间隙连接蛋白40基因多态性与原发性高血压病的相关性研究

目的：探讨间隙连接蛋白40基因（44和＋71位点）多态性与原发性高血压（EH）的相关性。方法运用聚合酶链反应PCR技术对210例原发性高血压病住院患者,对照组158例体检正常人的 Cx40基因的44和＋71位点基因多态性、基因型、等位基因分布频率等进行统计学分析。结果病例组三酰甘油、钙、高密度脂蛋白（HDL）与对照组有统计学意义（P〈0.05）,CX40基因44位点基因型病例组和对照组构成比总体及男性均存在统计学意义（P〈0.05）,＋71位点无统计学意义（P〉0.05）。Logistic回归提示44位点 AA基因型、三酰甘油、钙的OR值分别是4.458、4.1330、0.195,P分别是0.039、0.001、0.014。结论 Cx40基因启动子区域44位点 AA基因型可能是男性高血压人群的危险因素,高三酰甘油为危险因素,高钙为保护因素。     

弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究Ⅰ.pcDNA3-ROP1真核表达重组质粒的构建

目的构建弓形虫ＺＳ２株ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１真核表达重组质粒,为进一步表达及ＤＮＡ免疫做准备。方法用ＰＣＲ技术从弓形虫ＺＳ２分离株的基因组ＤＮＡ中扩增编码棒状体蛋白１（ＲＯＰ１）的基因片段,重组入ｐＵＣ１８克隆载体。将ｐＵＣ１８－ＲＯＰ１中的ＲＯＰ１外源基因片段经酶切、连接等反应,亚克隆入ｐｃＤＮＡ３真核表达载体,再经含氨苄ＬＢ培养基筛选,酶切、ＰＣＲ鉴定。结果从ＺＳ２株基因组ＤＮＡ中扩增出特异的ＲＯＰ１基因片段,克隆成功ｐＵＣ１８－ＲＯＰ１;经亚克隆,筛选鉴定获得了ｐｃＤＮＡ－ＲＯＰ１重组质粒。结论构建成功弓形虫ｐＵＣ１８－ＲＯＰ１重组质粒,亚克隆成功ｐｃＤＮＡ－ＲＯＰ１重组质粒,为下一步研究奠定了基础     

含弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究Ⅲ.免疫鼠肌组织表达产物免疫酶法定位及血清IgG抗体测定

目的　用所构建的弓形虫ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１ 真核表达重组质粒,经肌肉注射免疫小鼠,观察它在肌组织中的表达及不同免疫途径所诱导的体液免疫应答。方法　碱裂解法大量制备ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１ 质粒,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,每只鼠注射１００ｕｇ,两周后同量加强免疫一次,以ｐｃＤＮＡ３ 空质粒及生理盐水组为对照。于免疫后第５０ 天用间接免疫酶法检测注射局部肌组织重组蛋白的表达;ＥＬＩＳＡ法测定ＩｇＧ抗体滴度。结果　免疫鼠肌组织石蜡切片呈特异性阳性反应;血清ＩｇＧ抗体９０天后测定为阳性;皮下及肌肉不同免疫途径血清均显示阳性结果,无显著性差异。结论　ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１质粒ＤＮＡ 免疫小鼠后,肌组织内有重组蛋白表达,并能诱导机体产生ＩｇＧ抗体     

弓形虫P30基因DNA免疫小鼠诱导的细胞免疫应答

目的用pcDNA_3－P30真核表达质粒直接免疫小鼠,观察所诱导的小鼠细胞免疫应答。方法大量制备量级质粒pcDNA_3－P30,经肌肉注射BALB／c小鼠,每隔3周接种1次,一共免疫3次。用MTT方法对脾脏的NK杀伤细胞率和淋巴细胞的转化率进行测定,采用免疫荧光法对CD4 、CD8 细胞进行测定。结果实验组NK细胞杀伤率为：70．0％±3．64,对照组及空白对照组分别为48．5％±6．06和470％±5．93,实验组NK细胞活性比对照组明显增高（P＜0．05）;ConA刺激小鼠淋巴细胞转化实验,实验组与对照组及空白对用级差异无显著性（P＞0．05）;对T淋巴细胞亚群CD4＋、CD8＋进行动态分析,可见随着感染时间的延长,CD8＋的数量逐渐上升,CD4＋／CD8＋的比率逐渐下降,实验组与对照组及空白对照有明显差异（P＜0．05）。结论重组质粒pcDNA3-p30免疫BALB／c小鼠可诱导一定的细胞免疫。     

干扰素与阿地福韦序贯治疗慢性乙型肝炎疗效分析

目的:分析干扰素与阿地福韦序贯治疗慢性乙型肝炎疗效。方法:40例乙型肝炎患者随机分成2组-序贯治疗组和单用组。序贯组应用a-2b干扰素500万单位,隔日1次,肌内注射。30 d后换用阿地福韦,10 mg,1 d1次,口服。连用5 mon。单用组应用阿地福韦,10 mg,1 d 1次,口服,疗程6 mon。观察干扰素和阿地福韦的不同用药方式对患者血清学指标及病毒标志物的影响。结果:干扰素、阿地福韦序贯治疗与单用阿地福韦的疗效比较有显著差异,序贯组疗效优于单用组。结论:干扰素和阿地福韦序贯治疗可用于治疗慢性乙型肝炎的首选治疗。     

弓形虫SAG1基因在HeLa细胞表达的研究

目的：研究弓形虫SAG1基因在HeLa细胞中的表达,为研制弓形虫疫苗奠定基础。方法：采用磷酸钙-DNA共沉淀转化法将重组质粒pcDNA3-SAG1导入HeLa细胞,用G418进行选择培养,筛选出表达阳性的细胞克隆,再通过培养和加压,建立稳定分泌SAG1抗原的阳性HeLa细胞克隆株,分离表达产物,进行SDS-PAGE、Western blot分析。结果：采用钙沉淀法成功地将重组质粒SAG1导入HeLa细胞,通过G418选择和加压培养,获得稳定分泌SAG1抗原的阳性HeLa细胞,表达的蛋白经SDS-PAGE、Western blot分析,显示其分子量30kDa蛋白,与理论值相符。结论：成功构建重组质粒pcDNA3-SAG1,建立稳定分泌SAG1抗原的阳性HeLa细胞克隆株。     

弓形虫ZS2株抗原基因的扩增及克隆

扩增弓形虫ZS2株P30抗原基因,构建PcDNA3—P30真核表达重组质粒。方法本文采用PCR技术,自行设计一对寡核苷酸引物（P1,P2）,从弓形虫ZS2基因组DNA中特异扩增出编码P30抗原的基因片段。扩增的目的片段经纯化后用EcoRI和Hind双酶切后,克隆到真核表达质粒pcDNA3中,转化入大肠杆菌TG1,用氨共青霉素和PCR初筛,将PCR扩增阳性的重组子用EcoRI和Kind双酶切鉴定。结果从弓形虫ZS2株DNA中扩增出1025bP的P30基因,构建重组质粒PcDNA3—P30,酶切产物的大小分别与预期相符。结论成功地对弓形虫ZS2株P30基因进行体外扩增及构建真核表达重组质粒PcDNA3—P30,为重组P30抗原及核酸疫苗研究做好准备。     

弓形体SAG1基因DNA诱导小鼠体液免疫应答及保护性研究

目的 :用重组真核表达质粒 pc DNA3- SAG1直接免疫 BAL B/ c小鼠 ,观察其 DNA免疫所诱导的小鼠体液免疫反应和保护性作用。方法 :大量制备重组质粒 pc DNA3- SAG1,然后将其导入 BAL B/ c小鼠体内。抗体滴度用 EL ISA法进行测定 :采用 PCR方法对小鼠的血液组织外源基因进行检测 ;对试验组及对照组进行 RH株攻击感染 ,并对其进行分析。结果 :用 EL ISA法检测的抗体 Ig G滴度为 1∶ 2 5 6 0 ;免疫后三周、六个月从免疫鼠的血液组织中用 PCR仍可检测到特异的SAG1基因的存在 :体外弓形虫攻击感染实验组和对照组 ,可见实验组的存活时间较对照组时间延长 (P<0 .0 5 )。结论 :重组质粒 pc DNA3- SAG1免疫 BAL B/ c小鼠可诱导一定的体液免疫应答和一定的保护性作用     

胸部肿瘤患者放化疗后真菌感染的菌种分布特征和诱发真菌感染的危险因素

目的 探讨胸部肿瘤患者放化疗后真菌感染的菌种分布特征和诱发真菌感染的危险因素。方法 选取2020年1月—2022年1月在黄石中心医院就诊的胸部恶性肿瘤放化疗后真菌感染患者60例（真菌组）,同时选取放化疗后无病原菌感染患者180例（无感染组）作为对照,分析真菌感染分布及药敏情况以及真菌组和无感染组患者临床资料差异。结果 真菌感染以呼吸道部位感染最多,占50.00%;真菌种类以白色假丝酵母菌为主,占53.33%。白色假丝酵母菌、热带假丝酵母菌和光滑假丝酵母菌对抗真菌药物均有不同程度耐药,其中对酮康唑耐药率最高,分别达到21.88%、28.57%和37.50%。真菌组患者年龄>50岁、有糖尿病、临床分期Ⅲ～Ⅳ、有侵入性操作、使用激素、抗生素使用时间>14d、抗生素使用种类≥2种、KPS评分<80分、Hb水平<110g/L、ALB水平<40g/L比例分别为65.00%、46.67%、68.33%、55.00%、56.67%、48.33%、60.00%、45.00%、35.00%和36.67%,明显高于无感染组（P<0.05）。Logistic回归分析显示：年...     

多重巢式RT-PCR技术在急性髓系白血病中的应用

 目的　探讨急性髓系白血病（AML）染色体畸变所形成的融合基因与MICM分型及临床诊断、治疗、预后的关系。方法　采用多重巢式RT-PCR方法对60例AML患者的融合基因联合染色体核型、免疫表型、临床资料进行研究。结果　60例AML中有37例（61.67 %）具有5种融合基因：MLL-AF9、TLS-ERG、CBFβ-MYH1、AML1-ETO、PML-RARα。13例患者有HOX11原癌基因活化,10例为单纯表达HOX11原癌基因活化,3例同时伴有其他融合基因表达。伴AML1-ETO、PML-RARα的31例患者中接受化疗的23例全部达完全缓解（CR）,且无复发。结论　基因分型是AML最精确的分型方法,可为临床化疗提供指导。采用多重巢式RT-PCR方法可快速同时检测急性白血病29种染色体畸变所形成的融合基因,完善白血病的MICM分型,指导临床个体化治疗。