bcr-abl基因真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达

 目的　构建慢性粒细胞白血病bcr-abl融合基因的真核表达载体,并在哺乳动物细胞COS-7中高效表达。方法　提取慢性粒细胞白血病K562细胞的RNA,经RT-PCR技术扩增得到bcr-abl基因后,将其克隆入真核表达载体pEGFP-N3中,并进行PCR和酶切鉴定。鉴定为阳性的克隆,再进一步进行测序分析。将构建成功的真核表达载体转入COS-7细胞中进行瞬时表达。结果　反转录PCR扩增后的产物,经琼脂糖凝胶电泳可以在约874 bp处看见一特异性的条带,序列分析证明扩增产物与Gene Bank中的bcr-abl基因序列相同。将pEGFP- bcr-abl真核表达载体转入COS-7细胞后,经RT-PCR、Western blotting检测证明表达产物正确。结论　成功构建了含有bcr-abl融合基因的真核表达质粒,从而为进一步研究其结构和功能,寻找CML诊疗的新方法奠定了基础。     

白癜风(进展期)综合疗法的疗效观察

白癜风是常见的皮肤病之一,我们对皮肤科门诊近３年接诊２００多例白癜风（进展期）患者,予以口服小剂量皮质类固醇激素为主的综合疗法,现将资料完整的４５例疗效报告如下。临床资料４５例患者中,男２６例,女１９例,年龄５～６４岁,平均２２．２６岁,发病年龄以１０～３０岁多见,共２４例,占５３．３％,２０岁以前发病２４例,占５３．３％。局限型１８例,泛发型中以面部四肢肢端为主者４例,寻常型２３例,４５例均为进展期。治疗方法①口服强的松１５ｍｇ,小儿（１２岁以下）１０ｍｇ,每晨７～８时顿服。２月为１疗程,见效…     

多重巢式RT-PCR技术在急性髓系白血病中的应用

Objective To analyse the fusion genes derived from chromosome structural aberrations in acute myeloid leukemia(AML) and the relationship between fusion genes and the MICM classification, clinical diagnosis, chemotherapy and prognosis. Methods The expression of fusion gene in bone marrow samples was detected with multiplex RT-PCR technique and chromosome karyotypes, immunological phenotypes and clinical data were analyzed in 60 acute myeloid leukemia newly diagnosed. Results 37 cases(61.67 %) of 60 patients carried 5 kinds of fusion genes consisting of MLL-AF9, TLS-ERG, CBFβ-MYH1, AML1-ETO and PML-RARα. The activation of oncogene HOX11 was detected in 13 AML cases, three of them with other chromosome aberration simultaneously.23 cases of 31 patients carrying AML1-ETO or PML-RARα, reached complete remission(CR) after chemotherapy and without relapse. Conclusion Gene typing is the most precise classification method that can direct clinical treatment and evaluate prognosis. Multiplex RT-PCR technique, which can quickly screen 29 kinds of fusion gene derived from chromosome structural aberrations at one time, maybe helpful to improve M1CM classification and guide the choice of treatment.     

美能与拉米夫定治疗乙肝肝纤维化30例

目的 观察美能与拉朱夫定联合用药对抑制肝纤维化的作用。方法 门诊及住院患者60例，随机分为治疗组及对照组，采用美能与拉米夫定联合用药治疗和一般性治疗，疗程6个月。结果 治疗组HBV DNA转阴率明显高于对照组，血清透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（CIV）水平明显下降。结论 美能联合拉米夫定治疗乙肝。抑制乙肝病毒复制的同时，减缓了肝组织的炎症过程及肝纤维化过程，从而阻止了肝脏向肝硬化的转变。     

脂质体介导弓形虫SAG1与SAG3复合基因诱导小鼠免疫应答研究

目的评价弓形虫SAG1与SAG3基因真核表达质粒DNA免疫小鼠的免疫应答效果。方法以PCR方法扩增出SAG1与SAG3目的基因片段,并插入载体pEGFP-N3以构建重组质粒pE- SAG1／SAG3,瞬时转染细胞Cos-7。质粒pESAG1／SAG3以10μg剂量,脂质体介导肌肉注射BALB／c小鼠,免疫3次,最后一次免疫后4周,观察体液和细胞免疫。RT-PCR方法检测注射部位目的基因的转录;斑点杂交方法检测目的基因是否与小鼠染色体基因组整合。结果质粒pESAG1／SAG3转染细胞后观察到绿色荧光;Western blot显示pESAG1/SAG3表达识别条带在相对分子质量(Mr)66．2×103附近。小鼠免疫后,血清产生抗弓形虫速殖子抗体,诱导IFN-γ及IL-2水平高于对照组。RT-PCR显示首次免疫15 d后,目的基因在肌肉组织中仍有转录,斑点杂交显示目的基因未与小鼠的基因组发生整合,混合质粒注射的小鼠抗弓形虫感染的存活时间延长。结论脂质体介导弓形虫SAG1与SAG3复合编码基因质粒接种小鼠能明显诱导体液和细胞免疫应答。     

应用高分辨熔解曲线技术检测经典型苯丙酮尿症患者PAH基因第7外显子基因突变

目的 建立操作简便、快速,使用成本低,结果准确的鉴定PAH基因第7外显子c.728G>A突变热点的基因诊断方法.方法 应用高分辨熔解曲线(high resolution melting,HRM)技术,对山西省临床确诊的88例经典型苯丙酮尿症患儿第7外显子c.728G>A突变热点进行检测,并将检测结果进行测序验证.结果 受检患儿PAH基因第7外显子c.728G>A突变位点HRM技术检测结果和测序结果完全相符.结论 高分辨熔解曲线技术操作简便、快速,使用成本低,结果准确,可作为PAH基因第7外显子热点突变的快速、灵敏检测方法.     

GJB2基因V27I和E114G位点与耳聋相关性的研究

目的通过对127例耳聋患者和127例健康人GJB2基因测序,探讨V27I和E114G位点与耳聋发生及发展的相关性。方法采用聚合酶链式反应(PCR)扩增所有标本的GJB2基因区段,测序分析扩增产物。结果 V27I+E114G双杂合和V27I+E114G非双杂合突变,在127例耳聋患者中分别检测到37和14例患者,127名对照组成员中分别检测到18和12名成员,SPSS 13.0统计软件分析,V27I+E114G双杂合、V27I+E114G非双杂合在耳聋组和对照组中均无显著相关性(P>0.05)。此外,3个家系的患者GJB2基因均显示V27I+E114G双杂合,家系其他成员为V27I+E114G非双杂合。结论部分家系研究结果提示V27I+E114G双杂合可能是引发耳聋的一个原因,因此,深入探讨V27I+E114G双杂合在耳聋发生发展中的作用,为明确病因及预防耳聋发生提供理论基础。     

藻酸双酯钠治疗淤胆型肝炎30例疗效观察

胆汁淤积型肝炎简称淤胆型肝炎,多指多种原因所致的肝内胆道系统胆汁淤积胆汁分泌减少,血液中胆汁成分停滞状况而言。临床上以各型肝炎病毒感染和某些药物所致者较为常见,治疗上主要为降低血清总胆红素水平,缩短黄疸期尤其是缩短高胆红素血症时期,是减少本病并发症,...     

bcr／abl特异性siRNA真核表达载体的构建及鉴定

目的:构建ber/abl的特异性siRNA真核细胞表达载体,并初步探索对K562细胞bcr/abl mRNA和P210蛋白的影响.方法:根据GenBank数据库提供的bcr/abl基因核苷酸序列,按照Tusch Ⅰ设计原则,选择设计双链小干扰RNA(siRNA),再转化为能表达其小发卡结构RNA(shRNA)的DNA序列,并与pTER质粒定向连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子H1的真核表达载体pTER117,经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定;在脂质体的介导下转染K562细胞,用RT-PCR分析bcr/abl mRNA的表达,细胞化学染色检测P210蛋白的表达.结果:构建bcr/abl融合基因siRNA真核表达载体pTER117经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致,转染K562细胞24 h后,pTER117使bcr/abl mRNA的相对水平下降50%,使P210蛋白下降47%.结论:bcr/abl融合基因siR-NA真核细胞表达载体构建成功,并有效干扰K562细胞bcr/abl的表达.     

一株沃氏葡萄球菌耐药基因的研究

目的:研究沃氏葡萄球菌多重耐药情况和相关机制。方法:采用聚合酶链反应(PCR)法对一株多重耐药沃氏葡萄球菌进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因、大环内酯-林可酰胺-链阳菌素B类(MLSB)基因、四环素类基因、糖肽类基因、消毒剂基因检测。结果:PCR结果显示该株的mecA,TEM,ermA,ermC,msrA,msrB,aac(6′)/aph(2″),qacA基因均为阳性,ant(4′,4″),aph(3′)-,TetM,vanA,vanB基因均为阴性。结论:该株沃氏葡萄球菌存在多重耐药基因,而且对胺类、胍类消毒剂耐受。