（五）胚胎解冻复苏及移植知情同意书

人类辅助生殖技术的诞生,使得成千上万的不孕不育夫妇实现了生育自己后代的愿望。随着相关学科的发展,人类辅助生殖技术及其衍生技术也得到了迅速发展。相对于其他的医疗技术,该技术的特殊性是采用医学方法在体外对配子和胚胎进行以生殖为目的的操作,因此,所涉及的医学伦理问题复杂,并存在一定的医疗风险。知情同意书是患者表示自愿进行医疗治疗的文件证明。规范的知情同意书必须符合“完全告知”的原则,采用患者能够理解的文字和语言,使患者能够“充分理解”,以配合医生实施适宜的治疗方案。在实施人类辅助生殖技术的过程中需要与不孕不育夫妇进行充分的沟通与讨论,获得不孕不育夫妇的理解和支持,并签署知情同意书。同时,实施人类辅助生殖技术还必须遵守保护后代的伦理原则,遵守相关法律规章制度,不违背公序良俗和社会公德等。为此,中华医学会生殖医学分会充分征求生殖医学、伦理学、管理学、法理学、社会学等各领域专家和群众代表的意见,针对人类辅助生殖技术的特殊性,逐渐制定一套人类辅助生殖技术知情同意书的推荐范本。此期推出《胚胎解冻复苏知情同意书》、《胚胎冷冻保存知情同意书》和《植入前胚胎遗传学诊断知情同意书》。因为,目前人类辅助生殖技术...     

常规体外受精失败后行补救性卵胞质内单精子注射的临床总结

目的回顾分析常规IVF受精完全失败在临床中的发生情况及受精失败后应用补救性卵母细胞内单精子注射（ICSI）的临床结局。方法总结1999年5月-2009年5月,在我中心行常规IVF患者中,受精完全失败的发生情况。回顾性分析了2004年1月-2009年5月,因受精完全失败行补救性ICSI后的临床结局。结果1999年至2009年5月,我中心共行常规IVF8359个周期,其中,受精完全失败232个周期,发生率为2．78％。2004年1月至2009年5月,共184个周期受精完全失败,资料完整,对其中115个周期共838个MII期卵子行补救性ICSI,其受精率、卵裂率与优质胚胎率分别为71.0％、93．78％和51．79％;临床妊娠率为11％,获得活产儿5个。结论补救性ICSI能获得较高的受精率和卵裂率,降低周期取消率,但并没有明显增加活产儿出生数,改善妊娠结局。     

选择性减胎术处理4胎、3胎早期妊娠

对两例由于体外受精与胚胎移植助孕术后产生的４胎、３胎妊娠，并于孕期１１周行减胎术，使用８超指引经腹途径选择终止妊娠胎儿心搏区内注射１５％ＫＣｌ，２例均保留双胎妊娠，１例于妊娠３７周分娩２个健康婴儿，另１例孕３４＋３周剖宫产分娩２个活婴儿     

靶向SMPD1基因的RNA干扰对人成纤维细胞凋亡的保护作用

目的】以人包皮成纤维细胞（HFF）为模型,通过系统比较针对不同靶点的小干扰RNA（siRNA）对酸性鞘磷脂酶1（SMPD1）基因的沉默效果,筛选获得最有效的小干扰RNA序列,同时观察沉默SMPD1对细胞凋亡的保护作用。【方法】设计合成三对靶向SMPD1基因的小干扰RNA作为实验组,同时设立阴性对照组和脂质体组（lipofectamine 2000）,瞬时转染原代培养的HFF细胞,采用荧光定量RT-PCR法及Western blot测定SMPD1表达抑制情况,并用化疗药物丝裂霉素诱导细胞凋亡,MTT法检测siRNA转染对细胞的保护作用。【结果】小干扰RNA1,2,3对SMPD1基因mRNA的抑制效率分别为96.3%,39%,63.2%,以siRNA1最高,最佳浓度为50nmol/L,最佳作用时间为48h。SMPD1蛋白在48h出现沉默效果,96h开始恢复。50nmol/L的siRNA1可以有效抑制化疗药物丝裂霉素引起的细胞凋亡,细胞存活率为73.8%,与对照组存活率65.4%比较差异具有统计学意义。【结论】三对siRNA均具有一定的靶基因沉默效果,其中siRNA1效果最佳,沉默效率达到96.3%;靶向SMPD1基因的siRNA能有效抑制人成纤维细胞的凋亡。     

卵子第一极体形态与胚胎形态和临床妊娠关系分析

【目的】了解卵子第一极体形态与胚胎形态和临床妊娠的关系。【方法】对因男性因素不育的 91例患者进行单精子卵胞浆内注射 (ICSI)治疗 91个周期 ,进行ICSI操作时对卵子第一极体形态评定 ,胚胎移植当天对胚胎形态进行评定 ,胚胎移植后确定临床妊娠 ,分析卵子极体形态与胚胎形态和临床妊娠之间的关系。【结果】随着极体形态不规则化 ,取卵后第 3天胚胎发育≥ 6个细胞的胚胎比例和碎片 (2 0 %的胚胎比例呈下降趋势 ;使用射出精进行单精子卵胞浆内注射的 74例患者妊娠组中移植的 1级和 2级极体胚胎总比例显著高于非妊娠组 (P <0 0 5 ) ,且在 <35岁患者组中随移植胚胎中 1、2级极体胚胎数目的增多 ,临床妊娠率和多胎妊娠率增高。在使用附睾精和睾丸精患者中 ,妊娠组移植的 1级和 2级极体胚胎比例高于非妊娠组 ,但不具统计学差异。【结论】对卵子极体评定有助于选择好质量的胚胎进行移植。     

生殖医学中遗传学研究进展

近年来，遗传学和分子生物学在生殖医学领域中越来越重要，同时，辅助生育技术(ART)如体外受精-胚胎移植(IVF-ET)技术、显微操作技术，特别是在此基础上发展起来的植入前遗传学诊断技术(Preimplantation genetic diagnosis，PGD)，为进一步理解不孕、受精、胚胎发育过程中的遗传学机制、有效的预防遗传病患儿的出生提供了条件。阐述生殖医学与遗传学多方面的相互作用，特别是ART中可能的遗传风险及在防止遗传病中的应用潜能。     

雌激素影响卵巢癌细胞系COC1顺铂耐药的相关机制

目的研究雌激素对顺铂诱导卵巢癌细胞系COC1和COC1／DDP凋亡的影响。方法运用细胞培养、MTT、原位标记法、流式细胞术和免疫组化等方法，采取雌激素预先作用卵巢癌COC1和COC1／DDP细胞16h，随后与顺铂共同培养诱导凋亡方式，动态地观察雌激素对顺铂诱导这两个细胞系凋亡影响和此过程中细胞周期分布和p53蛋白表达的改变。结果雌激素促进顺铂诱导的COC1和COC1／DDP细胞凋亡．引起细胞周期由G2到S期的转变，p53蛋白对雌激素作用无明显影响。结论处于细胞周期顺铂不敏感期的卵巢癌细胞可能与其耐药有关，雌激素可增加耐药的COC1／DDP细胞顺铂敏感性。     

人卵巢组织两种超低温冻存方法的研究

【目的】探索两种人卵巢组织冷冻方案用于生殖细胞保存的效果。【方法】活检卵巢组织来自15名经知情同意的手术患者。组织被随机分配到新鲜组、玻璃化冷冻组和慢速冷冻组。观察和比较各组卵巢组织冻融后的原始卵泡形态完整率,并通过体外培养系统测定培养液中的雌二醇和孕酮水平,观察和比较冻融后卵巢组织内分泌功能。【结果】本研究中新鲜组、慢速冻融组和玻璃化冻融组的原始卵泡形态完整率分别是97.6%、72.6%和80.3%。两冻融组与新鲜组相比明显下降(P<0.001),而在两冻融组间差异并无统计学意义(P=0.237)。在体外组织培养期间,两种冻融卵巢组织都能持续分泌雌二醇和孕酮,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】本研究中两种人类卵巢组织超低温冷存的方法是可行的,可适应不同需要。     

用全染色体涂抹探针进行卵母细胞第一极体荧光原位杂交

【目的】建立用全染色体涂抹探针（WCP）对卵子第一极体进行荧光原位杂交（FISH）检测染色体的方法。【方法】收集单精子卵胞浆内注射（ICSI）中不成熟卵母细胞经体外培养成熟和常规试管婴儿（IVF）中未能成功受精的成熟卵母细胞，活检第一极体，固定后行13、14号染色体的全染色体涂抹探针荧光原位杂交。活检后，一部分卵母细胞固定行FISH以分析卵子自身的13、14号染色体，其余行ICSI受精，观察受精和卵裂情况。【结果】共获得成熟母细胞93个，成功活检85个，成功固定78个，共29个第一极体处于分裂中期，均有FISH结果。卵母细胞体外培养成熟后立即取极体进行固定，90．5％（19／21）的极体处于分裂中期，而取卵后30-48h和72h后活检的第一极体处于分裂中期的比例分别为27．3％（6／22）和11．4％（4／35），3组相比有统计学差异（P〈0．01）。11个卵母细胞同时获得了极体和相对应卵细胞的FISH结果，其中10个极体和相对应的卵细胞分别有1条13，14号染色体，剩余1个卵母细胞的极体有2条14号染色体和1条13号染色体，相对应的卵细胞仅有1条13号染色体，二者互补。活检后行ICSI受精的卵母细胞受精率为78．6％（11／14），优质胚胎率45．5％（5／11）。【结论】全染色体涂抹探针对卵子第一极体进行遗传分析可以有效、准确地推测相对应卵母细胞的染色体构成，从而应用于女性染色体易位患者的植入前遗传诊断。     

体外受精-胚胎移植后发生异位妊娠17例临床分析

目的 探讨体外受精－胚胎移植后异位妊娠的发生率、高危因素及诊断、治疗方法。方法 对我院1998年3月至1999年12月接受体外受精－胚胎移植治疗后妊娠的432例资料进行回顾性分析。结果 432例中宫内妊娠415例,异位妊娠17例（包括宫内外同时妊娠4例）,异位妊娠发生率为3．9％。其中因输卵管病变发生异位妊娠14例（82．4％）,非输卵管病变发生异位妊娠3例（17．6％）。年龄、促排卵方案及移植胚胎的时间与异位妊娠的发生无关。结论 异位妊娠的发生与输卵管病变有关,妊娠早期测定β-人绒毛膜促性腺激素（β-hCG）和行B超监测,有利于异位妊娠的早期诊断和治疗。