total flavonoids of astragalus,TFA)对受60Coγ射线损伤小鼠的辐射防护作用,为TFA的临床应用提供实验依据.方法:采用大剂量60Coγ射线一次性全身照射雌性昆明小鼠,制成放射损伤动物模型.小鼠在照射前3 d及照射后,以不同剂量的TFA连续灌胃14 d,观察受致死剂量60Co射线照射小鼠的30 d存活率及生存时间长短.同时,在低剂量照射组检测用药后小鼠体重、外周血指标、脾脏指数的变化.用HE染色观察脾脏的病理学改变.结果:TFA不仅能明显延长辐射损伤小鼠的平均存活天数,提高小鼠30 d存活率(P<0.05);而且能显著降低辐射损伤小鼠外周血白细胞的下降幅度、缩短其恢复所需时间(P<0.05);同时,TFA还能促进小鼠脾重指数的恢复,减轻辐射对小鼠脾脏的损伤程度,促进造血灶增生,加快造血功能恢复.结论:TFA具有较强的抗辐射作用,能显著提高受致死剂量60Co射线照射小鼠的存活率,降低辐射对小鼠外周血WBC和PLT及脾脏的损伤作用,其具体作用机制有待进一步深入研究. 相似文献