β-细辛醚对肠癌细胞HT-29生物行为学的影响及机制

目的观察β-细辛醚对肠癌细胞株体外增殖抑制作用及其机制。方法①MTT法观察β-细辛醚对多种肿瘤细胞株的增殖的影响。②Transwell小室法,观察β-细辛醚对肠癌细胞株HT-29侵袭的影响;③粘附实验观察β-细辛醚对HT-29粘附能力的影响;④AnnexinV/PI双染法研究β-细辛醚对肠癌细胞株HT-29凋亡的诱导作用;⑤流式细胞仪检测β-细辛醚对肠癌细胞株HT-29细胞周期的影响;⑥JC-1荧光探针法检测线粒体膜电位水平的改变;⑦流式细胞仪检测β-细辛醚对肠癌细胞株HT-29活性氧水平的改变。结果①β-细辛醚对多种肿瘤细胞株有不同程度的抑制作用(P0.05)。②β-细辛醚作用肠癌细胞HT-29后,细胞的侵袭和粘附能力明显降低(P0.05)。③β-细辛醚作用肠癌细胞株HT-29后出现明显的早期凋亡及细胞周期明显改变。④β-细辛醚作用肠癌细胞株HT-29后线粒体膜电位降低及内活性氧水平升高。结论①β-细辛醚对肠癌细胞有明显的增殖抑制作用,能降低肠癌细胞HT-29的粘附和侵袭能力。②β-细辛醚可诱导肠癌细胞凋亡,改变细胞周期,其机制可能与线粒体凋亡途径有关。     

桂皮醛诱导人胃癌BGC-823 细胞凋亡及相关分子机制的探讨

目的：探讨桂皮醛对人胃癌BGC-823 细胞增殖、凋亡及其相关分子机制。方法：采用MTT 法检测桂皮醛对人胃癌BGC-823 细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测桂皮醛诱导的凋亡,Hoechst 33342染色法观察凋亡形态的变化;RT-PCR 法检测桂皮醛对人胃癌BGC-823 细胞相关凋亡基因的影响;Western Bolt 方法检测桂皮醛对人胃癌BGC-823 细胞相关凋亡蛋白的影响。结果：与对照组相比,桂皮醛有抑制人胃癌BGC-823 细胞增殖的作用（P<0.01）;桂皮醛能诱导凋亡的产生;桂皮醛能下调凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-xL Survivin,上调凋亡相关基因Bax、Bak;桂皮醛能下调凋亡相关蛋白Bcl-2、Procaspase-3,上调凋亡相关蛋白Bax。结论：桂皮醛对人胃癌细胞BGC-823 的增殖具有抑制作用并能诱导凋亡,可能与内源性凋亡途径的激活有关。     

单细胞反转录酶聚合链式反应技术对胰岛干细胞标记物胰岛素促进因子的鉴别

目的：利用干细胞分化获得胰岛细胞后目前还没有较理想的鉴别方法，实验通过单细胞反转录酶聚合链式反应技术鉴别胰岛干细胞标记物胰岛素促进因子，以建立一种检测胰岛干细胞的有效方法。方法：实验于2001-10／2005-08在加拿大多伦多大学和南京大学附属鼓楼医院完成。①将收集培养2～4周的单个胰岛干细胞用于实验。②胰岛活性测定实验中，选择1&;#215;10^6分化的胰腺干细胞，用低浓度和高浓度葡萄糖分别刺激1～4h，检测12，14，24d培养液中胰岛素的浓度。③单细胞反转录酶聚合链式反应检测胰岛素促进因子基因实验中，选择12个单个胰腺干细胞进行检测，另取12个单个未分化的干细胞作为对照。聚合链式反应体系为20μL。聚合链式反应扩增反应条件为94℃预变性4min，94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸2min条件下循环35次。聚合链式反应产物以质量浓度为20g/L的琼脂糖凝胶电泳。结果：①分化的胰腺干细胞培养液中胰岛素浓度的检测：培养12，14，24d时培养液中胰岛素的浓度分别为42．6，68．2，73．5IU／L，随着时间的延长，呈逐渐升高的趋势。②单个胰岛干细胞胰岛素促进因子反转录酶聚合链式反应检测结果：12个单个胰岛干细胞中有7个胰岛素促进因子表达呈阳性，而作为对照的12个未分化干细胞均未检出，两者差异显著（P〈0．001）。结论：采用单细胞反转录酶聚合链式反应检测方法为胰腺干细胞的鉴定和纯化提供了技术保障，证明单细胞反转录酶聚合链式反应是一种检测胰腺干细胞标记物的有效方法。     

大鼠胚胎胰腺发育后期基因表达谱的研究

目的:研究大鼠胚胎发育至第15.5和18.5天胰腺基因表达谱,探讨特异性基因表达在正常内外分泌胰腺发育及糖尿病中所起的作用。方法:①实验于2003-09/2004-06在南京医科大学生化与分子生物学实验室完成。选用SD大鼠,雌雄各10只,将雌雄鼠按1∶2合笼,分别于胚胎发育至第15.5和18.5天,剖腹取出孕子宫,分离胚胎。②应用显微分离及提取技术获得胚胎发育不同阶段胰腺组织并提取RNA,采用高密度寡核苷酸芯片(Affemetrix芯片)对胚胎发育至第15.5天和第18.5胚胎胰腺进行基因转录水平分析,用生物信息学方法分析具体基因的表达情况。结果:胚胎发育至第18.5天与胚胎发育至第15.5天相比,差异表达2倍以上的基因共1319条。其中表达上升的基因664条,表达下降的基因655条,功能已知基因占63%,表达序列标识占37%。控制胰腺细胞分化的转录因子明显下调,与功能代谢相关的转录因子有上升趋势,内外分泌酶类、激素类表达有上升趋势,骨架蛋白有下降趋势,与激素、酶类分泌相关的因子基本无表达。结论:大鼠胚胎胰腺发育至第15.5～18.5天,内分泌典型胰岛结构及外分泌腺泡、导管结构已基本形成,功能细胞分化基因表达下降,而细胞代谢调节功能基因表达上升,因此,在大鼠胚胎发育至第15.5天胰腺,功能细胞的代谢调节功能开始完善。     

HBsAg和抗HBs抗体同时阳性患者病毒学特征分析

摘要：目的：分析HBsAg和抗HBs抗体同时阳性的HBV感染者病毒学特征及其临床意义。 方法：总计13 080例HBsAg阳性病例中,HBsAg与抗HBs抗体同时阳性476例,分析资料完整的113例患者（研究组）HBV血清标志物（HBVM）和HBV DNA定量、抗HBc IgM抗体及ALT结果,并与76例普通HBV感染者（对照组）进行比较。 结果：研究组与对照组在年龄、男女性别比及HBeAg阳性率间差异无统计学意义。研究组HBsAg水平显著低于对照组(P<0.05)。研究组抗HBc IgM抗体阳性率为30.9%,抗HBc IgM抗体阳性患者的血清HBsAg与HBV DNA水平、HBeAg阳性率及ALT水平均显著高于抗HBc IgM抗体阴性患者(P<0.05)。 结论：HBsAg与抗HBs抗体同时阳性感染者HBsAg水平显著低于普通感染者,提示患者体内的抗HBs抗体可能仍起到一定作用;约30%患者可能处于HBV急性发作状态,应对其进行随访,观察疾病转归。     

中药复方防治肿瘤化疗后胃肠道反应概述

综述了中药方剂小半夏汤、小半夏加茯苓汤、枳实消痞汤、参苓白术散、旋覆代赭汤等,单独使用或与西医止吐药物联合运用,防治肿瘤化疗后的胃肠道反应。     

健脾化瘀方对胃癌细胞SGC-7901凋亡和周期的影响

目的:观察健脾化瘀方体外对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法:①采用MTT法观察不同浓度健脾化瘀方体外对人胃癌细胞株SGC-7901增殖的抑制作用;②用Annexin V/PI荧光双染法检测健脾化瘀方诱导肿瘤细胞进入凋亡的影响;③用流式细胞仪检测健脾化瘀方对SGC-7901细胞周期的阻滞效应。结果:①健脾化瘀方能抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖,随着药物浓度的增大以及作用时间的延长,其对细胞的抑制率也明显增强,呈现剂量及时间依赖性。②当2mg/ml和4mg/ml健脾化瘀方作用于人胃癌SGC-7901细胞48h可显著诱导细胞凋亡的产生。③细胞周期方面,健脾化瘀方作用于人胃癌细胞SGC-7901后G2/M期比例与阴性对照组相较显著上升,G0/G1期稍有上升,而S期比例下降,表明细胞被阻滞于G2/M期。结论:健脾化瘀方可明显抑制人胃癌细胞SGC-7901的增殖作用并能够诱导该细胞凋亡,改变细胞周期。     

蜂毒素对人胃癌细胞株BGC-823凋亡及其细胞周期的影响

目的：观察蜂毒素体外对人胃癌细胞株BGC-823增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法：采用MTT法观察不同浓度的蜂毒素（32,16,8,4,2μg/mL）体外对人胃癌细胞株BGC-823增殖的影响,并用流式细胞仪检测其诱导的细胞凋亡和周期阻滞效应。结果：①与对照组比较,蜂毒素有抑制人胃癌细胞株BGC-823增殖的作用（P〈0.01）,随着药物浓度的增大,其对细胞的抑制率也明显增大,呈现剂量依赖性。②蜂毒素浓度从4μg/mL开始,即可诱导细胞产生凋亡,随着剂量的增加诱导凋亡的效果更加明显。③在细胞周期方面,与阴性对照比较,蜂毒素作用24小时后S期细胞比例上升,而G0/G1期比例明显下降,蜂毒素浓度达到16μg/mL时G0/G1期前出现明显的亚二倍体区。结论：蜂毒素对人胃癌细胞株BGC-823的增殖具有抑制作用,且能够引起该细胞的凋亡及改变其细胞周期。     

同基因造血干细胞移植治疗EAE小鼠脾脏Treg细胞的变化

目的 探讨Treg细胞在实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)中变化和同基因造血干细胞移植治疗EAE小鼠巾的作用.方法 以MOG35-55免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型,分为病鼠-病鼠移植组、正常鼠-病鼠移植组和病鼠对照组.两移植组由EAE鼠和正常鼠做供体行移植后分3组,分别于移植后40d、80d、120d处死;病鼠对照组分4组,于移植前1d、移植后40d、80d、120d处死.流式细胞仪测定小鼠脾脏Treg细胞比例;实时定量聚合酶链反应测定脾脏Foxp3 mRNA水平;western blot法测定Foxp3蛋白水平.结果 移植前的病鼠对照组脾脏Treg细胞(3.3%±1.6%)较正常对照组(6.8%±1.7%)降低(P<0.05),移植后80d,两移植组Treg细胞(20.12%±2.67%、16.34%4±1.48%)上升至峰值(P<0.05);移植前的病鼠对照组Foxp3 mRNA相对表达量为0.48±0.19,移植后40d、80d、120d,两移植组Foxp3 mRNA均高于病鼠对照组(P<0.05);Foxp3蛋白水平为:移植前的病鼠对照组<正常对照组<移植后120d的移植组.结论 Treg细胞的数量减少和功能缺失可能与EAE发生发展有关;其数量增加和功能恢复可能是同基因造血干细胞移植治疗EAE的机制之一.