多重巢式RT-PCR技术在急性髓系白血病中的应用

 目的　探讨急性髓系白血病（AML）染色体畸变所形成的融合基因与MICM分型及临床诊断、治疗、预后的关系。方法　采用多重巢式RT-PCR方法对60例AML患者的融合基因联合染色体核型、免疫表型、临床资料进行研究。结果　60例AML中有37例（61.67 %）具有5种融合基因：MLL-AF9、TLS-ERG、CBFβ-MYH1、AML1-ETO、PML-RARα。13例患者有HOX11原癌基因活化,10例为单纯表达HOX11原癌基因活化,3例同时伴有其他融合基因表达。伴AML1-ETO、PML-RARα的31例患者中接受化疗的23例全部达完全缓解（CR）,且无复发。结论　基因分型是AML最精确的分型方法,可为临床化疗提供指导。采用多重巢式RT-PCR方法可快速同时检测急性白血病29种染色体畸变所形成的融合基因,完善白血病的MICM分型,指导临床个体化治疗。     

bcr-abl基因真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达

目的 构建慢性粒细胞白血病bcr-abl融合基因的真核表达载体,并在哺乳动物细胞COS-7中高效表达.方法 提取慢性粒细胞白血病K562细胞的RNA,经RT-PCR技术扩增得到bcr-abl基因后,将其克隆入真核表达载体pEGFP-N3中,并进行PCR和酶切鉴定.鉴定为阳性的克隆,再进一步进行测序分析.将构建成功的真核表达载体转入COS-7细胞中进行瞬时表达.结果 反转录PCR扩增后的产物,经琼脂糖凝胶电泳可以在约874 bp处看见一特异性的条带,序列分析证明扩增产物与GeneBank中的bcr-abl基因序列相同.将pEGFP-bcr-abl真核表达载体转入COS-7细胞后,经RT-PCR、Western blotting检测证明表达产物正确.结论 成功构建了含有bcr-abl融合基因的真核表达质粒,从而为进一步研究其结构和功能,寻找CML诊疗的新方法奠定了基础.     

多重巢式RT-PCR技术在急性髓系白血病中的应用

Objective To analyse the fusion genes derived from chromosome structural aberrations in acute myeloid leukemia(AML) and the relationship between fusion genes and the MICM classification, clinical diagnosis, chemotherapy and prognosis. Methods The expression of fusion gene in bone marrow samples was detected with multiplex RT-PCR technique and chromosome karyotypes, immunological phenotypes and clinical data were analyzed in 60 acute myeloid leukemia newly diagnosed. Results 37 cases(61.67 %) of 60 patients carried 5 kinds of fusion genes consisting of MLL-AF9, TLS-ERG, CBFβ-MYH1, AML1-ETO and PML-RARα. The activation of oncogene HOX11 was detected in 13 AML cases, three of them with other chromosome aberration simultaneously.23 cases of 31 patients carrying AML1-ETO or PML-RARα, reached complete remission(CR) after chemotherapy and without relapse. Conclusion Gene typing is the most precise classification method that can direct clinical treatment and evaluate prognosis. Multiplex RT-PCR technique, which can quickly screen 29 kinds of fusion gene derived from chromosome structural aberrations at one time, maybe helpful to improve M1CM classification and guide the choice of treatment.     

辛伐他汀在缺血性脑血管病二级预防的临床应用

目的：观察辛伐他汀在缺血性脑血管病二级预防中的效果。方法：120例随机随机分为两组,他汀组用辛伐他汀20mg＋肠溶阿司匹林75mg,对照组用肠溶阿司匹林。结果：随访12个月,他汀组再发TIA、非致死性脑梗死、主要终点发生率分别为6．56％、2．20％、11．24％,均显著低于对照组的23．56％、18．58％、45．63％（P〈0．05）,死亡率两组比较差异无显著性。结论：辛伐他汀能明显减少卒中的复发率,死亡率亦有所下降;不良反应轻微,可保证长期服用。     

山西汉族人群先天性巨结肠症患儿EDNRB基因多态性研究

目的研究先天性巨结肠(Hirschsprung disease,HSCR)内皮素受体B(EDNRB)基因外显子1-4的特征,探讨EDNRB与HSCR的关系。方法通过测序及序列比对的方法对山西汉族80例先天性巨结肠患儿进行序列分析,以确定其突变和多态位点。结果在第4外显子发现多态位点c831G→A,引起亮氨酸的同义突变(L277L)。其中AA发生率为30.0%(24/80),AG发生率为50.0%(40/80),GG发生率为20.0%(16/80)。A等位基因频率为0.55,G等位基因频率为0.45。未发现其他已报道突变及多态位点。结论 HSCR可检测到EDNRB基因多态性改变,可能是疾病的易感基因。     

高分辨熔解曲线技术快速检测Leber遗传性视神经病变11778致病突变位点

目的探索一种简洁、快速、准确的临床基因检测Leber＇s遗传性视神经病变（LHON）mt 11778致病突变位点新方法。方法采用高分辨熔解曲线技术（HRM）及测序,对山西不明原因引起视力下降的患者31例及其患者母系家属19例进行mt11778位点分析。结果 31患者HRM分析存在4种不同的波形图,测序结果与之相符。20%患者存在mt 11778 G→A,10%患者存在mt 11794 T→C、mt 11779 C→T,100%患者存在mt 11719 G→A多态位点。突变的患者家属分析结果符合母系遗传规律。结论 HRM技术能快速准确地将一个碱基的差异区分开,未来在临床基因检测中有更广泛的应用前景。     

皮肤蝇蛆病1例

<正>1临床资料患者男,24岁。背部下方出现皮肤起结节8天。赴尼日利亚拉各斯(Lagos)工作人员,8天前背部下方出现针刺样疼痛和瘙痒,未予治疗。7天前回国,发现背部下方疼痛处皮肤出现数个较小的红色皮疹,并逐渐增大形成结节,结节中央见小孔,流出淡黄色液体,伴疼痛(图1)。1天前被家人发现结节中央小孔内有异物蠕动,挤压其中4个结节,各挤出一条约1.0cm长灰白色蠕动的蛆样虫体。患者自患病以     

影响外源DNA导入哺乳动物细胞的相关因素研究

目的：建立适合本实验室的标准化转染方法。方法：采用磷酸钙－DNA共沉淀转化法将多组重组质粒导入HeLa细胞,观察其转化效率的相关影响因素。结果：待转化的细胞应为单层略稀疏的对数生长期细胞,重组质粒DNA的浓度为8μg/100mL-10μg/100mL培养瓶,转化时间为10h,G418是在转化后24h加入,浓度为200μg/mL,结论：重组质粒DNA导入哺乳动物细胞方法的标准经为外源基因在哺乳动物细胞中的高效表达创造有利条件。     

SAG3基因在肾移植患者弓形虫感染诊断中的应用

目的:建立快速、特异、敏感诊断肾移植患者弓形虫感染情况的DNA检测方法,并讨论其临床意义.方法:利用ELISA和PCR方法对68例肾移植受者及20例正常供者同时进行检测.结果:检测肾移植受者68例,PCR和ELISA方法检测弓形虫SAG3基因片段和其抗原,阳性各为5例及4例;其阳性率分别为7.35%和5.91%.作为阴性对照的20名正常者同时进行弓形虫的检测,其结果均为阴性.结论:体外扩增弓形虫SAG3基因的方法具有准确、快速、特异和敏感的优点,可以作为肾移植患者弓形虫感染诊断的有价值的方法之一.     

羊痘一家4例报告

报告一家 4例先后患羊痘及治疗情况。