感染乙型肝炎病毒的育龄女性临床管理共识

正HBV母婴传播是导致慢性HBV感染的主要原因,即HBV阳性孕妇在妊娠期或分娩过程中将HBV传染给新生儿。如果对HBV阳性母亲所生新生儿不采取任何免疫预防措施,70%～90%的新生儿会感染HBV,而新生儿一旦感染,90%以上会发展为慢性HBV感染[1-2]。自1992年我国开始将乙型肝炎疫苗(hepatitis B vaccine,HepB)纳入免疫规划管理,特别是自2002年HepB免费和2005年新生儿HepB接种完全免费以来,我国儿童和一般人群HBV感染率明显下降[3]。2014年全国血清流行病学调查显     

半胱天冬氨酸蛋白酶-12小干扰RNA对小鼠肝细胞凋亡的阻抑

目的观察小鼠半胱天冬氨酸蛋白酶-12（caspase-12）基因特异性小干扰RNA（siRNA）构建的表达载体pRNAT-casp12对caspase-12基因的抑制及其对内质网应激介导的小鼠肝细胞凋亡的影响。方法以小鼠肝细胞株Hepa1-6为靶细胞，利用脂质体与重组质粒pRNAT-casp-2共转染，分别在转染24、48和72h后收集细胞，采用实时荧光定量PCR分析和Western印迹检测caspase-12的表达；利用毒胡萝b素（TG）诱导细胞，建立内质网应激介导的细胞凋亡模型，通过DNA梯带凝胶电泳检测，选出适合的诱导时间；TG诱导已转染了pRNAT—casp12的干扰组细胞后，以空质粒转染组为对照，利用Western印迹检测caspase-12蛋白表达水平的变化，通过DNA梯带凝胶电泳、流式细胞仪、Hoechst33258染色等方法检测细胞凋亡，观察caspase-12siRNA对细胞凋亡的影响。结果pRNAT—casp12转染细胞24、48和72h后，caspase-12mRNA的水平分别下降了45．6％、72．5％和59．5％；caspase-12蛋白表达下降了17．1％、37．3％和60．1％；2μmol／L TG处理细胞30h后，成功诱导细胞凋亡；与对照组相比，干扰组细胞经TG诱导后，caspase-12蛋白表达水平下降了54．6％，流式细胞仪检测发现早期调亡率下调了51．4％（P〈0．01）。结论小鼠caspase-12siRNA对Hepa1—6细胞caspase-12基因的表达具有显著的抑制作用，能够明显阻抑内质网应激介导的凋亡，有望发展成为新一代抗凋亡药物。     

IL-33及其受体ST2在D-GalN/LPS诱导的急性肝功能衰竭小鼠中的表达及意义

目的研究D-GalN/LPS诱导的急性肝衰竭小鼠中IL-33及其受体ST2的表达及意义。方法腹腔注射DGaIN(900 mg/kg)/LPS(10μg/kg)诱导急性肝衰竭小鼠模型。通过q-PCR、Westcrn印迹、ELISA、免疫组织化学染色等实验技术检测IL-33及其受体ST2在不同时间点的动态变化。结果急性肝衰竭小鼠肝内的IL-33 mRNA水平随着肝损伤加重不断增高,肝衰竭时上升至峰值,D-GalN/LPS诱导后7 h,肝组织表现为明显坏死。而肝内ST2L受体蛋白含量在DGalN/LPS诱导后3 h,未出现明显的肝细胞损伤前已显著升高,之后不断下降,到7 h肝衰竭时其水平降至最低。此外,外周血清中IL-33蛋白水平亦随时间持续升高,在7 h肝衰竭时达高峰,与IL-33 mRNA的动态变化相一致。然而血清sST2蛋白水平在0 h和3 h肝细胞损伤的早期无明显差异,但在5 h肝细胞损伤的中期却显著升高,之后又显著降低。免疫组织化学染色显示急性肝衰竭小鼠肝内IL-33来源于血管内皮细胞和肝血窦细胞核内。结论 IL-33及其受体ST2随时间的动态变化与急性肝衰竭的病情进展存在紧密联系,提示IL-33/ST2轴参与了急性肝衰竭的发生发展过程。     

肿瘤坏死因子-α介导凋亡肝细胞内胱门蛋白酶-3的表达

目的 研究小鼠暴发性肝衰竭（FHF）动物模型凋亡肝细胞中凋亡基因胱门蛋白酶（cas-pase-3)mRNA及蛋白的表达及意义。方法 尾静脉注射肿瘤坏死因子-α（TNF-α）于D-氨基半乳糖（GalN)致敏的BALB/c小鼠,造成暴发性肝衰竭模型。用脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口原位末端标记（ISEL）技术、电镜及琼脂糖凝胶电泳检测肝组织DNALadder观察肝细胞凋亡,分别用免疫组化和半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测凋亡基因caspase-3蛋白及mRNA表达情况。结果 肝细胞凋亡率分别为0.0%(1.5h),0.3%(3.5h),3.15%(6h)和3.19%(9h)。肝组织中caspase-3mRNA和蛋白表达与肝细胞凋亡率成正相关趋势,结论 在TNF-α介导的小鼠暴发性肝衰竭模型中,caspase-3蛋白和mRNA表达上调并激活肝细胞凋亡的级联过程,最终导致肝细胞凋亡和坏死。     

乙型肝炎肝硬化患者外周血单个核细胞Toll样受体2、4的表达

目的 探讨乙型肝炎(乙肝)肝硬化患者中Toll样受体(TLR)2、4表达与细胞因子的相关性.方法 采用随机数字表法随机收集35例乙肝肝硬化患者与35例健康对照者的静脉抗凝血.ELISA检测血TNF-α含量.分离两组外周血单个核细胞(PBMC),流式细胞仪检测PBMC表面TLR2、4表达.实时荧光定量PCR检测每份PBMC中TLR2、4 mRNA的表达水平.正态分布均数比较采用t检验和单因素方差分析,非正态分布数据采用Mann-Whitney U检验、Kruskal-Wallis H检验和Spearman相关分析.结果 肝硬化组的血TNF-α水平明显高于对照组(33.52 ng/L比6.07 ng/L,Z=6.584,P<0.01),且随着Child-Pugh评分的增加而升高.肝硬化组PBMC中TLR2阳性细胞率明显高于对照组(20.65%比12.04%,Z=-4.458,P<0.01),与血TNF-α水平存在正相关(r=0.448 3,P<0.05),且随着Child-Pugh评分的增加而升高.两组PBMC中TLR4阳性率差异无统计学意义.肝硬化组PBMC中TLR2/还原型磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA表达水平明显高于对照组(0.234 2比0.043 1,Z=-6.83,P<0.01),与血TNF-α水平存在正相关(r=0.411 1,P<0.05),且随着Child-Pugh评分的增加而升高.两组PBMC中TLR4 mRNA表达水平差异无统计学意义.结论 肝硬化患者PBMC中TLR2表达水平明显增高,与血TNF-α水平及肝硬化的严重程度呈正比,但TLR4表达水平无明显变化,提示在乙肝肝硬化患者中,是TLR2而非TLR4在肝硬化的进展过程中具有重要作用.     

Fibroscan在慢性乙型肝炎肝纤维化诊断中的作用及影响因素

目的探讨肝脏瞬时弹性超声成像(Fibroscan,FS)在评估慢性乙型肝炎肝纤维化中的作用及影响因素。方法选择上海瑞金医院感染科2009年1月至2011年12月慢性乙型肝炎(CHB)患者410例,运用FS检测肝脏硬度值(Stiffness值)。所有患者同期行经皮肝穿刺活组织检查,同时检测肝功能、血小板、凝血等指标。以肝活检结果为标准绘制FS工作特征曲线,计算受试者工作特征曲线下面积(AUROC),Stiffness值与Ishak评分比对,运用统计学方法进行分析。结果无肝纤维化(S0期)、轻度肝纤维化(S1～S2期)、中度肝纤维化(S3～S4期)和重度肝纤维化及肝硬化(S5期～S6期)患者Stiffness值(kPa)分别为5.45±1.44、7.01±2.42、9.23±3.00、16.87±6.77,对Stiffness值进行组间比较,差异有统计学意义(P<0.01)。Stiffness值与肝纤维化分期呈显著正相关(r=0.67812,P<0.01)。Fibroscan检测显著肝纤维化和肝硬化的AUROC分别为0.840和0.938,其中以Stiffness值8.050kPa作为显著肝纤维化的诊断界值,敏感度为60.3%,特异度为93.7%,阳性预测值为94.71%,阴性预测值为55.83%;以12.150kPa作为重度肝纤维化和肝硬化的诊断界值点,敏感度和特异度分别为75.9%和92.0%,阳性预测值和阴性预测值分别为61.11%和95.86%。逐步回归统计分析,Alb、PLT、AST、年龄、体质量对Stiffness值有影响。结论 Fibroscan评估CHB患者肝纤维化程度尤其是显著肝纤维化和肝硬化准确性高,在诊断与疗效评估中具有较好的应用价值。     

乙型肝炎相关肝衰竭抗病毒治疗研究进展

肝衰竭是由多种因素引起的严重肝脏损害,导致其合成、解毒、排泄和生物转化等功能发生严重障碍或失代偿,出现以凝血机制障碍、黄疸、肝性脑病和腹水等为主要表现的一组临床症候群[1].肝衰竭是临床常见的严重肝病症候群,以病情重、进展快、治疗难、费用高、病死率高为特征,是严重危害我国国民身体健康的疾病之一.近年来,随着对肝衰竭的研究不断深入,在诊断、预后判断和治疗方面已经取得了长足的进步,在很大程度上降低了肝衰竭患者的病死率.     

急性肝坏死大鼠NO水平的动态变化和作用

目的探讨一氧化氮（ＮＯ）在急性肝坏死大鼠模型中的浓度动态变化及其可能的作用机制．方法通过用化学药物促进或抑制急性肝坏死大鼠ＮＯ的合成，检测其外周血ＮＯ及ＡＬＴ，ＡＳＴ的浓度变化，并观察肝脏的病理变化．结果①急性肝坏死大鼠血清ＮＯ浓度６，１２，２４，４８ｈ显著高于正常对照（μｍｏｌ／Ｌ，９０±１３，１３７±３１，６６±１６，４４±１０ｖｓ１６±６，分别为Ｐ＜００１，Ｐ＜００１，Ｐ＜００１，Ｐ＜００５）；ＡＬＴ，ＡＳＴ也显著升高（ＡＬＴ，Ｕ／Ｌ，６９８±１０８，２０５６±６６８，８５８±２０８，１９６±３４ｖｓ３５±１３，Ｐ＜００１；ＡＳＴ，Ｕ／Ｌ，８０１±９４，３５７５±７１４，１２７２±２４２，１７５±１２７ｖｓ６５±２２，Ｐ＜００１）；②用ＮＡＭＥ抑制ＮＯ合成，降低了急性肝坏死大鼠外周血ＮＯ浓度，却显著升高了ＡＬＴ，ＡＳＴ浓度．③急性肝坏死大鼠应用ＮＯ合成底物后，与阳性对照组相比，未见ＮＯ显著升高，ＡＬＴ，ＡＳＴ也无显著变化．结论ＮＯ对ＤＧａｌｎ／ＬＰＳ诱导的急性肝坏死大鼠肝组织具有保护作用．     

乙型肝炎慢加急性肝衰竭前期的临床特征及预后评分模型的建立

目的探讨乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)前期患者的临床特征,并建立相应的预后评分模型。方法利用HBV-ACLF中国诊断标准研究(COSSH-ACLF)队列,回顾性分析725例乙型肝炎相关慢加急性肝功能障碍(HBV-ACHD)患者的临床特征,采用多因素COX回归分析90 d预后的相关独立危险因素并建立预后评分模型,并利用内部500例和外部390例HBV-ACHD患者进行验证。结果在725例HBV-ACHD患者中,男性为主(76.8%),96.8%患者有肝硬化基础,并发症以腹水(66.5%)多见,器官衰竭以凝血功能衰竭(4.1%)为主,90 d病死率为9.2%。多因素COX回归分析得出,总胆红素(TBil)、白细胞计数(WBC)、碱性磷酸酶(ALP)是HBV-ACHD患者90 d病死率的最佳预测指标,并建立评分模型COSSH-ACHDs=0.75×ln(WBC)+0.57×ln(TBil)-0.94×ln(ALP)+10,其受试者工作特征曲线下面积(auROC)显著高于终末期肝病模型(MELD)、MELD-Na、CTP及CLIF-C ADs(P<0.05),500例内部随机选择组和390例外部验证组均验证了类似结果。结论HBV-ACHD患者是一组以肝硬化失代偿为主、合并少量器官衰竭的人群,其90 d病死率为9.2%,COSSH-ACHDs具有更高的预测HBV-ACHD患者90 d预后的效能,为临床早期诊治提供循证医学依据。     

Toll样受体:免疫治疗的新靶位

Toll样受体 (Toll likereceptors ,TLRs)是新近发现的模式识别受体 ,能识别病原相关分子模式 ,启动炎性应答通路而调节或控制先天与获得性免疫。以TLRs为靶位 ,抑制或激活TLRs表达或调控TLRs信号通路 ,可能是炎性免疫性疾病新的治疗策略