RNA干扰沉默DDX1基因的胶质瘤细胞系的建立

目的以短发夹核糖核酸(RNA)慢病毒载体建立DEAD-box解旋酶1(DDX1)基因稳定沉默的胶质母细胞瘤细胞株。方法针对DDX1基因设计2组短发夹RNA序列,退火形成的双链DNA与线性p LKO. 1-puro-e GFP质粒载体连接,构建慢病毒质粒载体,测序正确后进行慢病毒包装;将获得的重组慢病毒转染人胶质瘤U251细胞,转染细胞分为对照组和干扰组,对照组转染对照慢病毒(sh NC);干扰组转染慢病毒载体p LKO. 1-puro-e GFP-shRNA-DDX1(sh DDX1-1,sh DDX1-2)。用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,进行嘌呤霉素抗性筛选;用实时定量聚合酶链式反应(PCR)、蛋白免疫印迹法检测转染后U251细胞中DDX1 mRNA及蛋白表达。结果测序证实成功构建对照组和靶向DDX1基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,病毒悬液滴度均> 3×10~8TU·m L^-1。荧光显微镜下观察显示,对照组和干扰组转染效率高于85%;嘌呤霉素筛选后,干扰组sh DDX1-1、sh DDX1-2中DDX1 mRNA的抑制率分别为85. 44%和71. 66%,DDX1蛋白表达水平分别下降了99. 1%和96. 7%,均较对照组(100%)显著降低(均P <0. 01)。结论成功构建沉默DDX 1基因的胶质瘤细胞系,为研究DDX1对胶质瘤生物学行为的影响提供细胞模型。     

卒中单元与普通病房的早期疗效比较

目的:研究卒中单元的早期疗效。方法:2001-12/2003-01住院的脑卒中患者,随机进入卒中单元和普通病房,共392例。主要观察指标是生活能力评价(BI)、神经功能评价(NIHSS)、社会功能评价(OHS),分析卒中单元的效果。结果:出入院前后的评分:BI差值卒中单元组为(20.00±24.36)分,高于普通病房组(10.63±23.59)分,差异有非常显著性意义(t=3.598,P=0.000);NIHSS差值卒中单元为(-2.01±6.61)分,普通病房为(0.55±7.44)分,差异有非常显著性意义(t=3.598,P=0.000);OHS差值卒中单元为(-0.74±1.04)分,普通病房为(-0.28±0.98)分,差异有非常显著性意义(t=-4.441,P=0.000)。康复比例增加(P=0.000),住院并发症明显减少(P=0.000)。结论:相比普通病房,卒中单元治疗的患者能明显提高早期日常生活能力,减少神经功能缺损,提高回归社会的能力。     

当归四逆汤对小儿开胸术后血浆IL-6的影响及镇痛效果

目的探讨当归四逆汤对小儿开胸术后血浆IL-6水平的影响及镇痛效果。方法回顾分析我院2005年4月-2008年6月收治的普胸开胸手术76例患儿的诊治经过,重点分析术后镇痛效果。按术后镇痛方法分为两组,芬太尼组（A组,n=34）和芬太尼＋当归四逆汤组（B组,n=42）,术后1、6、12、24和48h分别抽血测血浆IL-6水平,计两组芬太尼的用量,观察体温（T）、脉搏（P）、呼吸（R）、平均动脉压（MAP）、经皮血氧饱和度（SpO：）水平,并观察两组患儿镇痛后恶心、呕吐、皮疹等不良反应发生情况。结果两组患者术后1小时和48小时血浆IL-6水平比较差异无统计学意义,而术后6小时、12小时和24小时IL-6水平有明显差异,两组患者静滴芬太尼用量具有显著性差异,在不良反应方面B组明显少于A组。结论当归四逆汤镇痛效果确切,不良反应少,可应用于小儿开胸术后镇痛。     

iPSCs在心律失常疾病体外模型方面的研究进展

心律失常严重威胁人类健康,许多遗传性心律失常由基因突变引起。以患者的诱导型多能干细胞（iPSCs）源性的心肌细胞作为体外模型,可为研究心律失常的发病机制提供新的思路。本文主要对iPSCs源性诱导型心肌细胞的产生过程以及心律失常患者诱导iPSCs 心肌细胞在长QT综合征、儿茶酚胺依赖性室性心动过速、致心律失常性右室心肌病等疾病模型的研究进展进行了综述。     

问题导向型教学模式在心血管药理学中的应用与探索

问题导向型教学模式是一种以学习者为中心的教学和学习模式,有利于挖掘学生的潜力,提高学生终生学习的能力。通过近6年来实践,经渐进式、分层次、整合式课程PBL教学三阶段改革历程,逐渐探索出了一条适合心血管药理学教学的新途径。通过多次问卷调查和分析,该门课程的教学效果明显提高。学生发现问题、自主学习能力增强,查阅参考文献独立解决问题的能力明显提高,投入科学研究的兴趣改善最为明显。     

LDL对小鼠成骨细胞的影响

目的 研究不同浓度及同一浓度不同作用时间的LDL对小鼠成骨细胞增殖分化及LRP5、DKK1表达的影响,探讨Wnt信号通路是否参与了LDL对成骨细胞增殖分化调节。方法在小鼠成骨细胞株MC3T3-E1培养液中加入0.05、0.1、0.2 mg/ml的LDL,分别培养24、48、72 h后应用CCK8检测其对成骨细胞增殖的影响,采用ELISA法检测成骨细胞骨钙素水平,分析LDL对成骨细胞分化的影响;采用荧光定量PCR方法检测LDL对成骨细胞LRP5、DKK1基因表达水平的影响。结果在LDL浓度为0.05 mg/ml 24 h时,明显抑制成骨细胞的增殖,与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。LDL对成骨细胞增殖的作用呈剂量及时间依赖性。ELISA实验结果显示LDL明显抑制成骨细胞中的骨钙素表达,与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。LDL对成骨细胞骨钙素表达的作用在一定程度上具有剂量及作用时间依赖性。荧光定量PCR实验结果显示LDL在48 h浓度为0.05 mg/ml时明显下调成骨细胞中的LRP5 mRNA表达水平,显著上调DKK1 mRNA表达水平,与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 LDL能够显著抑制成骨细胞的增殖和分化,这可能与wnt信号通路中LRP5及其抑制剂DKK1基因表达有关。     

淫羊藿甙促成骨细胞中Cbfa1表达的信号通路机制

目的 观察淫羊藿甙对成骨细胞中核心结合因子α1(cbfa1)蛋白和活性表达的调节,以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是否参与此过程.方法 用酶消化法分离24 h内新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞,进行原代培养,经鉴定后用于实验.设立对照组、淫羊藿甙组(10 ng/ml)以及雌二醇组(10-8mol/L),分别用药物干预24 h,抽提核蛋白.利用转录因子活性ELISA法检测成骨细胞cbfa1与DNA结合的活性,Western印迹法检测成骨细胞中cbfa1蛋白的表达.将MAPK信号转导通路抑制剂U0126和SB203580分别与淫羊藿甙或雌二醇共同加入培养液中,培养24 h,同上法检测Cbfa1活性和Cbh1蛋白表达量的变化.结果 淫羊藿甙和雌二醇均可以促进成骨细胞中Cbfa1活性和Cbh1蛋白表达量的提高(P<0.05).加入细胞外信号调节激酶(ERK)途径的抑制剂UO126后,可以下调淫羊藿甙和雌二醇对成骨细胞中Cbfa1活性和Cbh1蛋白表达量的上调作用(P<0.05).加入p38MAPK途径的抑制剂SB203580后,也可以下调淫羊藿甙和雌二醇对成骨细胞中Cbfa1活性和Cbh1蛋白表达量的上调作用(P<0.05).结论 淫羊藿甙和雌激素均可上调体外培养大鼠成骨细胞转录因子Cbh1的蛋白表达和结合活性.MAPK信号转导通路抑制剂可以部分阻断淫羊藿甙和雌激素对成骨细胞转录因子Cbh1蛋白表达和活性的上调作用,说明MAPK可能是淫羊藿甙发挥抗骨质疏松作用的信号转导通路之一.     

MAPK信号通路参与17β-雌二醇对维生素D受体表达的调控

目的探讨17β-雌二醇对成骨细胞中维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)表达的调节,以及丝裂原激活的蛋白激酶(motigen-activated protein kinase,MAPK)信号通路是否参与该过程。方法小鼠前成骨细胞MC3T3-E1亚克隆14用添加10%小牛血清的无酚红α-MEM培养液培养,在干预细胞时,换为不含血清的无酚红α-MEM培养液。用实时荧光定量RT-PCR法和蛋白质印迹法检测17β-雌二醇干预前后细胞中VDR基因和蛋白的表达,用蛋白质印迹法检测17β-雌二醇干预前后细胞中MAPK信号通路的激活。然后用MAPK信号通路阻断剂U0126和17β-雌二醇同时处理细胞,观察VDR表达的变化。结果17β-雌二醇作用72 h可以上调MC3T3-E1细胞中VDR基因和蛋白的表达;17β-雌二醇可在15min内激活ERK信号通路,并持续到60 min,但是不能激活JNK和p38信号通路;应用U0126后,17β-雌二醇对成骨细胞中VDR表达水平的上调作用可被部分抑制。结论17β-雌二醇可上调成骨细胞中VDR的表达,并能快速激活成骨细胞中MAPK信号通路;MAPK信号通路参与了雌激素上调VDR表达的过程。     

PMA诱导的THP-1细胞分化过程中MMP-9及MMP-2的表达与细胞侵蚀性的关系

目的：应用单核细胞THP-1株建立单核细胞向巨噬细胞分化的体外模型，并探讨THP-1细胞分化过程中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达与细胞侵蚀性的关系以及巨噬细胞住类风湿关节炎(RA)发病机制中的作用。方法：用乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞向成熟的单核-巨噬细胞分化后，采用倒置显微镜观察分化细胞的形态学变化。用流式细胞术测定细胞表面特异性抗原CD14的表达。采用明胶酶谱(gelatin—zymogram)分析法测定分化前后THP-1细胞中MMP-9和MMP-2的表达。采用侵蚀性小室(Boyden Chamber-Matrigel人工重组基底膜)法，观察分化前后的THP-1细胞侵蚀性的变化。结果：THP-1细胞向单核-巨噬细胞分化过程中，细胞由分散、悬浮转变为黏附、贴壁，且出现CD14的高表达分化后的THP-1细胞中MMP-9和MMP-2的表达明显增多，侵蚀性明显增强结论：建立了THP-1单核细胞的体外分化模型。该细胞在分化过程中，MMP-9和MMP-2的表达增多、侵蚀性增强，为巨噬细胞在RA发病机制的作用提供了一定的实验依据。     

浅谈护理工作中如何减少护患矛盾

随着社会的进步、法律制度的逐步健全，人们的法制观念和自我保护意识不断增强，病人对涉及自身利益的医疗护理过程倍加关注。护理人员在对患者实施护理的过程中，潜在着诸多问题，如果处理不好，往往会引起护患矛盾甚至意想不到的后果。因此，在临床工作中，强化医务人员的素质教育，落实各项行为规范和制度，注重语言艺术的应用，营造平等、和谐的护患关系是减少护患矛盾和纠纷发生的关键。[第一段]